Тестостероновий гель, що містить пропіленгліколь як підсилювач проникаючої здатності

1. Фармацевтична композиція, що містить, в мас. % : - від 0, 5 до 5,0 тестостерону, - від 40,0 до 75,0 щонайменше одного С2-С6 спирту, - від 0,1 до 5,0 щонайменше однієї желеутворюючої речовини, - від 0, 05 до 5,0 пропіленгліколю, - від 0,05 до 5,0 ізопропілміристату, - необов’язково, воду. 2. Фармацевтична композиція за п. 1, в якій С2-С6 спирт вибрано із групи, що містить етанол, пропан1-ол і пропан-2-ол, а також їх суміші. 3. Фармацевтична композиція за п. 1 або 2, в якій желеутворююча речовина вибрана з групи, що містить полімери на основі акрилової кислоти, карбоксиметилцелюлози, гідроксипропілцелюлози, гідроксіетилцелюлози, похідні целюлози та їх сумішей. 4. Фармацевтична композиція за будь-яким з попередніх пунктів, в якій дана желеутворююча речовина являє собою щонайменше одну желеутво 2 (19) 1 3 87158 Даний винахід відноситься до фармацевтичних композицій і гелів, що містять тестостерон, а також до способів їх використовування. Тестостерон в організмі чоловіків Тестостерон є основним андрогеном, циркулюючим в чоловічому людському організмі, який синтезується з холестеролу Приблизно, 500 мільйонів клітин Лейдіга в яєчках секретують (виділяють) більше 95% від 6-7мг тестостерону, який виробляється за одну добу. Два гормони, що виробляються гіпофізом, а саме, лютеїнізуючий гормон («LH») і фолікулостимулюючий гормон («FSH»), необхідні для розвитку і підтримки у нормальному стані тестикулярної функції і негативного регулювання утворення тестостерону. Циркулюючий тестостерон метаболізується у різні 17кетостероїди по двох різних шляхах. Тестостерон може бути метаболізований у дигідротестостерон («DHT») за допомогою ензиму 5-альфа-редуктази або у естрадіол («Е2») за допомогою ароматазаензимового комплексу. Тестостерон циркулює в крові на 98% пов'язаним з протеїном. В чоловіків, приблизно, 40% зв'язків належить до статевийгормон-зв'язуючого глобуліну високого афінітету («SHBG»). Інші 60% слабко зв'язані з альбуміном. При цьому кількісні вимірювання тестостерону узяті з клінічних лабораторій Надана нижче таблиця з медичного центру UCLA-Harbor Medical Center дає уявлення про концентрацію гормону у нормальних дорослих чоловіків: Рівні гормону у нормальних чоловіків: Тестостерон (загальний) Вільний тестостерон DHT Відношення DHT/T DHT+T SHBG FSH LH Е2 Нормальний діапазон наявності гормонів від 298 до 1043нг/дл від 3,5 до 17,9нг/дл від 31 до 193нг/дл від 0,052 до 0,33 від 372 до 1349нг/дл від 10,8 до 46,6нмол/л від 1,0 до 6,9мл а.о.м.*/мл від 1,0 до 8,1мл а.о.м.*/мл від 17,1 до 46,1пг/мл • * а.о.м. - атомна одиниця маси В літературі зустрічаються повідомлення про терміни напівжиття тестостерону, які становлять від 10 до 100 хвилин. Проте дослідники, дійсно, погоджуються з тим, що циркулюючий тестостерон відрізняється добовими коливаннями у нормальних молодих чоловіків. Максимальні рівні виникають, приблизно, від 6:00 до 8:00 ранку, при цьому рівні знижуються протягом дня. Характеристичні профілі мають максимальний рівень тестостерону 720нг/дл і мінімальний рівень тестостерону 430нг/дл. Проте, фізіологічна значущість такого добового циклу, якщо він спостерігається, не ясна. Тестостерон у жінок Виділення андрогенних стероїдів з сечею у дорослих жінок було продемонстроване більше 50 4 років тому назад. З тих пір фізіологи і клініцисти досліджують джерела і біологічні функції тестостерону і інших ендогенних андрогенних гормонів в організмі жінки. Відомо, що у жінок андрогени секретуються яєчниками і наднирковими залозами. Кожне джерело виробляє близько 50% тестостерону (безпосередньо або через попередника) від загальної кількості, яка складає, приблизно, до 300мкг тестостерону, що виробляються щодоби в здоровому «циклюючому» жіночому організмі. Якщо несприятлива дія надмірного вироблення андрогену, що має місце при синдромі полікістозного яєчника і деяких андроген-утворюючих пухлинних новоутвореннях, була досконально описана, то нормальна фізіологічна дія андрогенів на процеси, що відбуваються в жіночому організмі, ще мало вивчена. Виходячи з результатів експериментів, що проводяться над тваринами, фізіологія чоловічого організму і симптоми жіночого організму з дефіцитом вироблення андрогену, основні фізіологічні вияви наявності андрогену в нормальному організмі жінки включають, але не обмежуються анаболічними ефектами, що виявляються в стані м'язів, шкіри, волосся і кісток; стимулюючою дією на еритро(цито)поез; модулюючою дією на імунні функції; психологічною дією на настрій, самопочуття і сексуальну функцію. Крім того, ендогенні андрогени грають важливу роль в зростанні лобкового волосся, причому існує припущення, що вони модулюють дію естрогену і прогестинів на різноманітність репродуктивних тканин-мішеней. Крім того, існує упевненість в тому, що андрогени грають важливу роль в модуляції секреторної функції слізних залоз. П'ятдесят відсотків циркулюючого тестостерону є похідними від прямої секреції яєчників в клітини слизистої оболонки, яка здійснюється під контролем лютеїнізуючого гормону. Інша половина є похідною від периферійної конверсії дегідроепіандростерону, андростенедіону і дегідроепіандростерон-сульфату попередників андрогену надниркової залози. Тестостерон може бути також перетворений в дигідротестостерон або естрадіол. Таким чином, тестостерон виконує функцію, як гормону, так і прогормону. Тестостерон циркулює в крові на 98% пов'язаним з протеїном. В жінок, приблизно 66% зв'язків представляють собою статевий гормон-зв'язуючий глобулін високого афінітету. Інші 34% характеризуються слабким зв'язком з альбуміном. При цьому цілий ряд вимірювань тестостерону отримані з клінічних лабораторій. Впорядкованість афінітету стероїдів, найбільш сильно зв'язаних статевий гормон-зв'язуючим глобуліном, є наступною: дигідротестостерон>тестостерон>андростенедіон>естрадіол>естр он. Статевий гормон-зв'язуючий глобулін більш інтенсивно зв'язує дигідротестостерон, чого не можна сказати про дигідротестостерон-сульфат. Надана нижче таблиця демонструє приблизні гормональні рівні у нормальної жінки у віці, попередньому до менопаузи. 5 87158 6 Гормональні рівні у нормальної жінки у віці, попередньому до менопаузи Гормон Тестостерон (нмол/л) Вільний тестостерон (пмол/л) % Вільного тестостерону від загальної кількості тестостерону Лютеїнізуючий гормон (IU(вакцинуюча доза)/л) Фолікулостимулюючий гормон (IU(вакцинуюча доза)/л) Статевий гормон-зв'язуючий глобулін (нмол/л) На відміну від станів, визначених дефіцитом інших гормонів, стан, визначений дефіцитом тестостерону в жінок, повсюдно не сприймається як дійсно існуючий клінічний стан. Проте, існує цілий ряд чітко визначених об'єктів (пацієнтів), в яких вироблення андрогену характеризується явним дефіцитом, причому у зв'язку із даними випадками вже існує опис їх асоційованої симптоматології, включаючи, наприклад, молодих ооваріектомізованих/гісторектомізованих жінок (жінок, що перенесли операції по видаленню яєчників/матки), жінок, що характеризуються входженням в період менопаузи після естроген-заміщувальної терапії, жінок після орального прийому контрацептивів, жінок з дисфункцією надниркових залоз, жінок з кортикостероїд-індукованим придушенням функції надниркових залоз, а також жінок, інфікованих вірусом імунодефіциту людини (ВІЛ). Оскільки підвищення концентрацій тестостерону змінює сексуальну активність і лібідо, дослідники вивчили способи введення тестостерону в організм чоловіків, а також і жінок. Ці способи включають внутрішньом'язові ін'єкції, оральне вживання, імплантати у вигляді кульок, гранул і трансдермальних накладок. Проте дані способи введення тестостерону страждають одним або декількома недоліками. Наприклад, підшкірні імплантати у вигляді кульок, гранул і т.