Спосіб штучного запліднення яєць бджолиної матки

Спосіб запліднення яєць бджолиної матки, що включає іммобілізацію матки для одержання яєць та їх закріплення, а також відбір сперми у трутнів, який відрізняється тим, що регідратовані спермії, після збереження у висушеному стані, вводять до цитоплазми яєць шляхом мікроін'єкції. Корисна модель відноситься до біотехнології розмноження І може використовуватись у селекції бджіл та для збереження генофондів культивованих і диких популяцій бджіл, зокрема, рідких і зникаючих Відомий спосіб штучного запліднення яєць перетинчастокрилих комах шляхом мікроін'єкції кріоконсервованого спермія [Artificial reproduction in a hymenopteran insect, Athalia rosae, using eggs matured with heterospecific yolk proteins and fertilized with criopreserved sperm /Masatsugu Hatakeyama, Jae Min Lee, Masami Sawa, Kugao Oishi //Arh. Insect Biochem. Phisiol. 43:137-144, 2000]. Відомі, також, способи штучного запліднення овоцитів великої рогатої" худоби, людей, мишей і риб сперміями, які зберігалися у дегідратованому стані [Bovine Biastocyst Development from Oocytes Injected with Freeze-Dried Spermatozoa / Levent Keskintepe, Gabriela Pacholczyk, Anna Machnicka, Karen Norris, M Akif Curuk, Iqbal Khan and Benjamin G. Brackett // Biology of Reproduction 67, 409-415 (2002); The ability of dehydrated hamster and human sperm nuclei to develop into pronuclei / H Katayose, J Matsuda and R Yanagimachi // Biology of Reproduction, Vol 47, 277-284; Maintenance of genetic integrity in frozen and freeze-dried mouse spermatozoa / Hirokazu Kusakabe, Monika A. Szczygiel, David G. Whittingham, and Ryuzo Yanagimachi // The National Academy of Sciences Proc Nati Acad Sci USA. 2001 November 20; 98(24) Published online 2001; Fertilization of Eggs of Zebrafish, Danio rerio, by Intracytoplasmic Sperm Injection / German A. Poleo, Richard S. Denniston, Brett С Reggio, Robert A. Godke and Terrence R Tiersch // Biology of Reproduction 65,961-966(2001)]. Найбільш близьким до способу, що заявляється, штучного осіменіння яєць бджолиної матки свіжорозбавленою спермою трутнів, який включає іммобілізацію матки для відбору яєць і закріплення останніх перед їх осіменінням. Це створює належні умови для майже природного запліднення, яке здійснюється живим рухливим спермієм з тією різницею, що яйце під час запліднення та подальшої інкубації перебуває не у восковій комірці в бджолиному гнізді, а в скляній ємкості в термостаті Цей спосіб допускає використання довго- чи короткочасно збережуваної сперми, яке забезпечується шляхом її охолодження або іншими методами [Хмара П.Я. Искусственное осеменение гаплоидных яиц пчелиной матки. Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук.-К.,1977]. Недоліком прототипу є обов'язкове використання живих сперміїв з доброю запліднюючою здатністю, підтримання якої під час тривалого зберігання пов'язане із певними труднощами Завданням корисної моделі є таке удосконалення відомого способу запліднення, яке б дозволило використовувати спермії, збережувані тривалий час порівняно простим способом. Поставлене корисною моделлю завдання досягається тим, що у способі запліднення яєць бджолиної матки, що включає іммобілізацію матки для одержання яєць та їх закріплення, а також відбір сперми у трутнів, згідно корисної моделі со ю CM 11256 регідратовані спермії, після збереження у висушеному стані, вводять до цитоплазми яєць шляхом мікроін'єкції. Внаслідок дегідратації, яка досягається ліофільною сушкою або іншими способами, спермії втрачають здатність самостійно проникати до цитоплазми яйця. Але цілісність хромосомного апарату, висушуваного спермія, зберігається. Зберігається, також, і здатність ядра спермія утворювати протоядро в цитоплазмі овоцита. Мікроін'єкція регідратованої головки спермія забезпечує потрапляння його ядра до цитоплазми яйця, компенсуючи втрату спермієм проникаючої здатності, та призводить до злиття протоядер з наступним розвитком зиготи у нормальний диплоідний ембріон, Приклад. Плідну бджолину матку, яка перебуває у стані репродуктивної активності, затискають в іммобілізаторі та прикріплюють останній до відповідної клітки з бджолами-годувальницями. Для закріплення яйця, що виходить з піхви, до нього торкаються клейким боком стрічки скотч так, щоб анімальний кінець звисав з плівки на V* довжини яйця. Суху сперму, яка зберігалася у вигляді мазка Комп'ютерна верстка Д. Дорошенко на склі або на плівці з іншого матеріалу, змивають розчином для ін'єкцій І шляхом центрифугування відмивають у ньому. У скляну піпетку для мікроін'єкцій, за допомогою мікроманіпулятора, відбирають голівки сперміїв. Мікроін'єкцію здійснюють у анімальний полюс яйця, вводячи до цитоплазми голівку одного спермія. Ін'єктовані яйця інкубують при температурі 34-35°С та відносній вологості близько 80%. Після лізісу хоріону, сформованих личинок шпателем переносять у воскові мисочки і подальше вирощування їх здійснюють загальноприйнятими у матководстві методами. Винайдений спосіб дозволяє використання простого методу зберігання трутневих сперміїв. Зберігання сперми в сухому стані має суттєві переваги порівняно з їх кріоконсервацією в рідкому азоті, особливо, при формуванні генофондного банку. В той час, як метод кріоконсервації потребує повністю зрілих та живих сперміїв, зберігання їх у дегідратованому стані дозволяє, при обробці дітіотреітолом, використовувати і недостатньо зрілі спермії. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601