Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу igm до treponema pallidum (dia-igm-syph)

УКРАЇНА (19) UA (11)10590 (із) U (51)7А61К39/21 МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ ДЕРЖАВНИЙ ДЕПАРТАМЕНТ ІНТЕЛЕКТУАЛЬНОЇ ВЛАСНОСТІ ОПИС ДО ДЕКЛАРАЦІЙНОГО ПАТЕНТУ НА КОРИСНУ МОДЕЛЬ видасться під відповідальність власника патенту (54) ТЕСТ-СИСТЕМА ІМУНОФЕРМЕНТНА ДЛЯ ВИЯВЛЕННЯ АНТИТІЛ КЛАСУ ЮМ ДО TREPONEMA PALLIDUM (DIA-IGM-SYPH) 1 (21)и200504784 {22)20.05 2005 (24) 15 11.2005 (46) 15.11.2005, Бюл. № 11, 2005 р. (72) Семиноженко Володимир Петрович, Гураль Анатолій Леонтійович, Шевчук Олександр Анатолійович, Пилипенко Віталій Григорович, Раєвська Галина Євгенівна, Іванська Наіля Валєєвна, Троянський Василь Васильович, Горлов Юрій Іванович, Пономаренко Наталія Михайлівна, Терещенко Михайло Іванович, Костенко Оксана Георгіївна, Орловська Ірина Вікторівна (73) Акціонерне товариство закритого типу науко во-виробнича компанія "Діапроф-Мед" {57) Тест-система Імуноферментна для виявлення антитіл класу ІдМ до Treponema pallidum (DIA-IgMSYPH), в якій використовують імуносорбент з іммобілізованими анти-lgM антитілами, рекомбінантний антиген Treponema pallidum в складі кон'югату і сироватки крові, яка відрізняється тим, що імуносорбент містить моноклональні антитіла проти імуноглобулінів людини класу М, сироватки досліджують в розведенні 1-10, а як кон'югат використовують суміш рекомбінантних поліпептидів рТр17 та рТр47 - аналогів антигенів Treponema pailidum, мічених пероксидазою. Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для серологічної" діагностики вродженого сифілісу і диференційної оцінки різних стадій цього захворювання В Україні тест-системи для виявлення вродженого сифілісу і диференційної діагностики різних стадій цього захворювання не виробляються. В Росії випускається тест-система "РекомбиБест антипаллидум-lgM" [ЗАО "Вектор-Бест", Новосибірськ], в складі якої на твердій фазі сорбовані антитіла проти ІдМ людини; кон'югат рекомбінантний білок Treponema pallidum, мічений пероксидазою хрону, сироватки досліджуються в без розведення [\]. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-системи для серологічної діагностики вродженого сифілісу і диференційної' оцінки різних стадій цього захворювання. В основу корисно/ моделі покладено завдання створити імуноферментну тест-систему на основі імуносорбенту з сорбованими моноклональними антитілами проти ІдМ людини. Досліджувані сироватки використовують в розведенні 1.10. До складу кон'югатів входять суміш очищених рекомбінантних поліпептидів рТр17 та рТр47 - аналогів антигенів Treponema pallidum, мічених пероксидазою Приклад 1 Визначення антитіл класу ІдМ проти Treponema pallidum у сироватці крові дитини К., 2004 року народження Визначення проводять за відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Для цього вносять в лунки планшета-імуносорбенту з фіксованими на ньому моноклональними антитілами проти ІдМ людини по 90мкл розчину для розведення сироваток та по Юмкл досліджуваної сироватки крові дитини для виявлення в ній антитіл класу М та контрольні зразки (2 позитивних і З негативних). Накривають планшет клейкою плівкою або кришкою та інкубують при температурі 37°С протягом ЗОхв Після закінчення інкубації видаляють вміст лунок за допомогою промивана або 8-канальноі піпетки та промивають лунки чотири рази розчином для промивання планшетів. В лунки планшета вносять по 10Омкл розчину кон'югату - суміші рекомбінантних поліпептидів рТр17 та рТр47 - аналогів антигенів Treponema pallidum, мічених пероксидазою, та інкубують планшет у термостаті 30хв. при 37°С. Після закінчення інкубації промивають лунки шість разів і вносять по ЮОмкл розчину проявника (субстратний розчин з хромогеном ТМБ) та інкубують при 18-22°С у темряві 30хв. 10590 Зупиняють кольорову реакцію, вносячи до всіх проб по ЮОмкл стоп-реагенту. Не більше як через 1хв. після зупинення кольорової реакції' визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі за допомогою спектрофотометра. Значення ОГ зразка прямо пропорційне кількості антитіл у сироватці. Результати визначення антитіл класу ІдМ до Treponema pallidum в сироватці, визначене при застосуванні нашої тест-системи, порівнювали з даними, отриманими при використанні тестсистеми виробництва ЗАО "Вектор-Бест" (Росія). Досліджені сироватки хворої було ідентифіковано як позитивні на наявність антитіл класу )дМ проти антигенів Treponema pallidum. Приклад 2. Визначення чутливості та специфічності пропонованої тест-системи Використовуючи названі тест-системи, досліджували сироватки крові (по 20 достеменно позитивних та 100 достеменно негативних сироваток). Усі сироватки досліджували у двох повторностях кожною тест-системою за описаною методикою Усі 20 позитивних, сироваток показали, наявність Комп'ютерна верстка А Крупевський антитіл класу ІдМ проти Treponema pallidum, що складає 100% чутливості. З 100 негативних сироваток виявилися справді негативними всі 100 (специфічність - 100%) у пропонованій тестсистемі. В порівнюваній тест-системі з Росії з 20 достеменно позитивних сироваток 20 також були позитивними. Чутливість тест-системи становила 100% 3 100 негативних сироваток - 2 сироватки були виявлені як хибно-позитивні. Специфічність порівняльної тест-системи становила 98%. Таким чином, пропонована тест-система забезпечує виявлення антитіл класу ІдМ проти антигенів Treponema pallidum в сироватках людей. Проста і надійна в роботі, проявляє високу чутливість та специфічність. Використана література: 1 Инструкция по применению тест-системы "РекомбиБест антипаллидум-ІдМ-стрип" производства ЗАО "Вектор-Бест", п Кольцове, Новосибирской обл., 2003, 3 с. 2. AT. Михайлов, В.Н. Симирский "Методы иммунохимического анализа в биологии развития". М. "Наука", 1981. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул Урицького, 45, м Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вуп. Глазунова, 1, м. К и і в - 4 2 , 01601