п., а також ін'єкції ефіру болючі і вимагають хірургічного втручання та/або відвідання лікаря. Крім того, у гіпогонадальних чоловіків терапія імплантації включає ризик екструзії (виштовхування) (8,5%), кровотечі (2,3%) або зараження (0,6%). Багато які з цих способів, що пов'язані з оральними/под'язичними/трансбукальними препаратами, мають небажані фармакокінетичні профіль-утворюючі суперфізіологічні тестостеронові концентрації, за якими слідує повернення в початковий стан. Трансдермальні накладки не забезпечують оптимальних фармакокінетичних характеристик, крім того, вони викликають незручності для багато яких об'єктів використовування і пов'язані із значними подразненнями шкірного покриву. На додаток до сказаного, треба зазначити, що такі накладки не забезпечують гнучкості в дозуванні, візуально непривабливі і мають тенденцію відвалюватися, особливо під час фізичних вправ, що супроводяться різкими рухами. Оральний прийом призводить до вироблення незадовільних рівнів тестостерону і до непередбачуваної картини абсорбції (лікарської речовини) у пацієнтів. Більш того, оскільки печінка метаболізує препарат, існує не Середнє значення +/Серединне Діапазон sd(стандартне відхилення) значення 1,20+/-0,69 0,98 0,4-2,7 12,80+/-5,59 12,53 4,1-24,2 1,4+/-1,1 1,1 0,4-6,3 7,2+/-3,3 4,7+/-3,6 66,1+/-22,7 6,7 4,2 71,0 3,0-18,7 1,5-21,4 17,8-114,0 безпека його токсичної дії на печінку, не говорячи вже про основний шлях метаболізму. Не так давно однопроцентний гель тестостерону був схвалений як препарат для чоловіків. Даний препарат характеризується гнучкістю дозування і має не більше ніж мінімальну подразнювальну дію на шкіру. Гель існує на комерційному ринку Сполучених Штатів Америки і захищений товарним знаком AndroGelÒ, Unimed Pharmaceutical, Inc., DeerfieldJII., Solvay Pharmaceutical, Inc.Co., Marietta, GA30062. Склад AndroGelÒ Склад AndroGelÒ речовина Тестостерон Карбопол 980 Ізопропілміристат 0,1N NaOH Етанол (95% об'єм/об'єм) Очищена вода (qsf) Кількість (вага/вага) на 100г гелю 1,0г 0,90г 0,50г 4,72г 72,5г* 100г • відповідає 67г абсолютного етанолу Даний винахід забезпечує фармацевтичні композиції, гелі, що містять тестостерон, і способи їх використовування. Більш конкретно, даний винахід забезпечує водно-спиртові/спиртові фармацевтичні композиції і гелі, придатні для поверхневого і трансдермального застосування, причому, дані композиції містять пропіленгліколь. Крім того, на додаток до здатності дуже ефективно доставляти тестостерон до призначеної цілі, композиція за даним винаходом дуже приваблива естетично. Було знайдено, що пропіленгліколь має високу потенційну здатність підсилювати проникаючу здатність композиції за даним винаходом, і може використовуватися як одиночний підсилювач проникаючої здатності препарату, так і в поєднанні з іншим(и) підсилювачем(ами) проникаючої здатності, наприклад, з ізопропілміристатом. Даний винахід відноситься до фармацевтичної композиції, що містить тестостерон, щонайменше, один С2-С6 спирт, щонайменше, один желеутворюючий агент, принаймні, один підсилювач проникаючої здатності і воду. Дана фармацевтична композиція може бути виготовлена в різних формах, наприклад, у вигляді гелю, розчину, крему, лосьйону, розпилюваного розчину, мазі, аерозолі. Переважною формою даної фармацевтичної композиції є гель. 7 87158 8 здатністю прискорювати введення лікарської реТермін «тестостерон» в контексті даного виначовини або активного першоджерела (елемента) ходу відноситься не тільки до, власне, тестостерочерез шкірний покрив. Дані речовини також зустріну, але також і до енантіомерів, ізомерів, таутомечаються під назвою прискорювачів проникнення, рів, солі, хелатів, ефірів, амідів, похідних і προад'ювантів і промоторів абсорбції. Даний клас медикаментів, а також їх попередників, наприклад, включає речовини з різними механізмами дії, які, DHT (дигідротестостерону), 17наприклад, здатні поліпшувати розчинність лікарметилтестостерону, 17[альфа]-метил-тестостерон ських речовин і їх здатність дифундувати, а також 3-циклопентиленолефіру, тестостероненантату, речовини, які поліпшують трансдермальну абсортестостеронципїонату, тестостеронундеканоату, бцію шляхом зміни здатності stratum corneum тестостеронциклодекстрину, тестостеронбіциклаутримувати вологу, сприяють пом'якшенню шкіри, ту. Відповідно до винаходу тестостерон може бути поліпшенню її проникності, діючи як активізатори природного походження або результатом синтезу проникаючої спроможності або як речовини, що або напівсинтезу. сприяють відкриванню фолікул волосся, або тимСпирти С2-С6 відомі з рівня техніки. Перелік часово змінюють стан шкіри, наприклад, її граничтаких спиртів включає етанол, пропанол, ізопроний шар. панол (пропан-2-ол), бутанол, Бутан-1-ол, Бутан-2Якщо інше не обумовлене, процентний вміст ол, тер-бутанол, пентаноли, гексаноли. Перевага (%) співвідноситься з ваговими кількостями, виховіддається етанолу, оскільки він забезпечує ефекдячи із загальної ваги композиції. тивність трансдермального проникнення тестостеВідповідно до одного з аспектів даного винарону при швидкому випаровуванні під час контакту ходу, вказана фармацевтична композиція містить зі шкірою. від 0,5 до 5,0% (вага/вага), переважно, від 0,5 до Желеутворюючі агенти також відомі з рівня 2,5% (вага/вага), більш переважно, від 0,6 до 2,0% техніки. Термін «желеутворюючий агент», в основ(вага/вага), ще більш переважно, від 0,7 до 1,5% ному, відноситься до сполуки, можливо, полімер(вага/вага), і ще більш переважно, від 0,75 до ної природи, що має здатність до желеутворення 1,25% (вага/вага), навіть ще більш переважно, від при контакті із спеціальним розчином, наприклад, 0,8 до 1,2% (вага/вага), і навіть ще більш переважводою. Желеутворюючі агенти сприяють підвино, від 0,9 до 1,1% (вага/вага), а найбільш переващенню в'язкості фармацевтичних композицій віджно, близько 1,0% (вага/вага) тестостерону. повідно до даного винаходу, але, крім того, вони Відповідно до іншого аспекту даного винаходу, можуть виконувати роль розчинювальних агентів. вказана фармацевтична композиція містить від 0,5 Прикладами желеутворюючих речовин можуть до 5,0% (вага/вага), переважно, від 0,5 до 2,5% служити аніонні полімери, наприклад, полімери на (вага/вага), більш переважно, від 0,75 до 2,25% основі акрилової кислоти (включаючи полімери на (вага/вага), ще більш переважно, від 0,9 до 2,0% основі поліакрилової кислоти, наприклад, (вага/вага), і ще більш переважно, від 1,0 до 1,8% CARBOPOLÒ виробництва B.F. Goodrich Specially (вага/вага), навіть ще більш переважно, від 1,25 до Plymers та Chemical Division Cleveland, Ohio), похі1,75% (вага/вага), і навіть ще більш переважно, від дні целюлози, полоксамери і полоксаміни, більш 1,3 до 1,6% (вага/вага), а найбільш переважно, конкретно, Карбомери або полімери на основі акблизько 1,5% (вага/вага) тестостерону. рилової кислоти, наприклад, CarbopolÒ 980 або Відповідно до ще одного аспекту даного вина940, 981 або 941, 1382 або 1382, 5984, 2984, 934 ходу, вказана фармацевтична композиція містить або 934Р (полімери CarbopolÒ завжди є полімеравід 40,0 до 75,0% (вага/вага), переважно, від 40,0 ми акрилової кислоти, зв'язаними перехресним до 70,0% (вага/вага), більш переважно, від 45,0 до зв'язком з алільною сахарозою або алілпентаери65,0% (вага/вага), ще більш переважно, від 50,0 до тритолом), Pemulen TR1Ò або TR2Ò, Ultrez, 60,0% (вага/вага), і ще більш переважно, від 52,0 Synthalen CR та інші); похідні целюлози, напридо 58,0% (вага/вага), навіть ще більш