Спосіб визначення стійкості картоплі до збудника раку synchytrium endobioticum (schilb) perc

Спосіб визначення стійкості картоплі до збудника раку Synch ytrium endobioticum (Schilb) Pers, що включає зараження паростків картоплі літніми 38722 Зразки бульб сортів та гібридів картоплі, коли паростки досягають 1-2 мм, заражають літніми зооспорангіями зі свіжих ракових наростів на протязі 24 годин при 11-13°С. Для цього на верхівку бульби картоплі навколо паросткової частини приліплюють паперове кільце за допомогою суміші парафіну та вазеліну (1:1). В кільце наливають дистильовану воду, кладуть шматочки свіжого ракового наросту. Зразки залишають у клімокамері з підвищеною вологістю і температурі 11-13°С. Час експозиції 24 години. Інфекцію з паперовими кільцями знімають з бульб і залишають зразки картоплі при температурі 17-18°С протягом 20 діб, після чого відзначають реакцію паростків картоплі на зараження патогеном. Для цього їх аналізують під бінокулярною лупою і відрізняють ступінь ураження: 1 - некротизована тканина паростка, одиничні соруси; 2 - розсіяні соруси (якщо більше 5), щільні соруси без деформації паростка; 3 - щільні соруси з деформацією паростка, раковий наріст. В аналізованих таким чином зразках картоплі (48 шт.) (таблиця) ступінь ураження паростків картоплі збудником раку склала: 1-13 зразків; 2-7 зразків; 328 зразків картоплі. Приклад 2 (прототип) З ракових наростів виділяють білковий екстракт таким чином: 10 г наростів подрібнюють і розтирають з 5 мл калій-фосфатним буфером, який містить 12,5 г глюкози, 1% аскорбінової кислоти, 1% метабісульфіту калію та 0,018% магнію-хлору2, рН доводили до 7,4 за допомогою 1н їдкого натру. Гомогенат віджимали крізь капронову сітку і центрифугували 25 хвилин при 12000 об./хв. При цьому білки виділяться в супернатанті, а залишки випадають в осад. Супернатант 7 мл очищують через колонку з сефадексом G-25, врівноважену буфером, який вміщував 4,66 г трису; 0,59 ЕДТА натрію та 0,3 г борної кислоти на 1000 мл води; рН буферу - 8,6. Після початку виходу білка відбирають 2-3 мл і зберігають в холодильнику при 4-6°С. В отриманий білковий екстракт в розведенні 1:15 додають чистий безводний гліцерин і декілька кристалів барвника нейтрального червоного. Краплі білка наносять тонкою скляною паличкою на 8-12 дольок листків кожного сорту або гібриду картоплі. Листки для нанесення білкового екстракту беруть середнього або нижнього ярусу добре розвинути х здорових рослин до бутонізації. Спостереження проводять на 5-6 день після нанесення білкового екстракту. Реакція листків на білковий екстракт у сприйнятливих сортів та гібридів картоплі виражається у сильному пожовтінні, побурінні та висиханні дольок з нанесеними на них краплями білка і опадання дольок або цілих листків (3 ступінь). Слабке пожовтіння окремих дольок листків з нанесеним білком свідчать про слабку стійкість зразка карто плі (2 ступінь). У стійких рослин у зоні нанесення краплі білка спостерігається локальне відмирання тканин (1 ступінь). Результати досліджень представлено у таблиці. Приклад 3 3 уражених зразків картоплі (як за прикладом 1) беруть паростки картоплі, які поміщають у кювети і аналізують на інфрачервоному аналізаторі ІФА-61. При аналізі використовують довжину хвиль 1510 нм. З метою підвищення точності аналізу за результат брали середнє з трьох значень, отриманих при повороті кювети на 90°. Ступінь стійкості картоплі до збудника раку визначали за формулою: У=КхОГхW де: К - константа градуйованого рівняння; ОГ- оптична густина; W - аналітична довжина хвилі (1510 нм); У - ступінь стійкості картоплі до збудника раку (%). Математичну обробку даних проводили по Доспехову Б.