Комбінація біс-тіазолієвої солі або одного з її попередників і артемізиніну і одного з його похідних для лікування важкої форми малярії

Реферат: Об'єктом винаходу є комбінація, що містить біс-тіазолієву сіль (сполука формули (VI)) або один з її попередників і артемізинін або одне з його похідних. Об'єктом винаходу є також фармацевтична композиція, що містить щонайменше одну біс-тіазолієву сіль (сполука формули (VI)) або один з її попередників і артемізинін або одне з його похідних. Крім того, об'єктом винаходу є також застосування такої комбінації для отримання лікарського засобу, призначеного для лікування або профілактики важкої форми малярії. Нарешті, об'єктом винаходу є також набір для лікування або профілактики важкої форми малярії. UA 99510 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Даний винахід стосується нової комбінації протималярійних активнодіючих речовин, а саме біс-тіазолієвої солі або одного з її попередників і артемізиніну або його похідних, а також фармацевтичної композиції, що містить таку комбінацію, придатну для лікування і/або профілактики малярії. Малярія є однією з головних причин смерті від інфекцій у всьому світі і вражає щорічно більше 500 мільйонів осіб, з яких кожний рік вмирає від 1,5 до 3 мільйонів. Ця біда захоплює головним чином частину Африки, що знаходиться південніше Сахари, Південно-Східну Азію і Латинську Америку. Малярію розповсюджують чотири типи паразитів роду Plasmodium (P. falciparum, Р. malariae, Р. vivax і Р. ovale), переносимі кровососучими комарами анофелес. Plasmodium falciparum, широко поширений в Африці, є найбільш вірулентним паразитом, відповідальним за більшість летальних форм захворювання. Сильне загострення захворювання, що спостерігається вже декілька років, зумовлене багатьма чинниками, в тому числі резистентністю багатьох штамів Plasmodium falciparum до ліків, що використовуються в цей час, таких, як хлорохін, мефлохін, амодіахін, або до антифолієвих і антифолінових засобів, таким, як піриметамін і сульфадоксин. Багато які особи, уражені малярією, мають гостру інфекцію, з незначними фізичними ознаками, за винятком легкої анемії і збільшення об'єму селезінки (спленомегалія). Симптоми залежать від різновиду малярії. Однак загальними клінічними ознаками є, зокрема: погане самопочуття, гіпертермія (жар), головний біль, розлади травлення, такі, як нудота, блювання і/або болі в шлунку, діарея, слабкість, болі в м'язах, артралгія (болі в суглобах) і жовтяниця. Лікування проводиться звичайно шляхом прийому хлорохіну (або основного гідрохлориду хініну у випадку резистентності до хлорохіну) до досягнення поліпшення і зникнення паразитів в крові (звичайно від 3 до 5 днів). Потім пацієнт звичайно приймає один лікарський засіб, що складається з 1,5 грамів сульфадоксину і 75 мг піриметаміну. Використовується також інше лікування на основі антифолієвих і антифолінових засобів або на основі маларону. Важка форма малярії, що викликається Plasmodium falciparum, є церебральною малярією, пов'язаною з сильним підвищенням температури (40 °C) і комою з несприятливим прогнозом, незважаючи на лікування, при якій смертність підвищується іноді до 20 % у дорослих і 15 % у дітей. Настання важкої форми малярії є поступовим або раптовим. Вона починається з миттєвих короткочасних судом одного або декількох м'язів, що супроводжуються розслабленням. Вони є локалізованими або розповсюджуються на все тіло. Цей різновид малярії супроводжується ністагмом (безперервне тремтіння очей в горизонтальній площині), іноді напруженістю шиї і порушенням рефлексів. Важка малярія може супроводжуватися також крововиливами сітчастої оболонки ока, гіпоглікемією, набряками легенів, ураженням нирок, анемією і/або гематомезисом (викид крові з уражених органів, яка проковтується і потім знов з'являється у вигляді кровотечі, що супроводжується блюванням). У випадку Plasmodium falciparum, що викликає ускладнену малярію або церебральну малярію, а також інші важкі ураження, потрібна екстрена медична допомога, коли 1 % еритроцитів (червоних кров'яних тілець) або більш уражені паразитами у особи, яка ще не була прищеплена від цього захворювання. Пріоритетним в лікуванні у випадку важкої малярії є масивне і швидке зниження паразитемії (за 24-48 години після початку лікування), щоб виключити летальний прогноз. Після придушення паразитемії і підтвердження прогнозу життя може застосовуватися більш класичне протималярійне лікування, наприклад, хлорохіном або основним гідрохлоридом хініну. Лікування важкої форми малярії важко здійснювати пероральним або ректальним шляхом, оскільки захворювання часто супроводжується блюванням і сильною діареєю. Артемізинін, виділений у 1972 з рослини Artemisia annua (qinghaosu), що вже століттями використовується в Китаї, володіє потужною протималярійною активністю. У продаж випускаються також похідні з поліпшеними фармакологічними властивостями, такі, як артеметер, артеетер і артесунат. Артемізинін і його похідні, зокрема артесунат, є сьогодні частиною найбільш ефективних активнодіючих речовин проти Plasmodium falciparum. Однак ці сполуки навряд чи приводять до повного видужання, і відмічаються численні рецидиви. Таким чином, використання артемізиніну або його похідних в монотерапії могло б бути причинним чинником селекції резистентних паразитарних штамів. У цей час наукове співтовариство рекомендує використання комбінацій активнодіючих