переважно, клад, етилцелюлози, гідроксипропілцелюлози, від 53,0 до 57,0% (вага/вага), і навіть ще більш гідроксиетилцелюлози, гідроксипропілметилцелюпереважно, від 54,0 до 56,0% (вага/вага), а найлози (НРМС), карбоксиметилцелюлози (CMC) і більш переважно, близько 56% (вага/вага), приінші; полоксамери або поліетиленнаймні, одного спирту С2-С6. поліпропіленспівполімери, наприклад, LurtolÒ марВідповідно до іншого аспекту винаходу, вказаки 68 або 127, полоксаміни і інші желеутворюючі ний спирт С2-С6 вибирають з групи, що включає агенти, наприклад, цитозан, декстран, пектини і етанол, пропан-1-ол, пропан-2-ол і їх суміші. Пеприродні смоли. Всі з вказаних желеутворюючих реважним спиртом С2-С6 є етанол. агентів, самостійно або в певних поєднаннях, моВідповідно до ще одного аспекту даного винажуть бути використані у фармацевтичних компоходу, вказана фармацевтична композиція містить зиціях за даним винаходом. Дані желеутворюючі від 0,1 до 5,0% (вага/вага), переважно, від 0,15 до речовини можуть бути відібрані, виходячи з показ4,5% (вага/вага), більш переважно, від 0,2 до 4,0% ника рН композиції, відповідної до даного винахо(вага/вага), ще більш переважно, від 0,25 до 3,5% ду, і заданої в'язкості. Ò (вага/вага), і ще більш переважно, від 0,3 до 3,0% Гідроксипропілцелюлоза, Carbopol 980 і (вага/вага), навіть ще більш переважно, від 0,4 до LurtolÒ є особливо переважними, виходячи з кон2,5% (вага/вага), і навіть ще більш переважно, від тексту даного винаходу. 0,5 до 2,0% (вага/вага), а найбільш переважно, З рівня техніки відомі також речовини, що підприблизно, від 0,5 до 1,0% (вага/вага), принаймні, силюють проникаючу спроможності. Термін «підодного желеутворюючого агента. силювач проникаючої спроможності», в основному, відноситься до речовини, яка відома своєю 9 87158 10 Ще в одному з прикладів здійснення даний виВідповідно до ще одного об'єкту даного винанахід розкриває фармацевтичну композицію, що ходу, даний желеутворюючий агент вибирають з включає: групи, до складу якої входять полімери на основі - від 0,8 до 1,2% (вага/вага) тестостерону акрилової кислоти, включаючи целюлозу, включа- від 50,0 до 70,0% (вага/вага), принаймні, одючи ефіри целюлози і її похідні (похідними целюного С2-С6 спирту лози є етилцелюлоза, гідроксипропілцелюлоза, - від 0,1 до 3,0% (вага/вага), принаймні, однієї гідроксиетилцелюлоза, гідроксипропілметилцелюжелеутворюючої речовини лоза (НРМС), карбоксиметилцелюлоза (CMC) і - від 0,3 до 3,0% (вага/вага) пропіленгліколю інші); Карбомери, такі як полімери CarbopolÒ, на- необов'язково, воду. приклад, CarbopolÒ 980 або 940, 981 або 941, 1382 Ще в одному з прикладів здійснення даний виабо 1382, 5984, 2984, 934 або 934Р, Pemulen TR1Ò нахід розкриває фармацевтичну композицію, що або TR2Ò, Ultrez, Synthalen CR і др.); полоксаміни, включає: полоксамери або поліетилен- від 0,9 до 1,1% (вага/вага) тестостерону поліпропіленспівполімери, наприклад, Lurtol. - від 50,0 до 70,0% (вага/вага), принаймні, одВідповідно до ще одного аспекту даного винаного С2-С6 спирту ходу, вказана фармацевтична композиція містить - від 0,1 до 2,5% (вага/вага), принаймні, однієї від 0,1 до 5,0% (вага/вага), переважно, від 0,15 до желеутворюючої речовини 4,5% (вага/вага), більш переважно, від 0,2 до 4,0% - від 0,4 до 2,5% (вага/вага) пропіленгліколю (вага/вага), ще більш переважно, від 0,3 до 3,5% - необов'язково, воду. (вага/вага), і ще більш переважно, від 0,4 до 3,0% Ще в одному з прикладів здійснення даний ви(вага/вага), навіть ще більш переважно, від 0,5 до нахід розкриває фармацевтичну композицію, що 2,5% (вага/вага), а найбільш переважно, від 0,5 до включає: 2,0% (вага/вага) пропіленгліколю. Пропіленгліколь - близько 1,0% (вага/вага) тестостерону є у високому ступені ефективним і сумісним підси- від 50,0 до 70,0% (вага/вага), принаймні, одлювачем проникаючої спроможності відносно вміного С2-С6 спирту сту тестостерону і композицій по даному винаходу. - від 0,1 до 2,5% (вага/вага), принаймні, однієї Крім того, використовування етиленгліколю відпожелеутворюючої речовини відно до даного винаходу забезпечує фармацев- від 0,4 до 2,5% (вага/вага) пропіленгліколю тичним композиціям дуже привабливий вигляд. - необов'язково, воду. Фармацевтичні композиції за даним винаходом Ще в одному з прикладів здійснення даний видуже прозорі і візуально привабливі, вони мають нахід розкриває фармацевтичну композицію, що дуже приємну текстуру, що сприятливо впливає на включає: психічний стан пацієнта. При цьому фармацевтич- від 1,0 до 2,0% (вага/вага) тестостерону ні композиції за даним винаходом не потребують - від 50,0 до 75,0% (вага/вага), принаймні, одвисокого вмісту спиртів. Більш того, композиції за ного С2-С6 спирту даним винаходом дуже стабільні, причому, пропі- від 0,1 до 5,0% (вага/вага), принаймні, однієї ленгліколь отримав оцінку речовини, що добре желеутворюючої речовини поєднується із стандартними нейтралізаторами, - від 0,1 до 5,0% (вага/вага) пропіленгліколю наприклад, триетаноламіном. Композиції за вина- необов'язково, воду. ходом можуть містити декілька підсилювачів проЩе в одному з прикладів здійснення даний виникаючої спроможності. нахід розкриває фармацевтичну композицію, що Відповідно до даного винаходу, дана фармавключає: цевтична композиція може додатково містити во- від 1,25 до 1,75% (вага/вага) тестостерону ду. - від 50,0 до 70,0% (вага/вага), принаймні, одВ одному з прикладів здійснення даний винаного С2-С6 спирту хід розкриває фармацевтичну композицію, що - від 0,1 до 4,0% (вага/вага), принаймні, однієї включає: желеутворюючої речовини - від 0,5 до 5,0% (вага/вага) тестостерону - від 0,2 до 4,0% (вага/вага) пропіленгліколю - від 40,0 до 75,0% (вага/вага), принаймні, од- необов'язково, воду. ного С2-С6 спирту Ще в одному з прикладів здійснення даний ви- від 0,1 до 5,0% (вага/вага), принаймні, однієї нахід розкриває фармацевтичну композицію, що желеутворюючої речовини включає: - від 0,1 до 5,0% (вага/вага) пропіленгліколю - від 1,4 до 1,6% (вага/вага) тестостерону - необов'язково, воду. - від 50,0 до 70,0% (вага/вага), принаймні, одВ іншому прикладі здійснення даний винахід ного С2-С6 спирту розкриває фармацевтичну композицію, що вклю- від 0,1 до 3,0% (вага/вага), принаймні, однієї чає: желеутворюючої речовини - від 0,75 до 1,25% (вага/вага) тестостерону - від 0,3 до 3,0% (вага/вага) пропіленгліколю - від 50,0 до 70,0% (вага/вага), принаймні, од- необов'язково, воду. ного С2-С6 спирту Ще в одному з прикладів здійснення даний ви- від 0,1 до 4,0% (вага/вага), принаймні, однієї нахід розкриває фармацевтичну композицію, що желеутворюючої речовини включає: - від 0,2 до 4,0% (вага/вага) пропіленгліколю - близько 1,5% (вага/вага) тестостерону - необов'язково, воду. - від 50,0 до 70,0% (вага/вага), принаймні, одного С2-С6 спирту 11 87158 12 - від 0,1 до 2,5% (вага/вага), принаймні, однієї добавка ізопропілміристату як додаткового підсижелеутворюючої речовини лювача проникаючої спроможності, у разі викорис- від 0,4 до 2,5% (вага/вага) пропіленгліколю тання разом з пропіленгліколем, призводить до - необов'язково, воду. відчутно поліпшених результатів. Переважно, дана Дана фармацевтична композиція придатна фармацевтична композиція містить від 0,05 до для контрольованого введення тестостерону в 5,0% (вага/вага), більш переважно, від 0,1 до 4,0% організм людини. При цьому дана фармацевтична (вага/вага), ще більш переважно, від 0,15 до 3,5% композиція може наноситися пацієнтом, ним або (вага/вага), і ще більш переважно, від 0,25 до 2,5% нею, самостійно і не вимагає присутності лікаря. (вага/вага), навіть ще більш переважно, від 0,25 до Крім того, введення даної композиції не вимагає ні 2,0% (вага/вага), ще більш переважно, від 0,25 до хірургічного втручання, ні ін'єкцій. 