Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Способ получения сухих бактериальных пре­паратов, включающий выращивание культуры микроорганизмов в виде суспензии, смешивание ее с сорбентом и сушку, отличающийся тем, что сус­пензию микроорганизмов смешивают с высокодисперсным порошком диоксида кремния в соотношении 2:1, сушку ведут на воздухе и полу­ченную смесь диспергируют до тонкодисперсного состояния.

Текст

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к производству сухи х микробных препаратов. В производстве сухи х препаратов основными этапами являются смешивание суспензии микроорганизмов с адсорбентом влаги и дальнейшая сушка в определенных условия х. Основным требованием к адсорбенту влаги является его инертность по отношению к микроорганизмам, что должно способствовать сохранению нативных свойств бактериального препарата. Известен способ получения сухи х бактериальных препаратов, включающий выращивание и концентрирование культуры микроорганизмов, смешивание с сорбентом глинистым минералом и последующее распылительное высушивание. При этом имеет место повышенный выход жизнеспособных клеток (А.с. СССР №1616990, кл. C12N1/04, опубл. БИ №48, 1990). Общими существенными признаками известного и заявляемого технических решений является выращивание культуры микроорганизмов, смешивание ее с сорбентом и последующая сушка. Причиной, препятствующей достижению технического результата является недостаточно высокий выход жизнеспособных клеток, а применяемый сорбент не улучшает выживаемости клеток. Эта причина частично устраняется в способе получения сухих бактериальных препаратов, выбранном авторами в качестве прототипа и являющимся наиболее близким к заявляемому по технической сущности и достигаемому эффекту. Способ (А.с. СССР №1831498, кл. C12N1/00, опубл. БИ №28, 1993) включает выращивание культуры микроорганизмов на питательной среде, смешивание ее с сорбентом и сушку, причем в качестве сорбента выбирают порошкообразную окись алюминия, а затем дополнительно вводят другой сорбент, связывающий воду в меньшей степени, чем основной сорбент. После этого производят досушивание смеси в сушильном шкафу при 105°C в течение 4ч. Отмечается, что полученный по этому способу препарат микроорганизмов сохраняет нативные свойства, выживаемость микроорганизмов повышается по отношению к контролю и составила от 20 до 43%. Этот способ является наиболее близким к заявляемому, Общими существенными признаками известного и заявляемого технических решений являются выращивание микроорганизмов на питательной среде, смешивание суспензии микроорганизмов с адсорбентом и последующая сушка. Причинами, препятствующими достижению технического результата, являются: использование двух сорбентов, двухступенчатое их смешивание с культуральной жидкостью; - недостаточно высокий выход жизнеспособных клеток микроорганизмов; - снижение выживаемости микроорганизмов в течение месяца почти на 30%. В основу изобретения поставлена задача усовершенствования способа получения сухи х бактериальных препаратов, в котором за счет выбора сорбента обеспечивается высокий выход жизнеспособных микроорганизмов и препарат сохраняет высокий титр клеток в течение достаточно длительного периода времени, независимо от вида микроорганизмов. Поставленная цель достигается тем, что в способе получения сухи х бактериальных препаратов, включающем выращивание культуры микроорганизмов в виде суспензии, смешивание суспензии микроорганизмов с сорбентом и сушку, согласно изобретению, суспензию микроорганизмов смешивают с высокодисперсным порошком диоксида кремния в соотношении 2 : 1, сушку ведут на воздухе и полученный продукт диспергируют до тонкодисперсного состояния. Установлено, что в результате осуществления изобретения в объеме его существенных признаков за счет выбора сорбента исключают операцию дополнительного введения сорбента вдобавок к основному, а собственно сушку возможно осуществлять на открытом воздухе при температуре, близкой к комнатной. При этом полученный сухой бактериальный препарат сохраняет высокий титр жизнеспособных бактерий в течение полугода и более. Добавление в качестве сорбента высокодисперсного порошка двуокиси кремния позволяет сохранить нативные свойства микроорганизмов и получить биопрепараты, удобные для применения со 100% - ным сохранением высоких титров бактерий. Выбранное соотношение суспензии микроорганизмов к высокодисперсному порошку диоксида кремния как 2 : 1 необходимо и достаточно для образования удобной для сушки консистенции. Увеличение количества порошка диоксида кремния более 1мас.