речовин, зокрема, комбінації артемізиніну або його похідних з іншими протималярійними активнодіючими речовинами. Ця політерапія, яка називається ACT (Artemisinin-based 1 UA 99510 C2 5 10 15 20 25 30 Combination Therapy - комбінована терапія на основі артемізиніну), рекомендується з 2002 р. Всесвітньою організацією охорони здоров'я (ВОЗ). Вона пропонує множину переваг: поліпшення терапевтичної ефективності у відношенні резистентних штамів, взаємний захист двох активних речовин від появи резистентності, зниження передачі захворювання і посилення резистентності. Відомо декілька комбінацій цього типу. Наприклад, пропонувалася комбінація артеметеру з люмефантрином, що випускається в продаж під найменуванням Coartem®, а також комбінація артесунату з амодіахіном (Arsucam®). Комбінація ферохіну з похідним артемізиніну описана в документі WO 2006/111647. Однак сприятливий ефект політерапії ACT не є ні очевидним, ні передбачуваним. Наприклад, в публікації C. Snyder і інш., Experimental Parasitology 115 (2007), 296-300, показане, що комбінація піперахіну із сполукою QZ277 здається більш обіцяючою, ніж комбінація піперахіну з похідним артемізиніну, таким, як артеметер. Також, комбінація хлорохіну і артесунату не досягає задовільних рівнів ефективності (Am. J. Trop. Med. Hyg., 2003, 69(1), 19-25 і Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene, 2003, 97, 429-433) і може привести до селекції резистентних штамів, зокрема, резистентних до хлорохіну. Таким чином, хоча стратегія ACT рекомендована ВОЗ, проте пошук нових комбінацій протималярійних активнодіючих речовин все-таки не є очевидним і повинен продовжуватися. Даний винахід стосується комбінації біс-тіазолієвої солі (сполуки формули (VI)) або одного з її попередників, таких як визначені нижче, і артемізиніну або одного з його похідних. З похідних артемізиніну, придатних для даного винаходу, можна, наприклад, назвати артесунат, артеметер, артеетер, гідроартемізинін або дигідроартемізинін. Така комбінація виявляє цікавий і непередбачуваний синергізм і, отже, може бути використана для профілактики і/або лікування малярії, зокрема, важкої форми малярії. Сполука формули (VI), а також їх попередники в значенні даного винаходу, описані в патенті, опублікованому під номером EP1 196371. Попередники біс-тіазолієвих солей формули (VI) в контексті даного винаходу відповідають формулам (I), (II), (III), (IV) і (V) патенту EP1 196371. Дійсно, цей патент описує попередники ліків з протималярійним ефектом, які відрізняються тим, що це продукти, здатні утворювати солі четвертинного біс-амонію і що відповідають загальній формулі(I): в якій А і A' є однаковими або відрізняються один від одного і означають: - або, відповідно, групу A1 і A1' формули: 35 40 45 де n означає ціле число від 2 до 4; R1 означає атом водню, алкільний радикал C1-C5, необов'язково заміщений арильним радикалом (зокрема, фенільним радикалом), гідрокси, алкокси, причому алкільний радикал містить від 1 до 5 атомів вуглецю, або арилокси (зокрема, фенілокси); і W означає атом галогену, вибраний з хлору, брому або йоду, або нуклеофобну групу, як тозильний CH3-C6H4-SO3, мезитильний CH3-SO3 радикал, CF3-SO3, NO2-C6H4-SO3, - або групу A2, яка являє собою формільний -CHO або ацетильний -CO-CH3 радикал, - В і B' є однаковими або відмінними один від одного і означають: - або відповідно групи B1 і B1', якщо А і A' означають відповідно A1 і A1', причому B1 і B1' означають групу R1, яка має те ж визначення, що і R'1 вище, але не може бути атомом водню, - або відповідно групи B2 і B'2, якщо А і A' означають A2, причому B2 або B'2 означають групу R1, яка визначена вище, або групу формули: 2 UA 99510 C2 5 10 15 в якій -Ra означає групу RS- або RCO-, де R означає алкільний радикал C1-C6, зокрема, C1C5, лінійний, розгалужений або циклічний, необов'язково заміщений однією або декількома групами гідрокси, алкокси або арилокси, або аміногрупу, і/або групу -COOH або COOM, де M означає алкіл C1-C3; фенільний або бензильний радикал, причому фенільний радикал необов'язково заміщений щонайменше одним алкільним радикалом або C 1-C5 алкокси, який сам, необов'язково заміщений аміногрупою, або азот- або кисеньвмісним гетероциклом, групу COOH або -COOM; або групу -CH2-гетероцикл, з 5 або 6 елементами, що містить азот і/або кисень; R2 означає атом водню, алкільний радикал C1-C5 або групу -CH2-COO-алкіл(C1-C5); і R3 означає атом водню, алкільний або алкенільний радикал C 1-C5, необов'язково заміщений -OH, фосфатну групу, алкокси-радикал, причому алкільний радикал є радикалом C 1C3; або арилокси або алкіл- або арилкарбонілокси-групу; або R2 і R3 разом утворюють цикл з 5 або 6 атомами вуглецю; R 2 і R3 можуть бути пов'язані, утворюючи цикл з 5-7 атомів (вуглець, кисень, сірка)  означає: - або простий зв'язок, коли А і A' означають A1 і A'1, або коли А і A' означають A2, тобто групу -CHO або -COCH3, і B2 і B'2 означають - або, коли А і A' означають A2 і B2, і B'2 означають R1, групу формули: 20 25 30 35 40 або групу формули: в якій (a) означає зв'язок з Z і (b) зв'язок з атомом азоту, Z означає алкільний радикал C6-C21, зокрема від C12 або C13 до C21, при необхідності з введенням одного або декількох кратних зв'язків, і/або один або декілька гетероатомів О і/або S, і/або один або декілька ароматичних циклів, і фармацевтично прийнятні солі цих сполук, за умови, що R'1 не означає Н або алкільний радикал