1,5% (вага/вага), від 0,25 до 1,0% (вага/вага), а Перевагою даного винаходу є те, що пропіленнайбільш переважно, від 0,5 до 0,75% (вага/вага) гліколь діє як дуже активний підсилювач проникаізопропілміристату. Відповідно, в одному з приючої спроможності тестостерону, зокрема, в поєдкладів здійснення даний винахід розкриває фарнанні з дозою тестостерону і желеутворюючого мацевтичну композицію, що включає: агента(ів), відповідно до винаходу. - від 0,5 до 5,0% (вага/вага)тестостерону В іншому аспекті фармацевтична композиція - від 40,0 до 75,0% (вага/вага), принаймні, одза винаходом додатково містить основу. Дана осного С2-С6 спирту нова є фармацевтично сумісною і, переважно, - від 0,1 до 5,0% (вага/вага), принаймні, однієї вибирається з групи, що включає триетаноламін, желеутворюючої речовини гідроокис натрію, гідроокис амонію, гідроокис ка- від 0,1 до 5,0% (вага/вага) пропіленгліколю лію, аргінін, амінометилпропанол або трометамін і - від 0,1 до 4,0% (вага/вага) ізопропілміристату їх суміші. Там, де показник рН даної фармацевти- необов'язково, воду. чної композиції не оптимізований для трансдермаВ іншому прикладі здійснення даний винахід льного введення, наприклад, там, де вказаний розкриває фармацевтичну композицію, що вклювище желеутворюючий агент містить, принаймні, чає: один полімер, на основі акрилової кислоті, згадана - від 0,75 до 1,25% (вага/вага) тестостерону основа сприяє забезпеченню нейтралізації фар- від 50,0 до 70,0% (вага/вага), принаймні, одмацевтичної композиції, що заявляється, для наного С2-С6 спирту несення на поверхню людської шкіри. Крім того, - від 0,1 до 4,0% (вага/вага), принаймні, однієї дана основа (нейтралізатор) забезпеч) є оптимажелеутворюючої речовини льне набухання полімерних ланцюгів в процесі - від 0,2 до 4,0% (вага/вага) пропіленгліколю нейтралізації зарядів і формуванні солей поліме- від 0,15 до 2,0% (вага/вага) ізопропілміристарів. Зокрема, коли даний желеутворюючий агент ту містить полімер на основі акрилової кислоти, дана - необов'язково, воду. основа, переважно, містить триетаноламін. Це Ще в одному з прикладів здійснення даний витакож забезпечує композиції за даним винаходом нахід розкриває фармацевтичну композицію, що досягнення оптимальної в'язкості. Кваліфікований включає: фахівець знає, як вибрати відповідну кількість ос- від 0,8 до 1,2% (вага/вага) тестостерону нови для даної композиції, особливо, відносно - від 50,0 до 70,0% (вага/вага), принаймні, одприроди присутнього в композиції желеутворююного С2-С6 спирту чого агенту і вміст в ній спирту, щоб отримати не- від 0,1 до 3,0% (вага/вага), принаймні, однієї обхідне остаточне значення показника рН для дажелеутворюючої речовини ної композиції. Наприклад, за наявності - від 0,3 до 3,0% (вага/вага) пропіленгліколю карбомерів та/або при високому вмісті спирту, - від 0,35 до 1,5% (вага/вага) ізопропілміристатрометамін та/або NaOH можуть бути використані ту як основи в кількості, вибраній так, щоб отримати - необов'язково, воду. задане остаточне значення рН композиції. Крім Ще в одному з прикладів здійснення даний витого, в одному з прикладів здійснення фармацевнахід розкриває фармацевтичну композицію, що тична композиція по справжньому винаходу місвключає: тить від 0,1 до 5,0% (вага/вага), переважно, від - від 0,9 до 1,1% (вага/вага) тестостерону 0,15 до 4,5% (вага/вага), більш переважно, від 0,2 - від 50,0 до 70,0% (вага/вага), принаймні, оддо 4,0% (вага/вага), ще більш переважно, від 0,25 ного С2-С6 спирту до 3,5% (вага/вага), і ще більш переважно, від 0,3 - від 0,1 до 2,5% (вага/вага), принаймні, однієї до 3,0% (вага/вага), навіть ще більш переважно, желеутворюючої речовини від 0,4 до 2,5% (вага/вага), ще більш переважно, - від 0,4 до 2,5% (вага/вага) пропіленгліколю від 0,5 до 2,0% (вага/вага), а найбільш переважно, - від 0,4 до 1,0% (вага/вага) ізопропілміристату від 0,5 до 1,0% (вага/вага) триетаноламіну. - необов'язково, воду. Переважно, значення показника рН фармацеЩе в одному з прикладів здійснення даний вивтичної композиції відповідно до винаходу повинне нахід розкриває фармацевтичну композицію, що складати від 2 до 9, переважно, від 3 до 8, а ще включає: більш переважно, від 3 до 7. - близько 1,0% (вага/вага) тестостерону Відповідно до ще одного аспекту даного вина- від 50,0 до 70,0% (вага/вага), принаймні, одходу фармацевтична композиція, що заявляється, ного С2-С6 спирту додатково містить ізопропілміристат. При ство- від 0,1 до 2,5% (вага/вага), принаймні, однієї ренні винаходу було несподівано знайдено, що желеутворюючої речовини 13 87158 14 - від 0,4 до 2,5% (вага/вага) пропіленгліколю ними дозуваннями, які містять фармацевтичну - близько 0,5% (вага/вага) ізопропілміристату композицію або водо-спиртовий гель, що заявля- необов'язково, воду. ється. Таке пакування фармацевтичної композиції Ще в одному з прикладів здійснення даний виробить її застосування більш зручною для пацієннахід розкриває фармацевтичну композицію, що тів. Крім того, вказані форми пакування можуть включає: відображати графік прийому, указуючи, наприклад, - від 1,0 до 2,0% (вага/вага) тестостерону на щоденний або щотижневий прийом. - від 50,0 до 75,0% (вага/вага), принаймні, одВідповідно доще одного прикладу здійснення, ного С2-С6 спирту передбачено використання дозуючого пристрою, - від 0,1 до 5,0% (вага/вага), принаймні, однієї який містить фармацевтичну композицію або водожелеутворюючої речовини спиртовий гель, що заявляється, який (пристрій) - від 0,1 до 5,0% (вага/вага) пропіленгліколю оснащений, наприклад, ручним насосом або кла- від 0,1 до 4,0% (вага/вага) ізопропілміристату паном. Такі дозуючі пристрої дають можливість - необов'язково, воду. варіювати дози, що призначаються, відповідно до Ще в одному з прикладів здійснення даний викількості композиції, яка повинна бути використанахід розкриває фармацевтичну композицію, що на. включає: Відповідно до одного з прикладів здійснення - від 1,25 до 1,75% (вага/вага) тестостерону винаходу, дані пакети або дозуючі пристрої мо- від 50,0 до 70,0% (вага/вага), принаймні, оджуть бути укомплектовані інструкціями для корисного С2-С6 спирту тувачів. - від 0,1 до 4,0% (вага/вага), принаймні, однієї Фармацевтичні композиції, гелі, пакети і конжелеутворюючої речовини тейнери за даним винаходом призначені для ліку- від 0,2 до 4,0% (вага/вага) пропіленгліколю вання стану обумовленого дефіцитом тестостеро- від 0,15 до 2,0% (вага/вага) ізопропілміристану, а також для лікування та/або запобігання ту станів та/або порушень (захворювань), пов'язаних - необов'язково, воду. з дефіцитом тестостерону. Ще в одному з прикладів здійснення даний виТермін «лікувати», «лікування» в контексті данахід розкриває фармацевтичну композицію, що ного винаходу відноситься до будь-якого способу включає: лікування стану, порушення в стані (розладу) або - від 1,4 до 1,6% (вага/вага) тестостерону захворювання, пов'язаного з депресивним розла- від 50,0 до 70,0% (вага/вага), принаймні, оддом, і включає, але, не обмежується перерахованого С2-С6 спирту ним нижче, попередження виникнення стану, по- від 0,1 до 3,0% (вага/вага), принаймні, однієї рушення або захворювання у об'єкта, який має желеутворюючої речовини нахил до виникнення такого стану, порушення або - від 0,3 до 3,0% (вага/вага) пропіленгліколю захворювання, але якому ще не був поставлений - від 0,35 до 1,5% (вага/вага) ізопропілміристадіагноз щодо наявності ознак вказаного стану, ту розладу або захворювання як такого; пригнічення - необов'язково, воду. такого стану, розладу або захворювання, наприЩе в одному з