Спосіб використання рідкого поживного середовища для визначення чутливості мікробактерій туберкульозу до протитуберкульозних препаратів

Номер патенту: 10474

Опубліковано: 25.12.1996

Автор: Білько Іван Петрович

Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Способ использования жидкой питательной среды для определения чувствительности микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препа­ратам путем осуществления контакта исследуемых микобактерий туберкулеза с жидкой питательной средой, содержащей противотуберкулезный пре­парат, их инкубации и учета результатов микроскопированием, отличающийся тем, что перед осуществлением контакта микобактерий туберку­леза с жидкой питательной средой, содержащей противотуберкулезный препарат, в чашку Петри помещают диски фильтровальной бумаги,налива­ют туда жидкую питательную среду, содержащую противотуберкулезный препарат, накладывают дис­ки агарового геля, засевают их исследуемой культу­рой микобактерий туберкулеза, инкубируют, снимают диски агарового геля с фильтровальной бумаги, помещают их в чашку Петри и учитывают результаты.

Текст

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано бактериологическими лабораториями противотуберкулезных учреждений для определения чувствительности микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам. Известен способ использования жидкой питательной среды для определения чувствительности микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам по Прайсу [56], включающий приготовление из исследуемой культуры микобактерий туберкулеза препарата-мазка на стеклянной пластинке размером 70 х 12 мм, простерилизованной в сухожаровой печи. Мазок из культуры микобактерий туберкулеза готовят так же как и для микроскопических исследований. Затем мазок на стеклянной пластинке захватывают стерильным пинцетом и погружают в пробирку с жидкой питательной средой, содержащей заданную концентрацию противотуберкулезного препарата так, чтобы жидкая среда полностью покрывала стеклянную пластинку с мазком. Посев инкубируют при 37°С. Через 10-12 суток стеклянную пластинку стерильным пинцетом извлекают из жидкой среды, отмывают в стакане со стерильной водой, высушивают на воздухе, фиксируют мазок над пламеней горелки, окрашивают по Цилю-Нильсену и микроскопируют. При этом обнаружение роста микобактерий туберкулеза в мазке на стеклянной пластинке в виде микроколоний, напоминающих по форме "косы" или "жгуты" расценивают как устойчивость микобактерий туберкулеза к данной концентрации противотуберкулезного препарата, а отсутствие роста микобактерий туберкулеза в виде микроколоний, напоминающий по форме "косы" или "жгуты" - как чувствительность микобактерий туберкулеза к данной концентрации противотуберкулезного препарата. Существенными недостатками данного способа являются: 1) опасность способа, обусловленная возможностью инфицирования персонала микобактериями туберкулеза и обсеменение ими окружающей среды в процессе изъятия препарата-мазка из жидкой среды, отмывание его в воде и высушивания; 2) невозможность использования способа в тех случаях, когда необходимо определить чувствительность микобактерий туберкулеза, выделенных от больных, леченных противотуберкулезными препаратами, так как данные больные часто выделяют микобактерий туберкулеза, лишенные корд-фактора, а следовательно, при размножении не образуют микроколоний в виде "кос" или "жгутов"; 3) неэкономичность способа, связанная со значительным расходованием жидкой питательной среды и противотуберкулезных препаратов. В основу изобретения поставлена задача усовершенствования способа использования жидкой питательной среды для определения чувствительности микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам, в котором в чашку Петри помещают диски, фильтровальной бумаги, наливают туда жидкою питательную среду, содержащую противотуберкулезный препарат, накладывают диски агарового геля, засевают их исследуемой культурой, инкубируют, снимают диски агарового геля с фильтровальной бумаги, помещают их в чашку Петри с последующим микроскопированием, что обеспечивает безопасную работу персонала, экономию дорогостоящих питательных сред и противотуберкулезных препаратов и выявление микобактериальных клеток даже без корд-фактора. Поставленная задача решается тем, что в способе использования жидкой питательной среды для определения чувствительности микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам, включающем контакт микобактерий туберкулеза с жидкой питательной средой с противотуберкулезным препаратом, их инкубацию и микроскопирование, согласно изобретения, перед осуществлением контакта микобактерий туберкулеза с жидкой питательной средой с противотуберкулезным препаратом в чашку Петри помещают диски фильтровальной бумаги, наливают туда жидкую питательную среду с противотуберкулезным препаратом, накладывают диски агарового геля, засевают их исследуемой культурой микобактерий туберкулеза, инкубируют, снимают диски агарового геля с фильтровальной бумаги, помещают их в чашку Петри и учитывают результаты. Способ осуществляют следующим образом: в стерильную чашку Петри, например, с диаметром дна 9 см, соблюдая стерильность, помещают 10 стерильных дисков фильтровальной бумаги, например, диаметром 