Спосіб визначення життєздатності збудника раку картоплі

Спосіб визначення життєздатності збудника раку картоплі, що включає застосування розчинів сполук міді, який відрізняється тим, що життєздатність патогену визначається по забарвленню його зооспорангіїв за допомогою розчину сполуки одновалентної міді (СигСІг) після попередньої' обробки вірусів дослідного зразка розчином NaOH Корисна модель відноситься до області фітопатології, зокрема до визначення життєздатності зимових зооспорангіїв збудника раку картоплі і може бути використана для контролю за фітосанітарним станом вогнищ раку картоплі, а також при вивченні впливу агротехнічних, хімічних та інших факторів на життєздатність патогену. Відомий спосіб визначення життєздатності збудника раку картоплі характеризується тим, що живі зооспорангіі гриба після обробки їх розчином NaOH забарвлюються в розчині солей двохвалентноі міді CuSO4 і CuClz в синій колір, а мертві і пророслі залишаються при цих умовах без змін [1]. По кількості забарвлених і незабарвлених зооспорангіїв визначають співвідношення живих і мертвих клітин патогену в дослідному зразку. Недоліком цього способу є те, що він досить трудомісткий і довготривалий Для проведення аналізу треба затратити не менше однієї доби в зв'язку з тим, що процес розвитку забарвлення клітин патогену розчином солей двохвалентної міді CuSO4 і СиСІ2 проходить дуже повільно Мета - розробити швидкий і легкий при виконанні спосіб визначення життєздатності зооспорангіїв збудника раку картоплі. Мета досягається за рахунок зміни барвників, зокрема розчин двовалентних сполук міді CuSO4 і CuCb заміняють на розчин одновалентної міді CU2CI2, який забезпечує процес забарвлення патогену в 10-12 разів швидше. Використання цього фарбника дозволяє скоротити час на проведення аналізу дослідного зразку до 2-х годин і значно покращує при цьому якість роботи. Приклад конкретного виконання Аналізу піддягають зимові зооспорангіі патогену, які виділяють з ракових наростів [2] або з ґрунту [3] Для аналізу використовують як чисту культуру зооспорангіїв гриба, так і різні інфекційні матеріали, в яких вміст зооспорангіїв не менше п'яти відсотків. Для аналізу використовують 5-1 Омг інфекції' дослідного зразку, який поміщають в пробірку, заливають 2-Змл 15%-ного розчину NaOH, перемішують скляною паличкою, підігрівають на полум'ї спиртівки до початку кипіння і залишають на одну годину. При відстоюванні суспензії інфекція випадає в осад. За допомогою піпетки відбирають 0,1-0,2мл осаду, переносять його в іншу пробірку і добавляють до нього 3-4мл насиченого розчину СигСІг Суспензію старанно перемішують і залишають на одну годину За цей час життєздатні зооспорангії' забарвлюються в синій або голубий колір, а мертві і пророслі залишаються без змін. При цьому, забарвленні і незабарвлені зооспорангіі попадають в осад. З цього осаду готують 3-4 препарати на предметних скельцях. Для цього осад відбирають піпеткою і наносять маленьку каплю на предметне скло Каплю накривають покривним склом і проводять мікроскопічний аналіз. Для кожного препарату використовують таку ж кількість осаду, при якому на виготовленому із нього препараті можна легко рахувати забарвлені і незабарвлені зооспорангії. Підрахунок забарвлених і незабарвлених зооспорангіїв ведуть окремо. При низькій концентрації інфекції в препараті зооспорангії' рахують по всій площині покривного скла. Потім сумують живих І мертвих зооспорангіїв на всіх препаратах і визначають їх співвідношення. 00 00 10880 При наявності високої концентрації зоспорангіїв в приготовлених препаратах підрахунок ведуть в 5-6 місцях препарату. В кожному місці в одному полі зору підраховують кількість живих і мертвих зооспорангіїв та сумують їх окремо спочатку на одному, а потім на всіх взятих в дослідження препаратах. На цій основі визначають співвідношення живих і мертвих зооспорангіїв в даному зразку. Запропонований спосіб дозволяє швидко і точно визначити стан збудника раку як в ґрунті вогнища так і при вивченні токсичних для патогенна речовин. Комп'ютерна верстка М. Мацело Література. 1. Голик И.В., Кузьмич В.Ф Способ определения жизнеспособности возбудителя рака картофеля Авт Св СССР №571515, 1977г. 2. Голик И.В. Состав для выделения зооспорангиев Synchytrium endobioticum (Schild) Регс. из раковых наростов картофеля Авт.св. СССР №254944, 1969г. 3. Голик И В., Громова Б.Б. Способ определения зараженности почвы возбудителем рака картофеля. Авт. св. СССР №533633, 1976г. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 4 2 , 01601