Спосіб діагностики початкових стадій гіпертонічної хвороби

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для диагностических целей при сердечно-сосудистых заболеваниях, в частности ранних стадий гипертонической болезни. В настоящее время имеется большая группа риска для ряда профессий: летчики, шоферы, машинисты, работники АЭС, операторы различных производств, беременные женщины и др., для которых необходимо прогнозировать возможность возникновения гипертонической болезни, которая может сопровождаться резким нарушением внимания, потерей памяти и т.п. Известен способ диагностики ранних стадий гипертонической болезни, заключающийся в получении сыворотки из венозной крови, к которой добавляют ангиотензин-1, меченые антитела к ангиотензину-2 и синтетический ангиотензин-2. Затем посредством радионуклидного анализа определяют выделяющийся ангиотензин-2, по количеству которого судят об активности ангиотензин -превращающего фермента и соответственно - о стадии гипертонической болезни [1]. Для осуществления известного способа необходимы моноклональные антитела, к ангиотензину-2, предварительное получение которых те хнологически сложно и дорого. Кроме того, использование в способе радиоактивных изотопов является прелятствием для его широкого распространения, поскольку требуется специального оборудования, подготовленного особым образом персонала. Способ многоэтапный, что и определяет его низкую точность особенно при определении начальных стадий болезни. Наиболее близким по технической сущности к заявляемому является способ диагностики ранних стадий гипертонической болезни (1), заключающийся в получении из венозной крови посредством гипертонического или гипотонического шока теней эритроцитов, которые затем подвергаются исследованию. В основе исследования полученной массы теней эритроцитов лежит их свойство изменять структуру при возникновении предпосылок заболевания гипертонической болезнью. Эти изменения могут быть зафиксированы обменом после того, как тени эритроцитов будут загружены радиоактивным литием и инкубированы в среде с натрием. По активности выхода лития в инкубационную среду судят о стадии заболевания гипертонической болезнью, которая не проявляется еще явными симптомами. В способе-прототипе имеют место определенные сложности, обусловленные работой с радиоизотопами, что в первую очередь связано с необходимостью создания особых условий работы, специальным обучением персонала, строгим соблюдением правил безопасности и т.д. Точность известного способа не превышает 70%, что объясняется многостадийностью и технической сложностью его осуществления. Кроме того, себестоимость выполняемых анализов достаточно высока, Указанные недостаток способа-прототипа ограничивают его широкое повсеместное использование. Задачей настоящего изобретения является создание способа диагностики ранних стадий заболевания гипертонической болезнью путем исследования изменений, происходящих в мембранах эритроцитов под воздействием регуляторних пептидов, количество которых значительно увеличивается при возникновении ранних стадий гипертонической болезни, в результате чего значительно повышается точность диагностирования, упрощается его технологическая схема при уменьшении себестоимости производимых анализов. Поставленная задача решается тем, что в способе диагностики ранних стадий гипертонической болезни, заключающемся в получении из венозной крови посредством гипертонического шока теней эритроцитов, их исследовании и диагностировании по результатам исследования, согласно изобретению, при исследовании тени эритроцитов помещают на рабочую поверхность и измеряют их поверхностное давление потенциала после и граничный скачок чего производят измерение указанных параметров на рабочей поверхности с нанесенной на нее моделью биомембраны, причем измерение поверхностного давления и граничного скачка потенциала осуществляют после стабилизации их значений, а о степени развития ранних стадий гипертонической болезни судят одновременно по величинам разности и Авторами настоящего изобретения было обнаружено, что при возникновении предпосылок для гипертонической болезни наблюдается повышение концентрации регуляторных пептидов ангиотензина-1 и ангиотензина-2 в плазме крови, которые взаимодействуют с эритроцитарной мембраной, в результате чего происходит изменение структуры мембраны по сравнению с нормой. В свою очередь происшедшие в мембране изменения могут быть зафиксированы посредством измерения соответственно изменяющихся физико-химических параметров. В качестве таких параметров авторами были выбраны поверхностное давление и граничный скачок потенциала как наиболее адекватно отображающие изменения в мембране эритроцитов и простым образом определяемые. Об изменениях происходящих о мембране эритроцитов можно судить на основании исследования теней эритроцитов. В заявляемом способе тени эритроцитов предлагается получать обычным общеизвестным способом из венозной крови посредством гипертонического шока, поскольку в таком сочетании способ наиболее