C1 або C2, коли n=3 або 4, а R1 означає алкільний радикал C1-C4, і Z означає алкільний радикал C6-C10. У EP 1196371 описана також підгрупа сполук попередників, описаних вище, що відповідають загальній формулі (II): в якій R1, R'1, W, n і Z мають значення, визначені вище. У EP 1196371 описана також інша підгрупа сполук-попередників, утворена попередниками, описаними вище, для яких Z означає алкільний радикал C13-C21. У EP 1196371 описана також підгрупа сполук-попередників, утворена попередниками, описаними в попередній підгрупі, для яких Z означає групу -(CH2)16-. У EP 1196371 описані, зокрема, попередники, вибрані з дигідрохлориду N, N'-диметил-N, N'(5-хлорпентил)-1,16-гексадекандіаміну або дигідрохлориду N, N'-диметил-N, N'-(4-хлорпентил)1,16-гексадекандіаміну. У EP 1196371 описана, крім того, група попередників, що відповідають загальній формулі (III): 3 UA 99510 C2 або загальній формулі (IV): або загальній формулі (V): 5 10 15 20 25 30 35 в якій Ra, R1, R2, R3 і Z мають значення, визначені раніше. У EP 1196371 описані, зокрема, сполуки-попередники формули (III), (IV) і (V), описані раніше, вибрані з: -N, N’-диформіл-N, N’-ди[1-метил-2-S-тіобензоїл-4-метоксибут-1-еніл]-1,12-діамінододекану (TE4c), -N, N’-диформіл-N, N’-ди[1-метил-2-S-(п-діетиламінометилфенілкарбокси) тіо-4-метоксибут1-еніл]-1,12-діамінододекану (TE4f), -N, N’-диформіл-N, N’-ди[1-метил-2-S-(п-морфолінометилфенілкарбокси)-тіо-4-метоксибут-1еніл]-1,12-діамінододекану (TE4g), -N, N’-диформіл-N, N’-ди[1-метил-2-S-тіобензоїл-4-метоксибут-1-еніл]-1,16діаміногексадекану (TE8), -N, N’-диформіл-N, N’-ди[1(2-оксо-4,5-дигідро-1,3-оксатіан-4-іліден)етил]1,12діамінододекану (TE3); або з: -N,N’-диформіл-N,N’-ди[1-метил-2-тетрагідрофурфурилметилдитіо-4-гідроксибут-1-еніл]1,12-діамінододекану (TS3a), -N,N’-диформіл-N,N’-ди[1-метил-2-пропілдитіо-4-гідроксибут-1-еніл]-1,12-діамінододекану (TS3b), -N,N’-диформіл-N,N’-ди[1-метил-2-бензилдитіо-4-гідроксибут-1-еніл]-1,12 діамінододекану (TS3c), -N,N’-диформіл-N,N’-ди[1-метил-2-(2-гідроксіетил)дитіо-4-гідроксибут-1-еніл]-1,12діамінододекану (TS3d), -N, N’-диформіл-N, N’-ди[1-метил-2-пропілдитіо-4-метоксибут-1-еніл]-1,12-діамінододекану (TS3d) і -N,N’-диформіл-N,N’-ди[1-метил-2-пропілдитіоетеніл]-1,12-діамінододекану (TS6b), або з: -2,17-(N,N'-диформіл-N,N’-диметил)діаміно-3,16-S-тіо-п-метоксибензоїл-6,13-діоксаоктадека2,16-дієну (TE9), -2,17-(N,N'-диформіл-N,N’-дибензил)діаміно-3,16-S-тіо-п-метоксибензоїл-6,13діоксаоктадека-2,16-дієну (TE10), 4 UA 99510 C2 5 10 15 -етил 3,18-(N,N'-диформіл-N,N’-диметилдіаміно-4,17-S-тіобензоїлейкоза-3,17-дієндіоату (TE12), -етил-3,18-(N,N'-диформіл-N,N’-дибензил)діаміно-4,17-S-тіобензоїлейкоза-3,17-дієндіоату (TE13), або, нарешті, з: -2,15-(N, N'-диформіл-N,N’-диметил)діаміно-1,16-S-тіобензоїлгексадека-1,15-дієну (TE15), -2,15-(N,N'-диформіл-N,N’-дибензил)діаміно-1,16-S-тіобензоїлгексадека-1,15-дієну (TE16). Крім того, в EP 1196371 описані циклічні похідні, утворені з попередників тіазолієвих солей, що володіють хорошою протималярійною активністю і що відповідають загальній формулі (VI): в якій - Rb означає R1 або Т, де Т означає групу формули: за умови, що Z не є алкільним радикалом C6-C8, коли Rc, Rd, R2 і R3 означають метильний радикал, або коли Rc і Rd, з одного боку, і R2 і R3, з іншого боку, разом утворюють ароматичні цикли з 6 атомів вуглецю, - Rd означає R2 або Р, причому Р означає групу формули: Rc означає R3 або U, причому U означає групу формули: 20 25 30 35 40 де R1, R2, R3 і Z мають значення, визначені вище, причому розуміється, що Rb=Т, якщо Rc=R3 і Rd=R2; Rd=Р, якщо Rc=R3 і Rb=R1; і Rc=U, якщо Rb=R1, і Rd=R2. Згідно з даним винаходом, сполуки формули (VI) можуть знаходитися в формі вільної основи, солі, гідрату або сольвату. Зокрема, в документі EP 1196371 серед циклічних похідних, описаних вище, згадуються похідні, вибрані з: - диброміду 1,12-додекаметиленбіс[4-метил-5-(2-гідроксіетил)-тіазолію] (T3); - дійодиду 1,12-додекаметиленбіс[4-метил-5-(2-метоксіетил)тіазолію] (T4); - дійодиду 1,12-додекаметиленбіс(4-метилтіазолію) (T6); - дійодиду 1,16-гексадекаметиленбіс[4-метил-5-(2-метоксіетил)тіазолію] (T8); - дійодиду 3,10-діоксадодекаметиленбіс[5-(1,4-диметил)тіазолію] (T9); - диброміду 3,10-діоксадодекаметиленбіс[5-(1-бензил, 4-метил)-тіазолію] (T10); - дійодиду додекаметиленбіс[5-(1-метил-4-етоксикарбонілетил)-тіазолію] (T12); - диброміду додекаметиленбіс[5-(1-метил-4-етоксикарбонілетил)-тіазолію] (T13); - дійодиду додекаметиленбіс[4-(1-метил)-тіазолію] (T15); - диброміду додекаметиленбіс[4-(1-бензил)-тіазолію] (T16). Нарешті, в EP 1196371 описаний спосіб отримання біс-тіазолієвих солей і їх попередників, вказаних вище, зокрема, синтез сполук формули (VI), таких, як T3, T4, T6, T8, T9, T10, T12, T13, T15 і T16. Зокрема, синтез T3 описаний на сторінці 18 патенту EP 1196371. Також, протималярійна активність сполуки T3 описана в таблиці 13, сторінка 28 цього ж документа. Таким чином, винахід стосується комбінації, що містить як активнодіючі речовини бістіазолієву сіль (сполука формули (VI)) або один з її попередників, описаних раніше, і артемізинін або одне з його похідних. 