прикладів здійснення даний виклад, припинення розвитку такого стану, розладу нахід розкриває фармацевтичну композицію, що або захворювання; послаблення такого стану, включає: розладу або захворювання, наприклад, забезпе- близько 1,5% (вага/вага) тестостерону чення регресії такого стану, розладу або захворю- від 50,0 до 70,0% (вага/вага), принаймні, одвання; послаблення стану, викликаного захворюного С2-С6 спирту ванням або розладом, наприклад, припинення - від 0,1 до 2,5% (вага/вага), принаймні, однієї розвитку симптомів захворювання або розладу. желеутворюючої речовини Термін «запобігати», «запобігання» відносно - від 0,4 до 2,5% (вага/вага) пропіленгліколю стану, розладу або захворювання означає відсут- від 0,4 до 2,5% (вага/вага) ізопропілміристату ність розвитку стану, розладу або захворювання, - необов'язково, воду. якщо навіть вони і не були виявлені, або відсутДодатково дана фармацевтична композиція ність подальшого розвитку стану, розладу або заможе містити звичайні фармацевтичні добавки, хворювання, якщо розвиток такого стану, розладу включаючи, сіль(солі), пом'якшувальний засіб(и), або захворювання вже був виявлений. стабілізатор(и), протимікробну речовину(и), ароВ контексті даного винаходу термін «дефіцит матизатор(и) і носій(ї). Згадана вище фармацевтитестостерону» відноситься до більш низьких сирочна композиція може також включати, принаймні, ваткових рівнів вільного тестостерону в пацієнта в ще один активний додатковий інгредієнт, наприпорівнянні з середніми сироватковими рівнями клад, додатковий гормон. здорового об'єкту такого ж віку. Наприклад, норДаний винахід забезпечує також гель, викоримальні циклуючі жінки виробляють, приблизно, стовуваний для трансдермального або черезшкір300мкг тестостерону за добу. Їх загальні сироватного введення, включаючий вказану фармацевтикові рівні тестостерону, приблизно, складають, в чну композицію за даним винаходом. Таким чином, основному, від 20нг/дл до 80нг/дл, що в середньоданий винахід також направлений на створення му дорівнює 40нг/дл. У здорових жінок, наприклад, водо-спиртового гелю, що містить тестостерон. середні рівні вільного тестостерону складають, в Відповідно до ще одного прикладу здійснення, основному, близько 3,6пг/мл. Проте деякі чинники даний винахід забезпечує пакет дозування, блок з можуть впливати на сироваткові рівні, як загальнопакетів дозувань або пакет дозування з множинго, так і вільного тестостерону. Наприклад, у регу 15 87158 16 лярно овулюючих жінок присутній невеликий, але - поліпшення пізнавальних здібностей, поліпдуже важливий сплеск рівнів тестостерону в плазшення настрою і підвищення самооцінки, лікуванмі під час середньої третини менструального цикня та/або попередження депресивних станів, лікулу. Проте середні рівні тестостерону (1,2нмол/л вання, попередження або послаблення станів, або 33нг/дл) і середні рівні вільного тестостерону пов'язаних із зниженням розумових здібностей; (12,8пмол/л або 3,6пг/мл) під час лютеальної і фо- лікування аутоіммунних захворювань. лікулярної фаз значно не відрізняються один від Дані фармацевтичні композиції і гелі можуть одного. Крім того, вироблення тестостерону безбути також використані в «комбінованій терапії» з перервно знижується після 30 років, внаслідок іншим гормоном або стероїдом, або фармацевтичого у 60-річної жінки сироваткові рівні тестостечною речовиною, які збільшують рівні тестостеророну складають тільки 50% від рівнів молодої 30ну у об'єкта (пацієнта), або з естрогенним горморічної жінки. Хоча процентний вміст вільного тесном, або іншою фармацевтичною речовиною, тостерону, в основному, не змінюється, з віком, наприклад, антидепресантом. все-таки спостерігається абсолютне зниження віДаний винахід відноситься також до способу льного тестостерону. Таке зниження не трапляприготування фармацевтичної композиції, наприється раптом, з настанням менопаузи, навпаки, клад, у вигляді гелю або розчину, відповідно до все відбувається поступово і безперервно в реданого винаходу. зультаті зниження з віком андрогену, що виробляВ одному з аспектів даний спосіб включає ється, наднирковими залозами і яєчниками. При операцію розчинення тестостерону з перемішуцьому жінки починають відчувати симптоми, асованням в розчиннику, який складається, принаймційовані з менопаузою в тому віці, який безпосені, з одного із спиртів С2-С6 і, принаймні, одного редньо передує менопаузі. Зниження тестостеропідсилювача проникаючої спроможності (наприну, що слідує за менопаузою, відбувається в клад, пропіленгліколю та/або ізопропілміристату). результаті поєднання таких чинників, як згасання В іншому аспекті даний спосіб включає операфункції яєчників, зниження ниркової секреції, а цію додавання води до отриманої суміші, що сутакож периферична конверсія (зміни). Так, наприпроводжується перемішуванням. клад, після видалення яєчників концентрації тесПотім, з метою отримання композиції у вигляді тостерону знижуються на 50%. Діагноз дефіциту гелю, до отриманої суміші додають при перемішутестостерону відомий лікарю середньої кваліфікаванні, принаймні, одну желеутворюючу речовину, ції, що практикує у відповідній області медицини. наприклад, CarbopolÒ. Фармацевтичні композиції і гелі за даним виДо суміші, перемішуючи, можуть додавати оснаходом використовуються також для лікування нову/нейтралізатор, наприклад, триетаноламін. низки фізіологічних і психологічних параметрів Ще в одному аспекті даний винахід відноситьта/або станів, пов'язаних з дефіцитом тестостерося до способу приготування фармацевтичної комну у чоловіка або жінки. Наприклад, фармацевтичпозиції або гелю по даному винаходу, при цьому ні композиції і гелі заданим винаходом корисні спосіб включає операції, при яких: для: - готують суміш, що містить, принаймні, один - підвищення лібідо і поліпшення сексуальної спирт С2-С6, принаймні, один підсилювач пронифункції та/або лікування статевої дисфункції; норкаючої спроможності (наприклад, пропіленгліколь малізація гіпогонадизму; та/або ізопропілміристат) і тестостерон; - підвищення мінеральної густини кістки і по- можуть додавати воду і перемішувати; силення відповідних генів-маркерів, зростання - до отриманої суміші можуть додавати желеум'язової маси тіла і зниження жирової маси тіла, творюючу речовину і перемішувати; поліпшення стану м'язів і їх функціональних харак- можуть додавати основу і знову перемішуватеристик; ти. - нормалізація рівнів глюкози, зниження виявів Ще в одному аспекті даний винахід відноситьдіабетичної ретинопатії, а також зниження потреби ся до використовування гелю або розчину згідно із в інсуліні у хворих діабетом, лікування, попереданим винаходом для приготування медичного джування або зниження загрози утворення катарапродукту для трансдермального застосування, з кти; метою лікування фізіологічного стану, пов'язаного - лікування, запобігання або зниження ризику з дефіцитом андрогена/тестостерона. виникнення серцево-судинних захворювань, вклюВ іншому аспекті даний винахід відноситься до чаючи нормалізацію гіпертензії і лікування ожирінспособу лікування. ня, нормалізацію рівнів холестеролу, нормалізацію В одному з прикладів здійснення даний спосіб порушень в електрокардіограмах пацієнтів, а тамістить операцію введення тестостерону в оргакож лікування, запобігання або зниження вазомонізм пацієнта, потребуючого в цьому. торних симптомів; Відповідно до одного з аспектів, фармацевти- попередження виснажуючого синдрому, вична композиція або гель за даним винаходом накликаного вірусом людського імунодефіциту; носиться на здорову шкіру, наприклад, на область - попередження остеопорозу, остеопенії, вагіплеча або на зовнішню частину передпліччя, стегнальної сухості і стоншування вагінальної стінки, но або гомілку. послаблення симптомів менопаузи і приливів, ліЩоб виміряти і визначити, яка кількість тестоскування передменструальних синдромів; терону повинна бути введена в організм пацієнта, - лікування, попередження або зниження ризипотребуючого в цьому, за допомогою стандартної ку виникнення хвороби Альцгеймера, недоумства; випробувальної техніки повинні бути виміряні концентрації сироваткового тестостерону. 