Спосіб прогнозування здатності ооцитів до запліднення при лікуванні безплідності в програмі запліднення in vitro

Спосіб прогнозування здатності ооцитів до запліднення при лікуванні безплідності в програмі запліднення in vitro, що включає визначення співвідношення простагландинів класів Ег і F2a в фолікулярній рідині та прогнозування зниження Винахід відноситься до медицини, а саме до акушерства та гінекологи і може бути використаний в прогнозуванні ефективності запліднення ооцитів при лікуванні безплідності в програмі запліднення in vitro Незважаючи на значні успіхи в діагностиці і лікуванні безплідності, до наступного часу у цій проблемі залишається ще багато невирішених питань Існує велика КІЛЬКІСТЬ патологічних станів, при яких традиційні методи відновлення природної фертильності неефективні або мають низьку ефективність, що сприяло розвитку методів допоміжної репродукції, у тому числі програми запліднення in vitro, яка вже отримала широке розповсюдження в усьому СВІТІ Ефективність лікування безплідності цим методом досягає в середньому 20 - 30% у розрахунку на один перенос ембріонів (Лечение бесплодия методом экстракорпорального оплодотворения / В И Грищенко, В И Пиняев, М П Петрушко, Л И Луцкая, И В Терпячая // Актуальные вопросы репро-дуктологии и криомедицины, - X , 1998 С 135-138, Dale В , Elder К , In vitro fertilization // Cambridge university press -1997 - P 102-107) Високу медична і соціальна вагомість проблеми безплідності робить актуальним пошук причин невдач метода запліднення in vitro із метою підвищення ефективності лікування Одною з важливих умов успішного лікування ДО ЗАПЛІДНЕННЯ видається під відповідальність власника патенту ПРИ ЛІКУВАННІ здатності ооцитів до запліднення in vitro при ЗНИЖеННІ ЗНачеННЯ КОефіЦІЄНТу Pg E2/F2a фолікулярній рідині і, навпаки, високої здатності ооцитів до запліднення in vitro при підвищенні значення коефіцієнту Pg E2/F2a, який відрізняється тим, що при значенні коефіцієнту Pg E2/F2a 12 та вище прогнозують 66,7 - 100% запліднення ооцитів, при значеннях коефіцієнту Pg E2/F2a 11,9 - 8,6 прогнозують 33,4 - 66,6% запліднення, а при значенні коефіцієнту Pg E2/F2a 8,59 та нижче прогнозують 0 - 33,3% запліднення ооцитів безплідності в програмі запліднення in vitro є морфологічна і функціональна ПОВНОЦІННІСТЬ ООЦИТІВ, які одержують в результаті стимуляції суперовуляцм Фолікулярна рідина -середовище, що бере участь у дозріванні ооциту і має регулюючі функції У фолікулярній рідині преовуляторного фолікула значно підвищується концентрація простагландинів Е2 і F2a (Janson Р О , Brannstrom М , Holmes Р V , Sogn J Studies on the mechanism of ovulation using the model of the isolated ovary//Ann N Y Acad Sei - 1 9 8 8 - Vol 541 - P 22-29) Синтез простагландинів є необхідною умовою для дозрівання ооцитів та взаємодії гамет (Calmels С , Dubost J J , Jasmm-Lebrun С , Sauvezie В А new case of NSAID-mduced infertility // Rev Rhum Engl Ed -1999 -Vol 66 - № 3-P 167-168) Склад фолікулярної рідини може відображати морфологічний і функціональний стан ооциту, його здатність до запліднення, або служити інструментом для прогнозування ефективності лікування безплідності Так, наприклад, відомий спосіб оцінки якості та ефективності процесів овуляції, функціонального стану ооцитів та прогнозування розвитку вагітності по взаємовідношенню концентрації простагландинів Pg E2/F2a в фолікулярній рідині (Smith Е М , Anthony F , Masson G M Folhcular fluid prostaglandm E2 prostaglandm F2 alpha ratio in Ю o> CD О Ю 50695 малого тазу Reprod -1991 -Vol 6 - № 4 -P 519-523) При індукції овуляції використовують Даний спосіб оцінки