5 UA 99510 C2 5 10 15 20 Згідно з іншим об'єктом, винахід стосується комбінації біс-тіазолієвої солі (сполуки формули (VI)) або одного з її попередників, описаних раніше, і артесунату. Згідно з третім об'єктом, винахід стосується комбінації артесунату і біс-тіазолієвої солі (сполука формули (VI)), вибраної з: - диброміду 1,12-додекаметиленбіс[4-метил-5-(2-гідроксіетил)тіазолію] (T3); - дійодиду 1,12-додекаметиленбіс[4-метил-5-(2-метоксіетил)тіазолію] (T4); - дійодиду 1,12-додекаметиленбіс(4-метилтіазолію) (T6); - дійодиду 1,16-гексадекаметиленбіс[4-метил-5-(2-метоксіетил)тіазолію] (T8); - дійодиду 3,10-діоксадодекаметиленбіс[5-(1,4-диметил)тіазолію] (T9); - диброміду 3,10-діоксадодекаметиленбіс[5-(1-бензил, 4-метил)-тіазолію] (T10); - дійодиду додекаметиленбіс[5-(1-метил-4-етоксикарбонілетил)-тіазолію] (T12); - диброміду додекаметиленбіс[5-(1-метил-4-етоксикарбонілетил)-тіазолію] (T13); - дійодиду додекаметиленбіс[4-(1-метил)-тіазолію] (T15); - диброміду додекаметиленбіс[4-(1-бензил)-тіазолію] (T16). Згідно з четвертим об'єктом, винахід стосується комбінації біс-тіазолієвої солі формули (VI), диброміду 1,12-додекаметиленбіс[4-метил-5-(2-гідроксіетил)тіазолію] (T3) і артесунату. У цих об'єктах, кожна з активнодіючих речовин використовується в концентрації, відповідній здатності перемогти інфекцію. У кожній комбінації відповідні кількості сполук залежать від цих активних доз. Дибромід 1,12-додекаметиленбіс[4-метил-5-(2-гідроксіетил)-тіазолію] (T3) має в комбінаціях за винаходом наступну структуру: Артесунат, присутній в комбінаціях згідно з винаходом, має формулу 25 30 35 Об'єктом винаходу є також фармацевтична композиція, що містить як активнодіючу речовину комбінацію біс-тіазолієвої солі формули (VI) або одного з її попередників, зокрема, T3, і артемізиніну або одного з його похідних, зокрема, артесунату, визначених раніше. Така фармацевтична композиція містить терапевтично ефективні дози біс-тіазолієвої солі (сполуки формули (VI)) або одного з її попередників і артемізиніну або його похідних, а також щонайменше один фармацевтично прийнятний ексципієнт. Вказані ексципієнти вибирають, відповідно до фармацевтичної форми і бажаного способу введення, із звичайних ексципієнтів, які відомі фахівцеві. Діапазон вмістів кожної сполуки визначається в залежності від їх доз, що виявляють активність проти малярії при монотерапії, і що відображають їх відповідну здатність перемогти інфекцію. Придатні стандартні лікарські форми включають форми для перорального введення, такі як таблетки, м'які або тверді желатинові капсули, порошки, гранули і пероральні розчини або суспензії, форми для сублінгвального, букального, інтратрахеального, внутрішньоочного, 6 UA 99510 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 інтраназального введення, форми для введення інгаляцією, форми для топічного, черезшкірного, підшкірного, внутрішньом'язового або внутрішньовенного введення (болюс або перфузія), форми для ректального введення і імплантати. Для топічного нанесення сполуки згідно з винаходом можна використати в кремах, гелях, мазях або лосьйонах. Передбачуваними способами введення можуть бути пероральний, ректальний і парентеральний способи, зокрема, внутрішньом'язовий, інтраректальний і внутрішньовенний, зокрема, вливання. Для парентерального введення використовуються придатні для ін'єкцій водні суспензії, ізотонічні сольові розчини або стерильні розчини, які містять фармакологічно сумісні диспергатори і/або змочувальні речовини, наприклад, пропіленгліколь або бутиленгліколь. У разі необхідності суспензії можуть також містити антиокислювальні допоміжні добавки, або активнодіючі речовини згідно з винаходом можуть бути розчинені у відповідних розчинах, таких, як глюкоза або NaCl, щоб пізніше вводитися перфузією. Для парентерального способу введення, зокрема, перфузією, переважні добові дози кожної з двох активнодіючих речовин в комбінації за винаходом такі, як зазначено нижче: - біс-тіазолієва сіль формули (VI), зокрема, T3: від 0,01 до 3 мг/кг; - артемізинін або одне з його похідних, зокрема, артесунат: від 1 до 5 мг/кг. Можуть мати місце особливі випадки, коли підходить більш високе або більш низьке дозування, таке дозування не вийде за рамки винаходу. Згідно із звичайною практикою, доза, відповідна для кожного пацієнта, визначається лікарем в залежності від способу введення, маси тіла і реакцій вказаного пацієнта. Комбінація за винаходом призначена для прийому протягом 1-4 днів підряд, за один або декілька прийомів в день кожної з двох активнодіючих речовин, переважно за 1-3 прийоми (перорально або ректально) або болюсу в день. Цей час лікування, обмежений переважно 4 днями або менше, особливо вигідний, щоб масивно і швидко знизити паразитемію і, усунувши летальний прогноз, дозволити потім лікувати пацієнта від власне малярії. Це подальше лікування може здійснюватися шляхом монотерапії похідними артемізиніну, будь-яким іншим відомим лікуванням від малярії, а також прийомом комбінації згідно з винаходом. Одним прикладом дозування і способу введення може бути 2,4 мг/кг/доб артесунату і 1 мг/кг/доб T3 протягом перших 24 годин (J1) після надходження хворого, що має важку форму малярії, потім 1,2 мг/кг/доб артесунату і 0,8 мг/кг/доб T3 протягом наступних 48 годин (J2 і J3), причому артесунат і T3 вводяться перфузією з ємності для єдиного вливання в день J1 і з ємностей для роздільного вливання в J2 і J3. Введення кожної з двох активнодіючих речовин може проводитися одночасно або роздільно, або розтягнуто у часі (послідовне введення). Коли введення проводиться одночасно, обидві активнодіючих речовини можна об'єднати в одній фармацевтичній формі (пов'язана комбінація), наприклад, в таблетці або желатиновій капсулі, придатних для перорального введення, або в одній і тій же ємності для вливання, або в формі, відповідній для інтраректального введення. Обидві активнодіючих речовини комбінації за винаходом можуть також, незалежно від того, чи вводяться вони одночасно чи ні, знаходитися в різних фармацевтичних формах. Для цього комбінації за винаходом можуть знаходитися у вигляді набору, що містить, з одного боку, сполуку формули (VI) або один з його попередників, зокрема T3, або солі, гідрату або розчинника, а з іншого боку, артемізинін або одне з його похідних, зокрема, артесунат, причому вказана сполука формули (VI), така, як T3, і артесунат знаходяться в роздільних відділеннях і призначені для одночасного, роздільного або розтягнутого у часі введення (послідовне введення). Як приклад, стандартна лікарська форма T3 у вигляді таблетки може містити наступні компоненти: T3 6 мг Маніт 224 мг Кроскармелоза натрію 6 мг Кукурудзяний крохмаль 15 мг Гідроксипропілметілцелюлоза 2 мг Стеарат магнію 3 мг Також як приклад, стандартна лікарська форма артесунату у вигляді таблетки може містити 50 або 100 мг артесунату і звичайні ексципієнти, наприклад, лактозу, кроскармелозу, безводний колоїдний окисел кремнію, мікрокристалічну целюлозу і стеарат магнію. Також як приклад, стандартна лікарська форма, що містить комбінацію артесунату і T3, може містити 1,5 мг T3 і 50 мг артесунату, а також звичайні ексципієнти, вказані вище, причому 7 UA 99510 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 добова доза для дорослого набирається за 4 прийоми по одній таблетці або за один прийом 4 таблеток. Ці ж дозування T3, артесунату або комбінації T3 і артесунату застосовуються для одиничних форм введення ректальним шляхом, з ексципієнтами, відомими фахівцеві. Для способу введення шляхом парентеральної ін'єкції, стандартна лікарська форма T3 може містити 1 мг T3, наприклад, в ампулі, а також звичайні ексципієнти, добре відомі фахівцеві, такі, як гліцерин і фосфатний буфер, причому ампула розрахована на 10 кг ваги тіла. Також як приклад, стандартна лікарська форма артесунату і T3 в ампулі може містити 24 мг артесунату і 1 мг T3, а також звичайні ексципієнти, вказані вище, причому ампула може вводитися з розрахунку одна ампула на 10 кг ваги тіла. Об'єктом даного винаходу є також спосіб лікування і/або профілактики малярії, який включає введення пацієнту терапевтично ефективної дози щонайменше однієї тіазолієвої солі (сполуки формули (VI)) або одного з її попередників, зокрема, T3, і терапевтично ефективної дози артемізиніну або одного з його похідних, зокрема, артесунату, причому вказані дози вводяться одночасно або послідовно вказаному пацієнту, як це описано раніше. Даний винахід стосується також способу, визначеного раніше, лікування і/або профілактики малярії, зокрема, важкої форми малярії. Об'єктом винаходу є також застосування комбінації, що містить як активнодіючі речовини біс-тіазолієву сіль (сполука формули (VI)) або один з її попередників, визначений раніше, і артемізинін або одне з його похідних, зокрема, артесунат, для отримання лікарського засобу, призначеного для лікування або профілактики малярії, зокрема, важкої форми малярії. Нарешті, об'єктом винаходу є: - набір для лікування або профілактики малярії, що містить, з одного боку, щонайменше одну біс-тіазолієву сіль (сполука формули (VI)) або один з її попередників, і, з іншого боку, щонайменше артемізинін або одне з його похідних, зокрема, артесунат, причому вказана сполука формули (VI)/попередник і артемізинін/похідне знаходяться в роздільних відділеннях або ємностях для перфузії і призначені для одночасного або послідовного введення, і - набір, визначений раніше, який відрізняється тим, що він містить, з одного боку, щонайменше дибромід 1,12-додекаметиленбіс[4-метил-5-(2-гідроксіетил)тіазолію] і, з іншого боку, щонайменше артесунат. Комбінація згідно з винаходом була об'єктом фармакологічних і біохімічних випробувань in vivo на мишах, інфікованих плазмодієм типу Plasmodium falciparum (штам Plasmodium vinckei petteri), що дозволяють підтвердити її ефективність і синергічний ефект, який вона забезпечує в лікуванні малярії. Вимірювання in vivo протималярійної активності на мишах, інфікованих Plasmodium vinckei petteri, комбінації диброміду 1,12-додекаметиленбіс[4-метил-5-(2-гідроксіетил)тіазолію (T3) з артесунатом Визначення термінів, що використовуються в цьому випробуванні: - ED50 = доза в мг/кг/доб, яка приводить до зниження на 50 % паразитемії, що спостерігається в інфікованих мишей, - ED90 = доза в мг/кг/доб, яка приводить до зниження на 90 % паразитемії, що спостерігається в інфікованих мишей, - ip = внутрішньочеревинне введення, - iv = внутрішньовенне введення, - ir = внутрішньоректальне введення. 1. Опис випробування, що використовується in vivo - Зараження мишей У день 0 (J0) самиць мишей типу "Swiss" (OF1, 22-26 г), (Charles River Laboratories, France, 8 59 rue de la Paix, 76410 Saint-Aubin-les-Elbeuf), заражають шляхом iv в хвостову вену 10 інфікованих паразитами еритроцитів, суспендованих в 200 мкл NaCl (0,9 %). Використані паразити належать до типу Plasmodium vinckei petteri (штам 279 BY, постачається Dr. I.Landau, Paris, France). Заздалегідь мишей акліматизують протягом двох тижнів. Вони отримують їжу і питво без обмежень. 