17 87158 18 Звідси витікає, що кваліфікований фахівець Матеріали і методи повинен знати, як визначити кількість композиції, 1. Матеріали яка повинна бути призначена, виходячи з точної Хімічні речовини Тестостерон (Fluka) дози тестостерону в даній фармацевтичній компоТестостерон 14C (Amersham) зиції. Желеутворюючі речовини В основному, звичайна денна доза фармацевCarbopolÒ 934P (Carb. Ò 934P)(Polyplastic) тичної композиції у вигляді гелю або розчину відCarbopolÒ 980 (Carb. Ò 980)(Lot 4419, повідно винаходу складає від 2,5 до 5г препарату Laboratoires Besins Iscovesco) на добу. KlucelÒ Переваги винаходу видно з наступних приклаНейтралізатор дів здійснення, які виконують ілюстративну функТріетаноламін (Lot 4343, Laboratoires Besins цію і не обмежують об'єму захисту винаходу. Iscovesco) Кваліфікований фахівець повинен розуміти, Підсилювачі проникаючої спроможності що даний винахід може об'єднувати в собі будьТранскутанол (черезшкірний засіб) яке число переважних ознак, описаних вище. (Gattefosse) Згадані в даному документі цитати включені Олеїнова кислота (OA)(Prolabo) до нього методом посилання. Інші приклади здійсПропіленгліколь (PG)(Gattefosse) нення даного винаходу, які не показані в даному Пропіленглікольописі, очевидні для кваліфікованого фахівця і тому діпеларгонат(РGDР)(Gаttеfоssе) входять в об'єм захисту даного винаходу. ПромисМодель шкіри тварини лове застосування даного винаходу, якщо інше не Чоловіча особа голої криси, 5 тижнів вказане, може бути здійснено за допомогою техМодель шкіри людини нологій і технічних засобів, традиційних для фарБіопсія хірургії черевної області, біла жінка, 35 макології і фармацевтики, відомої з рівня техніки. років Приклади 2. Приготування тестостеронового гелю з раПриклад 1 діоактивною міткою Дослідження в області черезшкірного введенЖелеутворюючий агент (полімер) набухає ня композицій тестостеронового гелю були провепротягом 12 годин в заданій кількості води. Мічедені на шкірі тварин і людини з використанням ний і немічений тестостерон розчиняють в етанолі, тестостерону з радіоактивною міткою (14С) і рідинможливо, у присутності підсилювача проникаючої ного мерехтливого титрування. Дані дослідження спроможності (здатності). Водна і спиртова фази дають доступ до кінетичних параметрів (виділена перемішуються, потім нейтралізуються триетанокількість через 24 години і після перенесення). ламіном. Перемішування здійснюється шпателем Вивчалися два аспекти: до повної гомогенізації. Готували сімнадцять ком- результати фізико-хімічних досліджень (розпозицій для черезшкірного введення. їх склад начинність тестостерону і в'язкість гелю); даний в таблиці, приведеній нижче (у вагових від- черезшкірне введення (вплив концентрації сотках, виходячи із загальної ваги композиції). тестостерону, природа желеутворюючої речовини, Композиції 13 і 14 відповідають нежелеутворююприсутність підсилювача проникаючої спроможночим розчинам. сті) 19 87158 20 Таблиця 1 № 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 Тестостерон 1 0,5 0,5 0,75 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 1 1 1 1 1 1 1 Желеутворююча речовина 1% Carb.934P 1% Carb.934P 0 0 1% Carb.934P 1% Carb.934P 2% Klucel 2% Klucel 1% Carb.934P 0,5% Carb.980 0,5% Carb.980 0,5% Carb.980 1% Carb.980 1% Carb.934P 1% Carb.934P 0,5% Carb.980 0,5% Carb.980 95% 58 58 58 58 58 58 58 58 58 58 58 58 58 58 58 58 58 Триетаноламін 1,35 1,35 0 0 1,35 1,35 1,35 1,35 1,35 1,35 0,6 0,6 1,35 1,35 1,35 0,5 0,5 PG 0 0 0 0 0 5 0 5 0 0 0 2 2 2 2 1 1 ОА 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 0 0 Ізопропілміристат 0 0 0 0 0 0 0 0 5 0 0 0 0 0 0 0 0 (Carb.=Carbopol®) 3. Кінетичний протокол дермального проникнення 3.1 Камера дермального проникнення Використовуються камери статичного перенесення, що містять двоє відділень неоднакових розмірів (Фіг.1). Верхнє відділення циліндричної форми (перетин: 2,54см2) є відділенням донора 1, призначеним для нанесення лікувальної сполуки (у вигляді розчину або накладки) на шкіру 2. Дане верхнє відділення 1 сполучене з нижнім відділенням 4 металевим кільцем. Нижнє приймальне відділення 4 (середній об'єм 10мл) забезпечене верхнім отвором також розміром 2,54см2. Боковий шунт 5 забезпечений голкою і катетерною системою, яка дає можливість брати проби. Гомогенізація середовища в нижньому відділенні забезпечується магнітною мішалкою 3 (Фіг.1). 3.2 Біологічна мембрана. Шкіра тварини. Біопсії шкіри чоловічої особини голої криси (криси IOPS, 5 тижнів) були узяті з черевної ділянки. Жирові тканини, зосереджені на внутрішній стороні, були видалені, а шкіра посічена для відбору зразків розміром більше 2,54см2. Кожний зразок наклеюється на нижнє відділення, причому, зовнішня поверхня шкіри повернута догори. Шкіра людини Експерименти проводяться на зразках, отриманих в результаті пластичного хірургічного втручання в черевну область 35-річної жінки. Зразки використовуються відразу ж після їх отримання, іннервовані на товщині близько 250мкм. 3.3 Протокол дослідження Двоє відділень 1, 4 камери дермального проникнення сполучено з фрагментом шкіри 2. Приймальне відділення 4 заповнюється точно виміряним об'ємом 0,5% розчину альбуміну. Після цього камера поміщається на 15 годин в термостатичну ванну з температурою 37°С на вібруючу підставку для одержання рівноважного стану між шкірою і середовищем, що приймає зразок шкіри. Кінетичний процес починається після нанесення композиції на шкіру 2. Наносять близько 20мг на ділянку шкіри площею 2,54см2. Протягом 24 годин зразки 2мл відбираються з приймального відділення 4 через рівні проміжки часу і відразу ж 2мл свіжого розчину альбуміну додаються у відділення для підтримки постійного об'єму. Для кожної сполуки використовують п'ять камер проникнення. Після зберігання в охолодженому стані зразки титрують рідинною сцинтиляцією. 4. Титрування 14С тестостерону Зразки розщеплюються на дві 1мл-фракції, до яких додають 4мл сцинтиляційної рідини (Pico Fluor 40Ò), час вимірювання складає 5 хвилин. Після цього зразки титрують рідинною сцинтиляцією, використовуючи b-спектрофотометр (Beckman). Під час сцинтиляції гасіння призводить до зниження ефективності виявлення, яке точно оцінюється при побудові калібруючої кривої, названої кривою гасіння. Для кожного зразка результат вимірювання, що залежить від гасіння, підраховується, використовуючи зовнішнє стандартне джерело, і визначається дійсна радіоактивність. Результати 1. Розчинність тестостерону Задана кількість розчину (2мл) перемішується при температурі 37°С в закритому пристрої Erlenmeyer. Починаючи від заданої кількості тестостерону, поступово додаються фракції. Визначається вагова кількість тестостерону, що залишилася, для визначення наявної кількості в Erlenmeyer (по різниці). Розчинність тестостерону при 37°С в сумішах вода/етанол і різних підсилювачах проникаючої спроможності, наприклад, пропіленгліколі (PG), олеїновій кислоті (ОА), пропіленглікольдипеларгонаті (PGDP), транскутолі визначають методом інкремента. 