А. [5]. За результатами аналізу зразків картоплі ступінь стійкості паростків збудником раку склала з 13,6% до 99,2% (таблиця). Процес визначення ступеню стійкості 48 зразків картоплі збудником раку на інфрачервоному аналізаторі склав 18 хвилин, а способом зараження - 90 хвилин. Визначення стійкості способомпрототипом займає 20 хвилин, але реакція рослин картоплі не співпадала з реакцією рослин на пряме зараження збудником хвороби. Запропонований спосіб визначення стійкості картоплі до раку підтверджує експериментальна перевірка, яка здійснювалась при ураженні збудником раку картоплі сортів та гібридів, отриманих з Поліської дослідної станції Інституту картоплярства УААН. Літературні джерела 1. Вилкова Н.А., Шапиро И.Д., Борщева Т.А. Использование инфракрасной микроскопии для диагностики повреждения и устойчивости зерновок к клопам // Методы исследований патологических изменений растений. – М.: Колос, 1976. С. 216-219. 2. Салтыкова Л.П., Тарасова В.П. Методические указания по испытанию картофеля на ракоустойчивость. - Л., 1982. - 51 с. 3. Салтыкова Л.П., Яковлева В.И. Лабораторная диагностика ракоустойчивости картофеля методом заражения ростков от свежих раковых наростов: Метод. указания. - М., 1979. - 8 с. 4. Яковлева Н.Н., Кадырматов И.Н. Способ определения ракоустойчивости картофеля: Авторское свидетельство № 380264 от 15.05.1973 г., бюл. № 21. 5. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта. М.: Колос, 1973. - 336 с. 2 38722 Таблиця Ступінь стійкості селекційного матеріалу картоплі до збудника раку, визначений різними способами (1999-2000 pp.) № п/п Сорти, гібриди картоплі 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 П94 27-4 П94 27-6 П94 27-11 П94 27-12 П94 27-21 П94 27-22 П94 27-26 П94 27-39 П94 27-46 П94 27-49 П94 27-52 П95 49/3 П95 49/5 П95 49/21 П95 49/25 П95 49/28 П95 49/35 П95 49/48 П95 49/53 П95 49/54 П95 8-12 П95 8-15 П95 8-22 П95 8/33 П95 9-1 П95 9-6 П95 9-7 П95 9-10 П95 11/16 П95 11/22 П95 11/26 П95 11/28 П95 11/30 П95 11/37 П95 11/43 П95 11/4 П95 11/47 П95 11/57 П95 11/68 П95 11/70 П95 11/75 Solami Поліська рожева Радич Пост-86 Синтез Берегиня П88 128-7 Ступінь стійкості Зараження з білкоПрямим способом заСпосіб інфрачервоної вим екстрактом (про- спектроскопії, в % (М±т) раження тотип) 3 3 13,6±0,73 1 3 99,2±0,56 1 2 92,4±0,56 3 3 17,6±0,77 3 3 14,9±0,54 3 3 17,6±0,77 3 3 24,4±0,66 1 3 88,3±0,53 1 3 96,4±0,54 2 3 62,5±0,49 1 3 91,1±0,57 1 2 93,8±0,56 3 3 21,7±0,12 2 3 66,7±0,43 1 3 93,8±0,54 1 3 97,8+0,56 3 3 16,3±0,74 3 3 16,3±0,74 2 3 58,4±0,42 3 3 17,7±0,77 3 3 14,9±0,69 2 3 50,2±0,46 2 3 54,3±0,43 3 3 13,6±0,73 3 3 17,7±0,76 3 3 19,0±0,66 2 3 62,5±0,49 2 3 61,2±0,46 1 3 86,9±0,52 1 3 85,6±0,51 3 3 16,3±0,76 3 3 21,7±0,72 3 3 25,8±0,53 3 3 23,1±0,76 3 3 20,4±0,74 3 3 21,7±0,72 3 3 23,1±0,76 1 3 97,8±057 3 3 19,0±0,66 3 3 17,7±0,76 3 3 13,6±0,73 1 2 99,2±0,57 3 3 13,6±0,73 1 2 93,7±0,56 3 3 17,7±0,76 3 3 21,7±0,72 3 3 14,9±0,54 3 3 17,7±0,76 Примітка. 1, 2, 3 - ступінь враження зразків картоплі збудником раку. 3 38722 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 4