8 Ін'єкцію 10 інфікованих паразитами еритроцитів проводять в день 1 (J1) до міри паразитемії від 5 % до 10 % (7,2 %±0,2 %). Штам Plasmodium vinckei petteri підтримується щотижневим 78 інфікуванням мишей 10 10 зараженими паразитами еритроцитами, суспендованими в сольовому фосфатному буфері (0,9 %) (зараження внутрішньочеревинним шляхом). - Отримання розчинів T3 і артесунату 8 UA 99510 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Продукти розчиняють в фосфатному буфері 0,3 M (pH=8,1). Кінцева концентрація розчину T3 складає від 40 до 200 мг/л в залежності від дози. Кінцева концентрація розчину артесунату складає від 100 до 500 мг/л в залежності від дози. Продукти вводяться ip. Об'єм введення складає порядку 100 мкл, але залежить від ваги миші. - Лікування Мишей обробляють один раз на день протягом 4 днів J1, J2, J3 і J4 (Peters, W., J.H. Portus, B.L. Robinson. 1975. The chemotherapy of rodent malaria. XXII. The value of drug-resistant strains of Р. berghei in screening for blood schizonticidal activity. Ann. Trop. Med. Parasitol. 69:155-171; і: Ancelin ML, Calas M., Bonhoure А., Herbute S., Vial Н., In vivo antimalarial azctivity of mono and bis quaternary ammonium salts interfering with Plasmodium phospholipid metabolism. Antimicrob. Agents Chemother., 2003, 47, 2598-2605). Використовувалося по чотири миші на кожну дозу. Тваринам вводили шляхом ip, в залежності від конкретного випадку, T3, артесунат або суміш цих двох розчинених активнодіючих речовин. Вимірювання паразитемії На п'ятий день відбирали декілька крапель крові з хвоста миші, щоб визначити паразитемію за допомогою FACS (Fluorescence-activated cell sorter флуоресцентний сортер клітин) і отримати мазок крові. Спочатку паразитемію визначали шляхом FACS на 20000 клітинах. Червоні тільця, відібрані для FACS, фіксували в глутаральдегіді, потім мітили флуорохромом (YOYO1®), який мітить ДНК і, отже, тільки заражені паразитами клітини (Barkan, D., Ginsburg, Н., and Golenser, J. 2000. Optimisation of flow cytometric measurement of parasitemia in plasmodium-infected mice. Int. J. Parasitol. 30: 649-653). Паразитемія нижче 15 % перераховувалася потім на мазках. Мазки фіксували метанолом, потім забарвлювали по Гимзе. Під мікроскопом підраховували число заражених паразитами клітин крові. Паразитемія виражається в процентах заражених еритроцитів, присутніх в аналізі на зразку з 2000 клітин. Значення ED 50 і ED90 визначають в день J5. Паразитемія визначається в перший і десятий день лікування, потім на 15-ий, 22-ий і 47-ий дні. Миші, у яких мазків в день J5 не виявляє ніяких слідів паразитів, будуть перевірятися знов протягом щонайменше 1 місяці після кінця лікування, щоб виявити можливе збільшення числа паразитів. Зціляюча доза є доза продукту, яка забезпечує виживання всієї партії тварин, що отримували лікування через місяць. Визначення ED50 Нульовий процент інгібування відповідає середньому із значень паразитемії, що спостерігалися у інфікованих мишей, які не отримували лікування. 100 % інгібування відповідає дуже низькій або нульовій паразитемії, нижче 0,01 %. Значення ED50 визначені лінійною інтерполяцією кривої-доза відповідь, представленої в логарифмі концентрацій. 2. Вимірювання протималярійної активності in vivo комбінації T3 і артесунату відносно штаму паразита Plasmodium vinckei petteri Щоб довести синергічний ефект двох сполук, важливо знати їх активність, коли вони приймаються окремо, щоб зв'язати їх з дозами, близькими до їх ED 50. Випадок їх введення парентеральним шляхом відповідає клінічній ситуації важкої форми малярії. У цьому випадку важливо швидко знизити паразитемію в ході перших днів лікування. При дозах, що тестуються, один введений артесунат не може знизити паразитемію в перший день, а також на наступні дні (фігура 1). T3 ефективно знижує паразитемію через 4 дні лікування дозою 1 мг/кг/доб, але не перешкоджає зростанню паразитемії після першого дня лікування (фігура 2). Отримані значення ED50 представлені в наступній таблиці I: Таблиця I T3 артесунат 50 ED50 (мг/кг/доб) 0,55 >2,5 Чим нижче ED50, тим краще активність. Так, один T3 показує кращу активність у відношенні паразитемії (0,55 мг/кг/доб), ніж один артесунат (>2,5 мг/кг/доб). Крім того, один T3 в дозі 0,5 мг/кг/доб дозволяє досягнути повного лікування через місяць (результати не показані), тоді як один артесунат, в дозі 2,5 мг/кг/доб, цього не дозволяє. 3. Вимірювання протималярійної активності in vivo комбінації T3/артесунат відносно штаму паразита Plasmodium vinckei petteri 9 UA 99510 C2 5 10 15 Для цього дослідження комбінації вибрана доза 2,5 мг/кг/доб артесунату (трохи нижче, але близька до ED50), причому доза 0,5 мг/кг/доб повністю неактивна у відношенні паразитемії до 4 днів. T3 оцінювався в комбінації з дозою нижче, близької до і вище ED 50, а саме, 0,2, 0,5 і 1 мг/кг/доб. Несподівано виявилося, як показано на фігурах 3, 4 і 5, що комбінація, що містить T3 (в будь-яких вказаних вище дозах) з артесунатом, присутнім в дозі 2,5 мг/кг/доб, дозволяє істотно знизити міру паразитемії в порівнянні з роздільним прийомом тільки T3 або тільки артесунату. Зокрема, важливо констатувати, що через 24 год. після першого введення (день 2) і при будьякій введеній дозі T3 спостерігається зниження паразитемії у мишей, тоді як при введенні цих продуктів роздільно вони є неактивними. Таблиця II (і фігури 3, 4, 5) приводять середню паразитемію, виявлену в день 2 (4 тварин на