21 87158 22 Таблиця 2 Розчинність тестостерону в різних носіях Розчинник Розчинність (мг/мл) PG (100%) 86 PG/OA (50/50) 79 Розчинність тестостерону оцінюється також як функція вмісту етанолу. Таблиця 3 Розчинність тестостерону в суміші вода/етанол 95% етанол (об'єм/об'єм) 42/58 53/47 56/44 63/37 74/26 84/16 100/0 Розчинність тестостерону мг/мл г/г 14 0,015 20 0,023 24 0,027 30 0,035 52 0,061 120 0,195 340 0,420 Див. графіки на Фіг.2 2. В'язкість гелю Реологія гелю була охарактеризована за допомогою Carri-Med реометра контрольованих напруг, геометрія вимірювання: площи ОА (100%) 66 PGDP (100%) 18 Транскутол 140 на/площина, діаметр 2см, зазор 1мм, температура 20°С. Реограми будуються відносно потоку, що слідує за позначеним циклом фрагментації: - верхня фаза (сходження кривої): напруга зростає від 0 до 300н/м2 через 2хв.; - полога ділянка кривої: постійна напруга; - нижня фаза (низходження кривої): напруга знижується від 300н/м2 до 0 через 2хв. Всі гелі характеризуються фрагментарним розм'якшенням (псевдопластичним станом) без вияву ознак гістерезисного циклу. Були проведені два радіологічних дослідження у відношенні: - впливу вмісту етанолу на в'язкість CarbopolÒ934; - впливу вмісту полімеру на в'язкість CarbopolÒ980. 2.1 В'язкість водно-спиртового гелю CarbopolÒ934P Вплив вмісту етанолу на водо-спиртовый гель CarbopolÒ934 вивчається при зміні вмісту 95% етанолу від 50% до 70%. Таблиця 4 Етанол (1% за вагою) 50 55 60 65 В'язкість (Па.с) 15,00 6,500 2,375 0,800 При вмісту етанолу понад 55% показник в'язкості зменшується, причому спостерігаються великі коливання в даних показниках, пов'язані із змінами вмісту етанолу. Показник в'язкості збільшений при 50% етанолу. 2.2 В'язкість гелю CarbopolÒ980 Максимальній градієнт швидкості (інтенсивності) (с-1) 22,5 50 140 400 Вплив вмісту полімеру на водо-спиртові гелі з 40% етанолу вивчається шляхом зміни вмісту CarbopolÒ980 від 0,3% до 0,7%. В'язкість виміряли на пологій ділянці графіка при навантаженні до 3000н/м2 протягом 1 хвилини. Таблиця 5 CarbopolÒ980 (%) 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 В'язкість (Па.с) 0,125 0,610 3,50 6,10 12 3. Дермальне проникнення сполук тестостерону на шкіру криси Дермальне проникнення сполук, перерахованих в Таблиці 1, оцінюється in vitro на шкірі криси. Максимальний градієнт швидкості (інтенсивності) (с-1) 1400 500 90 50 30 Сполука 25 не може бути оцінена через гетерогенність (фазове розділення). Виділена кількість за 24 години і ефективність виділення за 24 години дані в наведеній нижче таблиці. 23 87158 24 Таблиця 6 Номер сполуки Тестостерон (%) Виділена кількість (24 години) (мкг/см2) 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 1 0,5 0,5 0,75 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 1 1 1 1 1 1 1 28,1 11,6 24,4 36,7 16,2 30,9 10,5 36,9 44,5 18,5 21,6 33,5 34,4 36,9 30,1 62,0 Сполуки 11-27: 8мг/см2 депозитовані. 3. Проникнення тестостерону на шкіру людини Ефективність виділення (24 години) (%) 35 29 61 61 8 15 5 18 22 9 27 42 43 46 37,5 77 Композиція 26 Середні значення параметрів проникнення на 5 камерах: Сполуки 26 і 27 оцінювалися на шкірі людини разом із сполукою 15, як еталонним зразком для посилання. Докладні результати наведені нижче. Час (години) 2 4 6 9 12 24 Кількість (Q) (мкг) 0 1.9 3,5 5,6 7,4 15,3 Кількість/площа Q/S (мкг/см2) 0 0,75 1,4 2,2 2,9 6,01 Графік середніх показників кінетики даний на Фіг.3. Середній перенос: 0,26мкг/см2.годину Час(години) 2 4 6 9 12 24 Кількість (Q) (мкг) 0 3 5,6 8,6 11,7 22,1 Час(години) 2 4 6 9 12 24 Кількість (Q) (мкг) 0 1.1 2,2 6,6 4,3 9,1 Композиція 27 Середні значення параметрів проникнення на 5 камерах: Кількість/площа Q/S (мкг/см2) 0 1,2 22,2 3,4 4,6 8,7 Графік середніх показників кінетики даний на Фіг.4. Середній перенос: 0,39мкг/см2.годину Композиція 15 (для посилання) Відхилення від стандартного Q/S (n=5) 0 0,4 0,6 0,6 0,8 1,6 Відхилення від стандартного Q/S (n=5) 0 0,9 1,1 1,2 1,4 2,5 Середні значення параметрів проникнення на 5 камерах: Кількість/площа Q/S (мкг/см2) 0 0.45 0,85 1,3 1,7 3,6 Відхилення від стандартного Q/S (n=5) 0 0,3 0,5 0,6 0,7 1,2 Графік середніх показників кінетики даний на Фіг.5. Середній перенос: 0,15мкг/см2.годину Приклад 2 Матеріал і способи 1. Матеріал [1,2,6,7-3Η]тестостерон (Amersham Laboratories): МW(молекулярна вага)=295, розчин при 1mCi/mL (мКі/мл)(37МВq/mL)(мБк/мл) в етанолі; специфічна(індивідуальна) (радіо)активність 99Ci/mmol (Кі/ммол)(3,66ТВQ/mmоl)(тБк/ммол), тобто 336mCi/mg(MКi/мг) (серія 18). Абсолютний етанол Carlo Erba серія V4N051154N Композиція Тестостерон 1(посилання) 2 3 2,5 1 1 4 1 5 1 Матеріал, контрольований Laboratoires Besins CarbopolÒ980 CarbopolÒ934 Тестостерон Ізопропілміристат Триетаноламін (TEA) Пропіленгліколь(РG) серія 92010/4420 серія /3898 серія 92039/4461 серія 91169/5781 серія 9304020/5721 Композиції для нанесення на шкіру: (у ваговій кількості на 100г кінцевої композиції). Желеутворююча Абсолютний Нейтралізатор ПропіленглікольІзопропілміристат речовина етанол Carb.934: 1.0 57 TEA: 1,35 Carb.980: 0,6 58 TEA: 0,60 0,5 Carb.980: 0,8 58 TEA: 0,80 0,5 NaOH Carb.980: 0,9 67 0,5 (0.1M):4,725 Carb.980:0,5 67 TEA: 0,50 0,5 Композиції готуються таким чином: Композиція 1: 1г гелю з радіоактивною міткою готують таким чином: - 100мкл (100мкКі (Кюрі)) розчину тестостерону з радіоактивною міткою (3H) висушують і повторно суспензують з - 595мг розчину, що містить 2,5г тестостерону в 57г абсолютного етанолу; - 391,5мг основного гелю, отриманого шляхом забезпечення набухання 1г CarbopolÒ934 в 38,15г води; після повного набухання і перед використовуванням слизиста маса гомогенізується протягом декількох секунд (ultra-turax); - 13,5мг TEA. Радіоактивна концентрація композиції: 100мкКі/г геля, тобто 0,8мкКі і 200мкг тестостерону на завантажувальну порцію 8мг (близько 10мкл) для однієї камери розміром 1,77см2. Композиція 2: 1г гелю з радіоактивною міткою готують відповідно до наступного протоколу: - 100мкл (100мкКі (Кюрі)) розчину тестостерону з радіоактивною міткою (3H) висушують і повторно суспензують з - 595мг розчину, що містить 1г тестостерону і 0,5г PG в 58г абсолютного етанолу; - 393мг основного гелю, отриманого шляхом забезпечення набухання 0,6г CarbopolÒ980 в 38,7г води; після повного набухання і перед використовуванням слизиста маса гомогенізується протягом декількох секунд (ultra-turax); - 12мг TEA, наполовину розчинених у воді. Радіоактивна концентрація композиції: 100мкКі/г гелю, тобто 0,8мкКі і 80мкг тестостерону на завантажувальну порцію 8мг (біля 10мкл) для однієї камери. Композиція 3: 1г гелю з радіоактивною міткою готують відповідно до наступного протоколу: - 100мкл (100мкКі (Кюрі)) розчину тестостерону з радіоактивною міткою (3H) висушують і повторно суспензують з: - 595мг розчину, що містить 1г тестостерону і 0,5г PG в 58г абсолютного етанолу; - 389мг основного гелю, отриманого шляхом забезпечення набухання 0,8г CarbopolÒ980 в 38,1г води; після повного набухання і перед використовуванням слизиста маса гомогенізується протягом декількох секунд (ultra-turax); - 16мг TEA, наполовину розчинених у воді. Радіоактивна концентрація композиції: 100мкКі/г гелю, тобто 0,8мкКі і 80мкг тестостерону на завантажувальну порцію 8мг (біля 10мкл) для однієї камери. Композиція 4: 1г гелю з радіоактивною міткою готують відповідно до наступного протоколу: - 100мкл (100мкКі (Кюрі)) розчину тестостерону з радіоактивною міткою (3H) висушують і повторно суспензують з: - 685мг розчину, що містить 1г тестостерону і 0,5г ізопропілміристату в 67г абсолютного етанолу; - 267,75мг основного гелю, отриманого шляхом забезпечення набухання 0,9г CarbopolÒ980 в 25,875г води; після повного набухання і перед використовуванням слизиста маса гомогенізується протягом декількох секунд (ultra-turax); - 47,25мг NaOH(0,1M). Радіоактивна концентрація композиції: 100мкКі/г гелю, тобто 0,8мкКі і 80мкг тестостерону на завантажувальну порцію 8мг (біля 10мкл) для однієї камери. Композиція 5: 1г гелю з радіоактивною міткою готують відповідно до наступного протоколу: - 100мкл (100мкКі (Кюрі)) розчину тестостерону з радіоактивною міткою (3H) висушують і повторно суспензують з: - 685мг розчину, що містить 1г тестостерону і 0,5г ізопропілміристату в 67г абсолютного етанолу; - 305мг основного гелю, отриманого шляхом забезпечення набухання 0,9г CarbopolÒ980 в 30г води; після повного набухання і перед використо 27 87158 28 вуванням слизиста маса гомогенізується протятемпература 37°С та забезпечується контакт шкігом декількох секунд (ultra-turax); ри з альбумінизованим сировоточним розчином - 10мг TEA, наполовину розчинених у воді. на протязі 17 годин. В таких умовах шкіра стає у Радіоактивна концентрація композиції: високому ступені гідратованою. 