Моноклональні антитіла 156с10, специфічні до імуноглобулінів людини класу g, придатні для імуноаналізу

Моноклональні антитіла 156С10, специфічні до імуноглобулінів людини класу G, придатні до імуноаналізу, отримані шляхом використання гібридних клітин, що одержані при злитті мієломних мишачих клітин Sp 2/0 та спленоцитів мишей лінії Balb/c, попередньо імунізованих імуноглобулінами людини класу G, які відрізняються тим, що належать до ізотопу імуноглобулінів, мають високу константу афінності й титром у культуральній рідині. Корисна модель стосується імунологи та біотехнологіґ й може бути використана для отримання моноклональних антитіл (МКАТ) проти IgG людини, придатних для імуноаналізу. Відомі МКАТ проти IgG людини [1]. Однак дані моноклональні антитіла придатні для визначення підкласів IgG людини та непридатні для використання в імуноаналізі. Найбільш близьким до запропонованих є моноклональні антитіла, які взаємодіють із всіма підкласами IgG людини [2]. В основу корисної моделі поставлено завдання отримати моноклональні антитіла специфічні до Імуноглобулінів G людини, які придатні для використання в імуноаналізі. Суть корисної" моделі в отриманні моноклональних антитіл 156С10, які характеризуються більшою специфічністю та константою афінності Поставлене завдання вирішують шляхом використання гібридних клітин, що одержані при злитті мієломних мишачих клітин Sp 2/0 та спленоцитів мишей лінії Balb/c, попередньо імунізованих імуноглобулінами класу G людини. Даний клон МКАТ характеризується наступними ознаками. Моноклональні антитіла 156С10, специфічні до IgG людини, належать до ізотопу G2b імуногло булінів, мають константу афінності 1,1хЮ10М та титр у непрямому імуноферментному аналізі (ІФА) 1-1000. Приклад 1 Одержання та очистка моноклональних антитіл із асцитичноГ рідини. Для нагромадження значної кількості МКАТ 156С10 пбридоми-продуценти даних антитіл культивували у черевних порожнинах мишей Для цього за 10-14 днів до ін'єкції' клітин мишам вводили внутрішньочеревно по 0,5мл пристану. Мінеральне масло служило сильним стимулятором асцитоутворення. Потім вводили від 10 до 107 гібридомпродуцентів МКАТ в 1мл середовища. Через 5-8 днів у мишей починала накопичуватися рідина в черевній порожнині. її відбирали шляхом проколювання черевної стінки товстою голкою. З однієї миші за кілька разів вдавалося отримати від 5 до Юмл асцитичної рідини Після центрифугування при 3000об/хв протягом 5 хвилин асцит зберігали в замороженому стані. Антитіла, що знаходяться в асциті, осаджували сульфатом натрію (18% та 16%), розчиняли у дистильованій воді, переосаджували сульфатом амонію (50%) та розчиняли у мінімальній кількості води. 00 00 ю 10588 Приклад 2 Визначення ізотипів одержаних МКАТ. Ізотип отриманих моноклональних антитіл визначали із використанням стандартного набору для ізотипування ISO-2 («Sigma», США). Ізотипування проводили за допомогою антигенопосередкованого твердофазного Імуноферментного аналізу (ТІФА). Для цього в планшет сенсибілізований IgG людини вносили культуральні рідини гібридом у шести повторностях Ізотип визначали за допомогою моноспецифічних козячих сироваток. Типуючі антитіла виявляли антикозячим пероксидазним кон'югатом («Sigma», США). Облік результатів проводили відповідно до рекомендацій виробника. Моноклональні антитіла 156С10, специфічні до IgG людини, належать до ізотопу G2b імуноглобулінів. Приклад З Визначення константи афінності МКАТ. Константу афінності МКАТ визначали методом Інгібування за А Кулаковим [4] Різні концентрації IgG (від 10~9 до 10" моль/л) змішували із зразками культуральних рідин, що містять МКАТ Проінкубовані зразки (1 годину при 37°С) переносили в 96лунковий планшет, попередньо сенсибілізований IgG людини. Далі здійснювали процедуру непрямого ТІФА. Як контроль використовували зразки культуральних рідин, що попередньо не інкубували з IgG Константа афінності МКАТ становила 1,1х1010М. Комп'ютерна верстка Н. Лисенко Приклад 4 Визначення титру МКАТ. Культуральну рідину із вмістом МКАТ двократно титрували у непрямому ТІФА, використовуючи при цьому полістеролові планшети сенсибілізовані IgG людини. Титром вважали таке розведення культуральної рідини при якому оптична густина була вдвічі меншою від максимального значення. Титр у непрямому імуноферментному аналізі (ІФА) становив 1-1000. Література: 1. Климович В.Б., Самойлович М.П., Крутецкая И Ю. и др. Моноклональные антитела к подклассам IgG человека: получение и исследование специфичности // Иммунология. - 1998. - №3. -С.2731.)2. Reimer СВ., Phillips D.J., Aloisio С Н. et al. Evaluation of thirty-one mouse monoclonal antibodies to human IgG epitopes // Hibridoma. - 1984. -V.3, 3. P.263-275 ). 3. Tijssen P Practice and theory of enzyme immunoassays // Lab. Techiques in Biochem. and Molecular Biology.-1985 -15 -674p. 4 Кулаков А В , Климова СВ., Ярилин Д.А. и др. Изучение аффинности естественных антител сыворотки крови человека к компоненту клеточной стенки бактерий - глюкозамилмурамилдипептиду, обладающей адъювантной активностью // Иммунология. -№1. -1997. - С.21-24. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вуп. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601