дозу). Потрібно зазначити, що є статистично значущий синергічний ефект через 24 години після першого введення (день 2) для T3 в дозах 0,2, 0,5 і 1 мг/кг в комбінації з артесунатом в дозі 2,5 мг/кг. Цей дуже значний синергічний ефект після першого дня лікування особливо важливий у випадку лікування важкої форми малярії, якраз де клініцисти прагнуть до швидкого і масивного зниження паразитемії у пацієнта, щоб відсунути летальний прогноз. Таблиця II Артесунат, (мг/кг/доб) 0 2,5 2,5 2,5 2,5 0 0 0 20 25 T3 (мг/кг/доб) 0 0 0,2 0,5 1 0,2 0,5 1 Паразитемія J1 Паразитемія J2 Паразитемія J5 7,20 % 7,00 % 8,10 % 8,30 % 6,10 % 6,60 % 7,80 % 7,20 % 26,90 % 32,90 % 5,70 % 3,40 % 5,10 % 35,00 % 34,00 % 27,90 % смерть 58,20 % 54,90 % 15,10 % 10,70 % 55,20 % 56,80 % 19,40 % Починаючи з дози T3 в 0,5 мг/кг/доб в поєднанні з 2,5 мг/кг/доб артесунату, паразитемія зберігається на своєму початковому рівні до початку лікування протягом всієї тривалості лікування, тоді як окреме введення продуктів цього не дозволяє (таблиця II, фігури 3, 4, 5). Сполука T3 відповідальна за основний ефект в повному лікуванні мишей через місяць. Спільне введення артесунату в дозі 2,5 мг/кг/доб не поліпшує зціляючу дозу, отриману з одним T3. Обговорені вище результати представлені в таблиці III. Таблица III Т3 (мг/кг/доб) 0,2 0,5 1 зниження росту зниження росту паразитів паразитів в в залежності від дози, дні залежності від дози, J3-J5, зціляюча доза дні J3-J5 зниження росту зниження росту паразитів зниження росту паразитів в по відношенню до J0 паразитів в J1 у залежності від дози, протягом всього ходу порівнянні з J0 дні J3-J5 лікування 0 0 Артесунат (мг/кг/доб) 2,5 30 35 Таким чином, коли 2 активнодіючі речовини вводяться в комбінації, паразитемія істотно знижується в 4 перших дня лікування. Цей ефект помітно вище при порівнянних і навіть менших дозах, ніж дози, визначені для введення кожної з двох активнодіючих речовин, взятих окремо. Зокрема, коли T3 приймається в комбінації з артесунатом, причому артесунат присутній в дозі щонайменше 2,5 мг/кг/доб, спостерігається сприятливий ефект зменшення паразитемії. Таким чином, зрозуміло, що комбінація двох активнодіючих речовин особливо ефективна у вікні, що задається мінімальною дозою однієї із сполук і відношенням однієї із сполук до іншої всередині цього вікна. 10 UA 99510 C2 Результати, отримані in vivo на мишах, інфікованих Р. vinckei petteri, доводять, що комбінація за винаходом, що складається з артемізиніну або одного з його похідних (зокрема, артесунату) і біс-тіазолієвої солі (сполука формули (VI)), зокрема T3, вигідні для лікування малярії і, зокрема, важкої форми малярії. 5 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 1. Комбінація, що містить як активнодіючі речовини біс-тіазолієву сіль (сполука формули (VI)): + S N Rc Rb Rd , (VI) в якій Rb означає: - групу R1, яка в свою чергу означає атом водню, алкільний радикал С 1-С5, необов'язково заміщений арильним радикалом (зокрема, фенільним радикалом), гідрокси, алкокси, причому алкільний радикал містить від 1 до 5 атомів вуглецю, або арилокси (зокрема фенокси); - або групу Т, де Τ означає групу формули: z + N S R2 R3 , в якій: R2 означає атом водню, алкільний радикал С1-С5 або групу -СН2-СОО-алкіл(С1-С5); - R3 означає атом водню, алкільний або алкенільний радикал С1-С5, необов'язково заміщений ОН, фосфатну групу, алкоксирадикал, причому алкільний радикал є радикалом С 1-С3, або арилокси або алкіл- або арилкарбонілоксигрупу; або R2 і R3 разом утворюють цикл з 5 або 6 атомів вуглецю; причому R2 і R3 можуть бути пов'язані, утворюючи 5-7-ланковий цикл або гетероцикл, що необов'язково містить один або декілька гетероатомів О і/або S; - Ζ означає алкільний радикал С6-С21, зокрема від C12 або С13 до С21, при необхідності з включенням одного або декількох кратних зв'язків і/або одного або декількох гетероатомів О і/або S, і/або одного або декількох ароматичних циклів, і фармацевтично прийнятні солі цих сполук, за умови, що Ζ не є алкільним радикалом С6-С8, коли Rc, Rd, R2 і R3 означають метильний радикал, або коли Rc і Rd, з одного боку, і R2 і R3, з іншого боку, разом утворюють ароматичні цикли з 6 атомів вуглецю, Rd означає R2, визначений раніше, або Р, причому Ρ означає групу формули: + S N R3 R1 z , Rc означає R3, визначений раніше, або U, причому U означає групу формули: S z + N R1 R2 , за умови, що Rb=T, якщо Rc=R3 і Rd=R2; Rd=P, якщо Rc=R3 і Rb=R1; і Rc=U, якщо Rb=R1, і Rd=R2, в формі вільної основи, солі, гідрату або сольвату, або один з її попередників, вибраний із сполук формул (І)-(V), причому сполука (І) відповідає формулі 11 UA 99510 C2 , (I) в якій: А і А' є однаковими або відрізняються один від одного і означають: - або, відповідно, групу Α1 і Α1'формули: H C (CH2)n R' 1 W , де n означає ціле число від 2 до 4; R1 означає атом водню, алкільний радикал С1-С5, необов'язково заміщений арильним радикалом (зокрема, фенільним радикалом), гідрокси, алкокси, причому алкільний радикал містить від 1 до 5 атомів вуглецю, або арилокси (зокрема, фенілокси); і W означає атом галогену, вибраний з хлору, брому або йоду, або нуклеофобну групу, як тозильний CH3-C6H4-SO3, мезитильний CH3-SO3-радикал, CF3-SO3, NO2-C6H4-SO3; - або групу А2, яка являє собою формільний -СНО або ацетильний -СО-СН3-радикал; - В і В' є однаковими або відмінними один від одного і означають: - або відповідно групи В1 і В1', якщо А і А' означають