100мкКі/г гелю, тобто 0,8мкКі і 80мкг тестостероРозчин в кількості 10мкл (біля 8мкл, близько ну на завантажувальну порцію 8мг (біля 10мкл) 8мкКі) наноситься мікропіпеткою на всю поверхдля однієї камери. ню епідермісу, обмежену скляним циліндром. 2. Способи Відбір зразків рідини, що міститься в дермальноДермальна абсорбція in vitro му відділенні, здійснюється за допомогою боковоПринцип го збірника у встановлені моменти часу 2год., Проводяться кількісні дослідження трансде4год., 6год., 8год. і 24год. В кожний встановлений рмальної абсорбції in vitro на дермальній біопсії, момент часу живильна рідина повністю відбираотриманій з черевної області людини і поміщеній ється для досліджень і замінюється новою рідив статичну дифузійну камеру (Franz-камеру), яка ною. В кінці експерименту оброблена дермальна забезпечує контакт дермісу (шкіри) з живильним поверхня промивається 200мкл різних розчиннирідким середовищем (рецепторним середовиків, відповідно до наступного протоколу: щем), в якому повинна бути дозована черезшкір- 1-а промивка: CetavlonÒ/вода (1/9, об'на абсорбція. єм/об'єм); Камера - 2-а промивка: вода; Дермальна біопсія утримується горизонталь- 3-я промивка: CetavlonÒ/вода (1/9, об'но між двома частинами камери з утворенням єм/об'єм); двох відділень: - 4-а промивка: вода; - одне з відділень представляє собою епіде- 5-а промивка: вода. рмальне відділення, відділене скляним циліндПісля цього зона нанесення сполуки протиром, що має точно певну площу основи, що дорірається з використанням Q-tipÒ. внює 1,77см2, розміщеним на зовнішній поверхні Далі епідермальний і дермальний шари мешкіри; ханічно розділяються скальпелем і піддаються - інше відділення, дермальне, прикладене до біологічній обробці в 1мл і 3мл SolueneÒ нижньої поверхні зовнішнього покриву шкіри, міс(Packard), відповідно. тить резервуар заданого об'єму з боковим збірВимірювання радіоактивності ником. Виявлення здійснюється за допомогою метоОбидва елементи зібрано за допомогою заду рідинної сцинтиляції і з використанням лічильтискного пристрою. ника частинок Packard-tricarb 4530. Нижнє відділення (дермальне) наповнюється Приготування радіоактивних зразків живильним рідким середовищем, що складається Живильна рідина, що відібрана з нижнього з розчину хлориду натрію при 9г/л з додаванням відділення дифузійної камери, відразу ж приєдбичачого сироваткового альбуміну при 15г/л. нується до 15мл коктейлю із сцинтиляційної рідиВ кожний призначений момент часу живильна ни (Picoflour 40R, Packard) і піддається вимірюрідина повністю відбирається через боковий збіванню радіоактивності. рник і замінюється новою рідиною. Рідини промивок і Q-tipÒ вливають в колбу, Нижня частина камери піддається термостащо містить біля 30мл 95-процентного етанолу тичній обробці при 37°С. Рівномірність темперапіддаються точному зважуванню. Після 12тури і гомогенність вмісту в потоці рецептору підгодинного інкубаційного періоду при температурі тримується шляхом перемішування (в мішалці з 4°С радіоактивність точно зваженої аліквотної магнітним перемішуванням). проби із даного розчину визначається з викорисВерхня частина (епідермальне відділення) танням тієї ж процедури, що і для живильних рівідкрита назовні, забезпечуючи, таким чином, дин. доступ повітря з лабораторного оточення до епіЕпідермальний и дермальний шари повинні дермальної поверхні. спочатку розчинюватися в сильних органічних Приготування дермальних біопсій людської основах. Вони розчиняються внаслідок контактушкіри, отриманої методом хірургічного висічення вання протягом 24 годин при 37°С з Soluene 350Ò з черевної області шкірного покриву. Зразки узяті Packard (1мл на 100мг тканини), до яких додають з шкіри білої людини, отриманої з черевної обла15мл рідинного сцинтиляційного коктейлю (Nionic сті методом пластичної хірургії. Перед викорисFluor 30Ò Packard), а потім проводять вимірювантовуванням шкіру витримують при температурі ня. 20°С. В'язкий підшкірний жир відділяється скальВимірювання радіоактивності пелем, при цьому товщину шкіри доводять до Інтенсивність вимірювання коригується, якщо 0,5мм за допомогою дерматома. При здійсненні мова йде про гасіння флуоресценції, по методу кожного дослідження зразки порівну розподілязовнішньої калібровки для одержання числа розються між серіями. падів на хвилину (dpm), в залежності від дійсної Загальний протокол активності кожного зразка. Фон для кожного зразFranz-камери звичайно встановлюються за ка визначається числом імпульсів на хвилину день до заповнення досліджуваною сполукою. (срm). Для кожної сцинтиляційної рідини встаноЕпідермальне відділення контактує з атмосфевлений спеціальний графік гасіння флуоресценрою повітря в лабораторії, в дермальному віддіції. ленні створюється і підтримується термостатична 29 87158 30 Результати надані у ваговій кількості або чається і представляється, відповідно, в представлені процентним вмістом речовини, нг/см2/годину і нг. знайденої у зразках у відношенні до заданої Середні результати відповідають 6-8 экспе(прийнятої) кількості, визначених на підставі вириментальним детермінаціям и асоціюються із мірювання інтенсивності відповідним чином розстандартними відхиленнями (девіаціями) (Sd). бавлених калібровок. Порівняння середніх результатів виконується Трансдермальна абсорбція: шляхом дисперсного аналізу. Інтенсивність трансдермальної абсорбції оці3. Результати нюється шляхом підрахунку процентного вмісту Концентрації, що представлені у процентноабсорбції (%) введеної кількості (Qi), в залежності му вмісту, являють собою вагу речовини на 100г від часу: кінцевої сполуки. %=(Qi/Qt)x100, In vitro - тестостерон-пенетрація в Franzде Qt - кількість, поглинена у момент часу t. камерах (Кумулятивні дані (зведені)) Середнє значення переносу и поглиненої кількості для кожного інтервалу часу також визнаСереднє значення +/-Sd в залежності від часу Сполука 1 n=6 2 n=8 3 n=8 4 n=7 5 n=7 Значення % час. +/-Sd Кількість (нг) +/-Sd % час +/-Sd Кількість (нг) +/-Sd % час +/-Sd Кількість (нг) +/-Sd % час +/-Sd Кількість (нг) +/-Sd % час +/-Sd Кількість (нг) +/-Sd 2год. 0,23% 0,08% 501 169 0,40% 0,18% 351 159 0,35% 0,21% 313 188 0,52% 0,15% 462 133 0,56% 0,49% 484 424 4год. 0,42% 0,12% 902 254 0,77% 0,29% 666 256 0,72% 0,34% 639 302 0,94%@ 0,27% 834 237 1,04%@ 0,71% 899 615 Живильна рідина 6год. 0,54% 0,13% 1184 278 1,03% 0,36% 892 317 0,97% 0,41% 868 370 1,21%@ 0,34% 1071 301 1,3 3%@ 0,78% 1153 673 8год. 0,63% 0,15% 1378 322 1,23%@ 0,41% 1068 360 1,17% 0,47% 1047 418 1,40%@ 0,38% 1243 341 1,53%@ 0,81% 1324 707 24год. 0,97% 0,24% 2113 518 1,98%@ 0,59% 1721 508 1,94%@ 0,59% 1735 530 2,17%* 0,58% 1927 514 2,47%* 0,99% 2138 861 @: відміна від еталону (значення для посилання) (дисперсійний аналіз, відноситься до тесту Fisher при p