Тест-система для виявлення антитіл проти збудника сифілісу treponema pallidum (іфа-trep)

Винахід-відноситься до галузі медицини, а точніше до вірусології, і може використовуватись для проведення імунологічних досліджень, діагностичних аналізів інфікованості окремих людей та скринінгових досліджень груп населення на інфікованість збудником сифілісу Treponema pallidum. Відома тест-система [1] для проведення імуноферментного виявлення антитіл (AT) проти збудника сифілісу Treponema pallidum в сироватках чи плазмі людей. В основі тест-системи лежить використання рекомбінантного протеїна - аналога глікопротеїну поверхні збудника Treponema pallidum з імунодомінантними епістолами, що реагують з антитілами проти цього збудника. Вітчизняною промисловістю такі рекомбінантні протеїни не випускаються. Відома тест-система для імуноферментного виявлення AT [2] на основі рекомбінантних поліпептидів, фіксованих на твердій фазі - зернах полістиролу. Для промислового виробництва потрібно закупати велику кількість дорогих препаратів цих рекомбінантних поліпептидів за кордоном. В основу винаходу поставлено завдання створити імуноферментну тест-систему на основі нового рекомбінантного поліпептиду аналогу глікопротеїну поверхні збудника Treponema pallidum і за рахунок цього забезпечити виявлення антитіл проби збудника, не зменшуючи надійність та специфічність системи. Поставлене завдання вирішують шляхом використання в імуноферментній системі аналогу глікопротеїну поверхні збудника Treponema pallidum фіксованого в лунках полістеролових планшет. Приклад 1. Визначення антитіл до антигенів збудника сифілісу Treponema pallidum в сироватці крові пацієнта К. Визначення проводять по відомій методиці [2] імунодефіцитного аналізу (ІФА). Для чого сироватку крові пацієнта розводять фосфорнонатрієвим • буфером у співвідношенні 1 : 10. Планшет імуносорбент з фіксованим аналогом глікопротеїну поверхні збудника Treponema pallidum, двічі промивають, вносять в лунки 90мкл розчину для розведення сироваток та 10мкл сироватки. У 3 вільні лунки планшета вносять по 50мкл розчину та по 50мкл негативного контролю, в 3 інші лунки вносять 100мкл позитивного контролю, а дві вільні лунки залишають контрольними. Планшет витримують 40хв при 37°C, потім 4 рази промивають, висушують, вносять в лунки по 100мкл кон'югату, інкубують планшет у повітряному термостаті 30хв при 37°C, знову промивають 6 разів і висушують. Потім вносять в усі лунки проявник з хромогеномортофенілендіаміном (ОФД) та гідроперитом, витримують 30хв при кімнатній температурі в темному місці, зупиняють пероксидазну реакцію внесенням в усі лунки по 50мкл розчину сірчаної кислоти І не більш ніж через 1хв вимірюють оптичну щільність (ОЩ) при довжині 492нм. Величина ОЩ в цьому діапазоні світла пропорційна концентрації антитіл до антигену збудника сифілісу Treponema pallidum у зразках сироватки чи плазми. Сироватку пацієнта для порівняння досліджували на вміст антитіл до антигену збудника сифілісу Treponema pallidum відомими тест-системами фірми Sanofy Diagnostic Pasteur (Франція). Дослідження тест-системами сироватки пацієнта ідентифіковані як позитивні на вміст антитіл проти антигену збудника сифілісу Treponema pallidum. Приклад 2. Визначення надійності та специфічності запропонованої тест-системи. Досліджують сироватки із станції переливання крові 19 інфікованих і 19 негативних сироваток тест-системи. Усі сироватки досліджувались в 4 - х повторах кожною тест-системою по описаній методиці. Дослідження тест-системами 19 інфікованих сироваток дало позитивний результат на наявність в них антитіл проти антигену збудника сифілісу Treponema pallidum при 100% відтворенні результатів, а також негативні результати досліджень 19 негативних сироваток при 100% відтворенні. Таким чином, запропонована тест-система забезпечує виявлення антитіл проти антигенів збудника сифілісу Treponema pallidum, має високу специфічність, надійна у використанні.