Спосіб визначення вмісту амінокислоти l-аргініну в біологічному матеріалі

Спосіб визначення вмісту амінокислоти Lаргініну в біологічному матеріалі, що включає виділення амінокислот, проведення хроматографування на твердому носії в рідкій фазі, проявлення специфічним барвником та елюювання з проведенням оптичного аналізу вмісту амінокислоти, який відрізняється тим, що хроматографію проводять одноразово на пластинках силуфол в системі пропанол:гідрооксид амонію з проявленням Lаргініну розчином барвника алоксану та кількісним елююванням амінокислоти в диметилформаміді з подальшою спектрофотометрією. (19) (21) u200509264 (22) 03.10.2005 (24) 15.03.2006 (46) 15.03.2006, Бюл. № 3, 2006 р. (72) Колесник Юрій Михайлович, Бєленічев Ігор Федорович, Абрамов Андрій Володимирович, Ганчева Ольга Вікторівна, Бухтіярова Ніна Вікторівна, Количева Наталія Леонідівна, Павлов Сергій Васильович (73) ЗАПОРІЗЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, Колесник Юрій Михайлович, Бєленічев Ігор Федорович, Абрамов Андрій Володимирович, Ганчева Ольга Вікторівна, Бухтіярова Ніна 3 13165 4 діметіламінобензальдегід : концентрована соляна - для розділення амінокислот застосовують кислоти : ацетон, елююванням реактивом Гопкінсу суміш пропанол : гідрооксид амонію, що дозволяє та спектрофотометрією. Прототип та спосіб, що проводити розділення одноетапно; пропонується, мають такі спільні суттєві ознаки: - виконання методу спрощено, не потребує - осадження білків; складного обладнання; - розділення амінокислот на твердому носії; - для виконання методу не застосовують пре- застосування рідкої суміші для розділення курсори; амінокислот; - спосіб потребує менш часу, більш простий у - застосування для проявлення амінокислоти виконанні, тому що хроматограму проводять одL-аргініну специфічного барвника; норазово; - елюювання амінокислоти L-аргініну специфі- спосіб дозволяє визначати вміст L-аргініну в чним розчином; будь якому біологічному матеріалі, який містить - застосування оптичного методу аналізу. цю амінокислоту; Але спосіб-прототип є недостатньо ефективСпосіб здійснюють таким чином: ним, тому що в якості сорбенту застосовують цеБезбілковий екстракт біологічного матеріалу люлозу, яка хімічно не стійка, погано утримує аміхроматографують на твердому шарі силуфолу в нокислоти, що спричиняє високу погрішність. При суміші пропанол: гідрооксид амонію (7:3). L-аргінін очищенні застосовують суміш важкодоступних виявляють розчином аллоксану. Виявлену пляму катіонітів. В якості барвника, яким проявляють Lамінокислоти відповідно кількісно елююють ДМФА аргінін застосовують не стійку суміш (нз подальшою спектрофотометрією при довжині діметіламінобензальдегід: концентрована соляна хвилі 530нм. кислота : ацетон). В якості розчину, яким елююють Приклад. амінокислоту - реактив Гопкінса, що містить льоНа лінію старту платівки силуфол наносять дяну оцтову кислоту, яка є прекурсором. Двократ0,04-0,1мл спиртового екстракту біоматеріалу (2:1) не проведення хроматограми потребує тривалого і стандарт 10-5 M L-аргініну в 96° етиловому спирті. часу та трудових витрат. Хроматограму розміщують в систему пропаВ основу корисної моделі поставлено задачу нол: гідрооксид амонію (7:3). Після проходження удосконалення та розширення діапазону дослірозчинником 10 см платівку висушують та виявджуваних об'єктів способу визначення вмісту Lляють 1% розчином аллоксану в ДМФА з подальаргініну шляхом хроматографії на силуфолових шим нагріванням при 100°С в сушильному шкапу. платівках з подальшою спектрофотометрією, що Після цього пляму, відповідну L-аргініну зіскрібазабезпечить підвищення чутливості, якості визнають в пробірку с 5мл ДМФА. Вміст пробірки нагрічення вмісту L-аргініну, розширення діапазону довають 3 хвилини на водяній бані (100°С). Центрисліджуваних об'єктів та спрощення методики. фугують 3 хвилини при 3000об/хв. Вимірюють на Поставлена задача вирішується тим, що у спектрофотометрі оптичну щільність при довжині способі, який включає осадження білків, розділенхвилі 530нм. ня амінокислот із безбілкового екстракту на тверВміст амінокислоти L-аргініну (Lar) визначадому носії в рідкій суміші, з проявленням специфіють за допомогою формули: чним барвником, елююванням специфічним A V Co n , Lar розчином та проведенням оптичного аналізу вмісAo L 100 ту амінокислоти L-аргініну, новим є те, що роздіде A - оптична щільність експериментального лення амінокислот проводять на силуфолових зразка; платівках, в якості рідкої фази застосовують суміш Ao - оптична щільність стандартного розчину; пропанол : гідрооксид амонію, з подальшим виявV - об'єм розчину, який аналізують; ленням L-аргініну розчином специфічного барвника аллоксану та елююванням амінокислоти димеCo - молярний вміст стандарту; тилформамідом (ДМФА). n - коефіцієнт розведення; Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю L - товщина шару кювети (1 см) ознак, що заявляються, та технічним результатом 100 - коефіцієнт перерахування полягає у такому: Результат в ммоль/г тканини, або ммоль/л - в якості твердого носія застосовують платівки плазми. з силуфолу, які хімічно стійки міцно зв'язують амінокислоти, що сприяє зниженню похибки; Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601