відповідно А1 і А1', причому В1 і В1' означають групу R1, яка має те ж визначення, що і R'1 вище, але не може бути атомом водню; - або відповідно групи В2 і В'2, якщо А і А' означають А2, причому В2 або В'2 означають групу R1, визначену вище, або групу формули: S R2 Ra R3 , в якій -Ra означає групу RS- або RCO-, де R означає алкільний радикал С1-С6, зокрема С1-С5, лінійний, розгалужений або циклічний, необов'язково заміщений однією або декількома групами гідрокси, алкокси або арилокси, або аміногрупу і/або групу -СООН або СООМ, де Μ означає алкіл С1-С3; фенільний або бензильний радикал, причому фенільний радикал необов'язково заміщений щонайменше одним алкільним радикалом або С1-С5 алкокси, який сам необов'язково заміщений аміногрупою, або азот- або кисневмісним гетероциклом, групу -СООН або -СООМ; або групу -СН2-гетероцикл, з 5 або 6 елементами, що містить азот і/або кисень; R2 означає атом водню, алкільний радикал С1-С5 або групу -СН2-СОО-алкіл(С1-С5); і R3 означає атом водню, алкільний або алкенільний радикал С 1-С5, необов'язково заміщений ОН, фосфатну групу, алкоксирадикал, причому алкільний радикал є радикалом С 1-С3; або арилокси або алкіл- або арилкарбонілоксигрупу; або R2 і R3 разом утворюють цикл з 5 або 6 атомами вуглецю; R2 і R3 можуть бути пов'язані, утворюючи цикл з 5-7 атомів (вуглець, кисень, сірка); α означає: - або простий зв'язок, коли А і А' означають А1 і Α'1, або коли А і А' означають А2, тобто групу СНО або -СОСН3, і В2 і В'2 означають S Ra R2 R3 (b) S , - або, коли А і А' означають А2 і В2, і В'2 означають R1, групу формули: R2 Ra (a) або групу формули: (b) (a) S Ra R3 , в якій (а) означає зв'язок з Ζ і (b) зв'язок з атомом азоту; 12 UA 99510 C2 - Ζ означає алкільний радикал С6-С21, зокрема від С12 або С13 до С21, при необхідності з введенням одного або декількох кратних зв'язків, і/або один або декілька гетероатомів О і/або S, і/або один або декілька ароматичних циклів, і фармацевтично прийнятні солі цих сполук, за умови, що R'1 не означає Η або алкільний радикал С1 або С2, коли n=3 або 4, a R1 означає алкільний радикал С1-С4, і Ζ означає алкільний радикал С6-С10, причому сполука (II) відповідає формулі CH (CH2 )n N W R' 1 R1 z N (CH2 )n R1 H C R' 1 W , (II) сполука (III) відповідає формулі H O Ra H O S N R3 z N R2 S R2 Ra R3 , (III) сполука (IV) відповідає формулі z R2 R2 R1 N S Ra O H S N Ra R1 O H , (IV) сполука (V) відповідає формулі O O R1 H R1 N N H z S Ra S R3 R3 Ra , (V) в якій Ra, R1, R'1, R2, R3, W, n і Ζ мають значення, визначені раніше, і артемізинін або одне з його похідних, вибраних з артесунату, артеметеру, артеетеру, гідроартемізиніну або дигідроартемізиніну, для лікування і/або профілактики важкої форми малярії. 2. Комбінація за п. 1, яка відрізняється тим, що біс-тіазолієва сіль (сполука формули (VI)) вибрана з: - диброміду 1,12-додекаметиленбіс[4-метил-5-(2-гідроксіетил)-тіазолію]; - дийодиду 1,12-додекаметиленбіс[4-метил-5-(2-метоксіетил)-тіазолію]; - дийодиду 1,12-додекаметиленбіс(4-метилтіазолію); - дийодиду 1,16-гексадекаметиленбіс[4-метил-5-(2-метоксіетил)-тіазолію]; - дийодиду 3,10-діоксадодекаметиленбіс[5-(1,4-диметил)-тіазолію]; - диброміду 3,10-діоксадодекаметиленбіс[5-(1-бензил-4-метил)-тіазолію]; - дийодиду додекаметиленбіс[5-(1-метил-4-етоксикарбонілетил)-тіазолію]; - диброміду додекаметиленбіс[5-(1-метил-4-етоксикарбонілетил)-тіазолію]; - дийодиду додекаметиленбіс[4-(1-метил)-тіазолію]; - диброміду додекаметиленбіс[4-(1-бензил)-тіазолію]. 3. Комбінація за будь-яким з пп. 1, 2, яка відрізняється тим, що кожна з активнодіючих речовин призначена для одночасного або послідовного введення. 4. Фармацевтична композиція, що містить терапевтично ефективні дози артемізиніну або одного з його похідних і щонайменше одну біс-тіазолієву сіль (сполука формули (VI)) або один з її попередників, а також щонайменше один фармацевтично прийнятний ексципієнт, для лікування і/або профілактики важкої форми малярії. 5. Фармацевтична композиція за п. 4, яка відрізняється тим, що біс-тіазолієва сіль (сполука формули (VI)) є дибромідом 1,12-додекаметиленбіс[4-метил-5-(2-гідроксіетил)-тіазолію]. 13 UA 99510 C2 6. Фармацевтична композиція за п. 4 або п. 5, яка відрізняється тим, що похідним артемізиніну є артесунат. 7. Фармацевтична композиція за будь-яким з пп. 4-6, яка відрізняється тим, що вона підходить для перорального, ректального введення або для ін'єкцій, і переважно підходить для внутрішньовенних ін'єкцій, зокрема, у вигляді вливань. 8. Застосування комбінації за будь-яким з пп. 1-3 для отримання лікарського засобу, призначеного для лікування або профілактики важкої форми малярії. 9. Набір для лікування або профілактики важкої форми малярії, що містить, з одного боку, щонайменше одну біс-тіазолієву сіль (сполука формули (VI)) або один з її попередників, а з іншого боку, щонайменше артемізинін або одне з його похідних, як вказано в п. 1, причому вказана сполука формули (VI) або один з її попередників і артемізинін або одне з його похідних знаходяться в різних відділеннях і призначені для одночасного або послідовного введення. 10. Набір за п. 9, який відрізняється тим, що він містить, з одного боку, щонайменше дибромід 1,12-додекаметиленбіс[4-метил-5-(2-гідроксіетил)-тіазолію], а з іншого боку, щонайменше артесунат. 14 UA 99510 C2 15 UA 99510 C2 Комп’ютерна верстка Л. Купенко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 16