9 см. Затем на диски наливают стерильную жидкую питательную среду, например, Прайса, содержащую заданную концентрацию противотуберкулезного препарата, например, изониазида в концентрации 1 мкг/мл из расчета 0,1 мл жидкой среды на 1см диаметра диска фильтровальной бумаги, умноженное на количество дисков фильтровальной бумаги в чашке Петри (в данном случае 9 мл) и дают ей полностью увлажнить диски фильтровальной бумаги. В стерильную чашку Петри с диаметром дна 9 см наливают 15 мл 2% стерильного агарового геля, приготовленного на 0,9% водном растворе натрия хлорида и растопленного на водяной бане, и дают ему застыть при комнатной температуре. Из образовавшейся пластины агарового геля толщиной от 1,5 до 2 мм стерильным пробковыдавливателем диаметром от 1 до 1,5 см выштамповывают круглые диски, которые стерильным скальпелем извлекают и помещают на поверхность дисков фильтровальной бумаги, ранее помещенных в чашку Петри и пропитанных жидкой питательной средой с заданной концентрацией противотуберкулезного препарата так, чтобы между дисками агарового геля и поверхностью дисков фильтровальной бумаги не было пузырьков воздуха. На свободную поверхность дисков агарового геля наносят по 0,1 мл суспензии исследуемых культур микобактерий туберкулеза в 0,9% водном растворе натрия хлорида, содержащей 500 млн. клеток на 1 мл раствора и равномерно распределяют ее по поверхности дисков агарового геля бактериальной петлей. В зависимости от количества исследуемых культур микобактерий туберкулеза и обеспеченности баклабораторий, могут быть использованы чашки Петри и диски фильтровальной бумаги с другими размерами диаметров, а также другие по составу жидкие питательные среды. В остальном выполнение способа остается неизменным. Посев инкубируют при 37°С в течение 10-12 суток. Затем стерильным скальпелем снимают диск агарового геля с поверхности дисков фильтровальной бумаги, помещают его поверхностью с посевом микобактерий туберкулеза кверху в свободную чашку Петри и микроскопируют. При этом наличие роста микобактерий туберкулеза на диске агарового геля в виде микобактерий расценивают как устойчивость исследуемой культуры микобактерий туберкулеза к данной концентрации противотуберкулезного препарата, а отсутствие роста микобактерий туберкулеза на диске агарового геля - как чувствительность исследуемой культуры микобактерий туберкулеза к данной концентрации противотуберкулезного препарата. При необходимости визуального учета: результатов посев микобактерий туберкулеза на диске агарового геля инкубируют при 37°С в течение более 12 суток и определяют устойчивость или чувствительность исследуемой культуры микобактерий туберкулеза к данной концентрации противотуберкулезного препарата по наличию или отсутствию микроскопического роста микобактерий туберкулеза на диске агарового геля. Основными преимуществами разработанного способа являются: 1) безопасность выполнения способа, обусловленная отсутствием необходимости извлечения микобактерий туберкулеза из жидкой питательной среды, отмывания их от среды в воде и высушивания на воздухе; 2) способ пригоден для определения лекарственной чувствительности всех, выделенных из диагностического материала штаммов микобактерий туберкулеза, включая и те, которые при росте не образуют "кос" или "жгутов", так как при посеве на диск агарового геля клетки микобактерий туберкулеза фиксируются на геле, что исключает их броуновское движение; 3) экономичность способа, обусловленная тем, что в одну чашку Петри с диаметром дна 9 см, содержащую 10 дисков фильтровальной бумаги диаметром 9 см, пропитанных 9 мл жидкой питательной среды с заданной концентрацией противотуберкулезного препарата, можно поместить 13-15 дисков агарового геля диаметром 1,5 см и таким образом одномоментно определить чувствительность 13-15 исследуемых культур микобактерий туберкулеза к данной концентрации противотуберкулезного препарата, в то время когда для определения чувствительности 10-15 культур микобактерий туберкулеза способом Прайса необходимо расходовать 100-120 мл жидкой среды. Разработанный способ, как следует из вышеизложенного, может найти широкое применение в учреждениях практического здравоохранения.

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Method for use of nutrient medium for determination of sensitivity of tuberculosis mycobacteria to antituberculosis preparations

Автори англійською

Bilko Ivan Petrovych

Назва патенту російською

Способ использования жидкой питательной среды для определения чувствительности микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам

Автори російською

Билько Иван Петрович

МПК / Мітки

МПК: C12Q 1/02, C12N 1/02, C12R 1/32, C12N 1/20

Мітки: спосіб, чутливості, туберкульозу, рідкого, визначення, препаратів, поживного, мікробактерій, використання, середовища, протитуберкульозних

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/2-10474-sposib-vikoristannya-ridkogo-pozhivnogo-seredovishha-dlya-viznachennya-chutlivosti-mikrobakterijj-tuberkulozu-do-protituberkuloznikh-preparativ.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб використання рідкого поживного середовища для визначення чутливості мікробактерій туберкульозу до протитуберкульозних препаратів</a>

Подібні патенти