здатності ооцитів до загальноприйняті протоколи з наборами запліднення in vitro, у якому інструментом служить препаратів і аналогів гонадотропш - рилізінг відношення класів простагландинів E2/F2a в гормону Через 34 - 35 годин після введення фолікулярній рідині, є найбільш близьким по тригерної дози ЧХГ (Profasi, "Serono") під технологічній суті і результату, який може бути ультразвуковим контролем здійснюють пункцію досягнутим до того, що заявляється, тому його фолікулів і аспірацію ооцитів обрано в якості прототипу Відразу ж після пункції виявлені ооцити Основним недоліком відомих аналогів, в тому переносять з фолікулярної рідини у чисте числі і прототипу, є те, що вони тільки відмічають середовище для культивування У зразках тенденції змін співвідношення класів фолікулярної рідини визначають концентрацію простагландинів Е2 та F 2a в фолікулярній рідині простагландинів Е2 і F 2a та їх співвідношення, та при лікуванні безплідності методом запліднення m прогнозують здатність ооцитів до запліднення m vitro, даючи якісну оцінку, але неспроможні точно vitro спрогнозува-ти здатність ооцитів до запліднення Ідентифікацію і кількісне визначення Pg Е2 і Pg із-за відсутності кількісної оцінки коефіцієнту Рд F 2a у зразках фолікулярної рідини здійснюють E2/F2a методом високоефективної рідинної У зв'язку з вищевикладеним, в основу хроматографії Для екстракції простагландинів винаходу покладено задачу підвищення точності використовують метод Horton Концентрацію прогнозування запліднення ооцитів при лікуванні простагландинів у стандартному розчині безплідності в програмі запліднення in vitro визначають методом спектрофотометрії за Л Д шляхом кількісної оцінки співвідношення класів Бергельсоном Обчислюють показник відношення простагландинів Е2 та F 2a в фолікулярній рідині концентрації Pg E2 до Pg F 2a Задача, яку покладено в основу винаходу, При значенні коефіцієнту Pg E 2 /F 2a 12Ta вище вирішується тим, що у відомому способі, що прогнозують 66,7 - 100% запліднення ооцитів, при включає визначення співвідношення значенні коефіцієнту Pg E2/F2a від 11,9 до 8,6 простагландинів класів Е2 і F2a, прогнозують прогнозують 33,4 - 66,6% запліднення, а при зниження здатності ооцитів до запліднення in vitro значенні коефіцієнту Pg E2/F2a 8,59 та нижче при зниженні значення коефіцієнту Pg E2/F2a в прогнозують 0 - 33,3% запліднення ооцитів in vitro фолікулярній рідині і, навпаки, високу здатність Вищевказані значення коефіцієнту Pg E2/F2a ооцитів до запліднення in vitro при підвищенні були одержані експериментальним шляхом Були значення коефіцієнту Pg E2/F2a ЗГІДНО З сформовані КЛІНІЧНІ групи з різним відсотком винаходом, при значенні коефіцієнту Pg E 2 /F 2a 12 запліднення ооцитів in vitro та вище прогнозують 66,7 - 100% запліднення Достовірність розходжень оцінювали з ооцитів При значеннях коефіцієнту Pg E2/F2a від використанням критеріїв Фішера - Ст'юдента 11,9 до 8,6 прогнозують 33,4 - 66,6% запліднення Також проводили кореляційний аналіз зв'язку між При значенні коефіцієнту Pg E2/F2a 8,59 та нижче дослідженими показниками та дисперсійний прогнозують 0 - 33,3% запліднення ооцитів аналіз Виділені групи статистично не відрізнялися за віком пацієнток, КІЛЬКІСТЮ отриманих ооцитів і Можливість підвищення точності прогнозу морфофунк-цюнальними властивостями еякуляту була одержана завдяки КІЛЬКІСНІЙ ОЦІНЦІ партнерів співвідношення простагландинів класів Е2 і F 2a у Результати визначення концентрації фолікулярній рідині простагландинів Е2 і F 2a у виділених групах Спосіб виконують слідуючим чином представлені в таблиці Перед початком лікування всі безплідні подружні