ч. приводит к загущению смеси и неудобно для перемешивания, а снижение количества кремнезема ведет к увеличению времени сушки полученной смеси, хотя на жизнеспособности бактериального препарата это не сказывается. Введение порошка диоксида кремния в указанном соотношении с суспензией микроорганизмов позволяет не только упростить процесс сушки, но и сделать его возможным при комнатной температуре при сохранении высокого титра бактерий. При дальнейшем использовании нет необходимости отделять сорбент от биокомпонента, биопрепарат удобен в использовании. Диспергирование высушенного продукта до тонкодисперсного состояния способствует обволакиванию бактерий и созданию защитного слоя, что собственно и обеспечивает длительное сохранение высокого титра бактерий, независимо от того идет речь об аэробных, или о анаэробных микроорганизмах. Далее сущность изобретения поясняется описанием технологии получения бактериальных препаратов микроорганизмов, а также данными изучения изменений титра бактерий, их выживаемости во времени. Для осуществления способа использования культуральные жидкости аэробных микроорганизмов Streptococcus lactis №8, Bacilus subtilis, анаэробных микроорганизмов Lactobacillus plantarum №12 и Bifidobacterium adolescentes №5. Штаммы культ культивировали на кровяносывороточном бульоне по известным методикам. Высокодисперсный (размер частиц 5 - 10нм) порошок диоксида кремния (см. ГОСТ 14922 - 77 "Аэросил"). Пример 1. Высокодисперсный порошок диоксида кремния предварительно высушивают при 400 - 450°C. Затем в количестве 20г постепенно добавляют к 40мл бульонной культуры Bifidobacterium adolescentes №5 до получения однородной густой массы. Полученную массу сушат в термостате при 27 - 32°C и затем ведут диспергирование в течение 2ч до тонкодисперсного состояния. Полученный препарат тестируют по общепринятой методике: посев производят на питательную среду МРС-2. Для этого делают разведение в физиологическом растворе на 4,5мл 0,5г препарата, затем 1мл вносят на 9мл МРС-2. Выдерживают в термостате при температуре 37°C в течение 72ч. Проверку титра этого препарата проводили через каждые 2 недели в течение шести месяцев. На шестой месяц хранения титр бактерий снизился незначительно. Данные представлены в табл.1. Пример 2. К 50мл бульонной культуры Lactobacillus plantarum №12 при постоянном перемешивании добавляют 24г высокодисперсного порошка диоксида кремния. Полученную массу сушат на воздухе. Затем после диспергирования полученный продукт тестируют. Жизнеспособность бактерий 100%. По мере хранения тестирование проводят через каждые две недели. Данные представлены в табл.1. Пример 3. К 40мл бульонной культуры Streptococcus lactis №8 добавляют 26г порошка диоксида кремния при постоянном перемешивании. К концу перемешивания масса становится несколько неудобной для перемешивания, но дальнейшее тестирование показывает достаточно высокий титр бактерий и практически 100% - ную выживаемость в течение полугода. Для проверки титра бактерий высев культуры проводили на мясопептонном бульоне. Данные представлены в таблице. Пример 4. К 50мл бульонной культуры Bacillus subtilis, представляющей собою суспензию микроорганизмов, добавляют 25г порошка диоксида кремния при постоянном перемешивании, как описано в примере 1. Готовый продукт представляет высокодисперсный сухой бактериальный препарат со 100% - ной выживаемостью, сохраняющейся в течение полугода. Данные проверки титра бактерий представлены в табл.2. Далее в табл.1 представлены данные проверки титра бактерий полученных сухи х бактериальных препаратов по заявляемому способу. В табл.2 представлены данные за 1995 год. Выживаемость сразу после получения готового продукта составила 100%, а через полгода - 78%. Выживаемость микроорганизмов в сухом бактериальном препарате, полученном по известному способу (прототип) составила 29 - 43%, в течение месяца титр бактерий снизился на треть. Таким образом, способ получения сухи х бактериальных препаратов прост, не требует дополнительных затрат на введение и смешивание со вторым сорбентом, не требует повышения температуры сушки, а полученный продукт обладает высокими характеристиками: высокий выход жизнеспособных клеток микроорганизмов 100%, препарат сохраняет высокий титр бактерий в течение 6 - 9 месяцев независимо от того, аэробные или анаэробные это бактерии. Сорбент выбран таким, что при дальнейшем использовании бактериального препарата нет необходимости отделять сорбент от биокомпонента.

Дивитися

Додаткова інформація

Автори англійською

Fuks Polina Pavlivna, Phuks Polina Pavlivna, Khodak Valentyna Ivanivna, Kvachov Vladymyr Hryhorievych, Petrenchuk Elina Petrivna

Автори російською

Фукс Полина Павловна, Ходак Валентина Ивановна, Крачов Владимир Григорьевич, Петренчук Элина Петровна

МПК / Мітки

МПК: C12N 1/20, C12N 11/00

Мітки: спосіб, одержання, препаратів, сухих, бактеріальних

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/2-14836-sposib-oderzhannya-sukhikh-bakterialnikh-preparativ.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб одержання сухих бактеріальних препаратів</a>

Подібні патенти