пари обстежують за загальноприйнятою методикою Серед спеціальних методів дослідження в обов'язковому порядку здійснюють динамічне ультразвукове сканування органів relation to outcome of matched oocyte // Hum Таблиця КЛІНІЧНІ групи 1 група 66,7 -100% запліднення (п = ЗО) 2 група 33,4 - 66,6% запліднення (п = ЗО) 3 група 0 — 33,3% запліднення (п = ЗО) Pg Е2 м кг/мл М ± м 537,5 ± 73,6 471,8 ±83,9 272,6 ± 26,6 Середнє значення коефіцієнту Pg E2/F2a склало 12,4 ± 1,1 для першої групи, 11,5 ± 0,9 - для другої, 5,7 ± 1 , 2 - для третьої Було встановлено, що морфологічні властивості, ступінь зрілості ооци-тів і відсоток їх запліднення in vitro не зв'язані з концентрацією Pg F 2a і концентрацією Pg E2, але було виявлено зв'язок між здатністю ооцитів до запліднення і Pg F 2a м кг/мл М ± м 71,2 ± 18,1 102,2 ±24,9 103,6 ±31,7 відношенням Pg E2/F2a(p < 0,05), що свідчить про більше діагностичне значення вивчення співвідношення простагландинів у фолікулярній рідині, ніж абсолютних показників Проведений кореляційний та дисперсійний аналіз дозволив встановити вищевказані прогностичні діапазони значень показників, що досліджували Даний спосіб ілюструють слідуючи приклади 1 Хвора Б , ЗО років, (історія хвороби № 155) звернулася для лікування безплідності Термін хвороби - 7 років Із анамнезу відомо, що на протязі 7 років хвора страждає на первинне безпліддя При рентгенологічнім дослідженні було встановлено, що обидві маткові труби блоковані в ампулярних відділах Повторні курси консервативної терапії були неефективні В результаті обстеження протипоказань до лікування безплідності із застосуванням програми запліднення in vitro не було виявлено При індукції овуляції був використаний загальноприйняті протокол з використанням препаратів Metrodm, "Serono" і Suprefact, "Hoechst" Через 35 годин після введення тригерної дози Profasi, "Serono", під ультразвуковим контролем була зроблена пункція фолікулів і аспірація ооцитів Спремограма мужа - без відхилень від норми Було отримано 5 зрілих ооцитів При біохімічному дослідженні фолікулярної рідини коефіцієнт Pg E2/F2acmaB -13,1 Прогнозовано 66,7 -100% запліднення In vitro запліднилось 5 ооцитів (100% запліднення), розвилося 4 ембріонів, 3 з яких були перенесені в порожнину матки Через 2 тижні біохімічне встановлена вагітність 2 Хвора К, 29 років, (історія хвороби № 168) звернулася для лікування безплідності Термін 50695 хвороби - 7 років Із анамнезу відомо, що 7 років тому хвора була оперована з приводу апоплексії яєчника В зв'язку з технічними складнощами були видалені правий яєчник та права маткова труба При рентгенологічнім дослідженні було встановлено, що ліва маткова труба являє собою пдросальпінкс В результаті обстеження протипоказань до лікування безплідності із застосуванням програми запліднення in vitro не було виявлено При індукції овуляції був використаний загальноприйняті протокол з використанням препаратів Metrodm, "Serono" і Suprefact, "Hoechst' Через 35 годин після введення тригерної дози Profasi, "Serono", під ультразвуковим контролем була зроблена пункція фолікулів і аспірація ооцитів Спремограма мужа без відхилень від норми Було отримано 2 зрілих ооцити та 1 перезрілий При біохімічному дослідженні фолікулярної рідини коефіцієнт Pg E2/F2a склав 1,8 Прогнозовано 0 - 33,3% запліднення In vitro запліднився 1 ооцит (33,3% запліднення), розвився ембріон, який був перенесений до порожнини матки Вагітність не настала Таким чином, спосіб що заявляється з високою інформативністю дозволяє достовірно прогнозувати здатність ооцитів до запліднення m vitro ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71