прост, доступен и дешев. Выбранные показатели измеряют в двух режимах: сначала в качестве рабочей поверхности берут любую из возможных, например, дистиллированную воду, а затем на эту же поверхность наносят любую приемлемую модель мембраны, например, фосфолипиды. В первом режиме под влиянием поверхностных сил наблюдается гидрофобное взаимодействие теней эритроцитов между собой. Оценкой указанного взаимодействия и является поверхностное давление теней эритроцитов и граничный скачок потенциала и Во втором режиме имеет место электростатическое взаимодействие теней эритроцитов с биологической мембраной, Количественным выражением такого взаимодействия являются параметры (). Изменения указанных параметров, полученных при измерении в разных режимах, дают ответ на вопрос о степени изменения в мембране эритроцитов крови и соответственно о степени развития ранних стадий гипертонической болезни. Измерения этих параметров необходимо проводить после достижения равновесного состояния исследуемой системы, о чем свидетельствует стабилизация измеряемых значений параметров. Кроме того, при измерении в первом и втором режимах выбранных параметров концентрация теней эритроцитов должна быть адекватной, а контролируют ее по содержанию белка в исследуемой пробе. Предлагаемый способ диагностики ранних стадий гипертонической болезни осуществляли следующим образом. У обследуемого из локтей вены брали 1 - 2мл крови. Кровь дефибринировали, центрифугировали в течении 10мин. при скорости 3000об/мин. Сыворотку отсасывали шприцом и оставшуюся эритроцитарную массу разводили дистиллированной водой в соотношении 1 : 1, затем центрифугировали 10мин. Образовавшуюся надосадочную жидкость отсасывали шприцом, а эритроцитарную массу разводили 10% - ным водным раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 1. Полученную смесь отстаивали 10мин при комнатной температуре, после чего центрифугировали 10мин при скорости 3000об/мин. Надосадочную жидкость отсасывали, а полученный осадок представлял собой тени эритроцитов. Из полученного осадка отбирали 20мкл и разбавляли в 2 - х мл дистиллированной воды. В полученном растворе определяли количество белка. Измерение проводили на спектрофотометре СФ-16 или 46 при 220нм. Калибровочный график строили по человеческому сывороточному альбумину. Проба для дальнейших исследований содержала не менее 0,15 - 0,2мг белка в 1мл. Исследование поверхностной активности плазматических мембран эритроцитов и их взаимодействие с модельными биомембранами проводили по методу Вильгельми и по методу динамического конденсатора, как наиболее удобными в практическом применении и простыми в реализации. Для измерения поверхностного давления использовали, в частности, малогабаритный сдвоенный диодный механотрон 6МХ1С, который предназначен для прецизионных измерений линейных перемещений до 100мкм и сил до 10гс. Механотрон вкладывают в мостовую схему, сигнал с которой поступает в дифференциальный усилитель и высокочастотный фильтр, а затем регистрируется самописцем. Возникающий при появлении поверхностной пленки граничный скачок потенциала измеряют следующим образом. Золотой измерительный электрод, вибрирует вблизи (~1мм) поверхности с постоянной частотой, второй хлорсеребряный электрод, являющийся электродом сравнения, погружают в объем электролита. Поверхность теней эритроцитов, нанесенных на электролит, и диск вибрирующего электрода образуют две обкладки конденсатора, емкость которого меняется с частотой вибрации электрода, находящегося над поверхностью. Конденсатор генерирует переменный ток, амплитуда которого пропорциональна заряду обкладок, последний, в свою очередь, зависит от разности потенциалов на обкладках, что и позволяет его измерить. Изобретение поясняется примером конкретного выполнения. Больной К., 27 лет, водитель автобуса был обследован в связи с поступлением на новую работу. Жалобы на головные боли, возникающие спонтанно. Повышение артериального давления у больного не отмечено. Были проведены исследования по предлагаемому способу. Как описано выше был получен раствор теней эритроцитов определенной концентрации, 4,5мл этого раствора были помещены на поверхность электролита, после установления равновесного состояния системы через 45мин измерили поверхностное давление и граничный скачок потенциала Затем сформировали новую систему и на поверхность электролита нанесли сначала модельную биомембрану (фосфолипид), а затем 4,5мл исследуемого раствора теней эритроцитов. Равновесное состояние системы установилось через 24мин. Были измерены соответствующие показатели и Разность и Полученные результаты свидетельствуют о ранней стадии гипертонической болезни, которая еще не проявляется конкретными симптомами. В соответствии с заявляемым способом было обследовано две группы пациентов. В первой группе обследуемых была предположена возможность развития гипертонической болезни, в результате наблюдения оказалось, что у 93,9% исследуемых развилась гипертоническая болезнь. Вторая группа обследуемых представляла собой здоровых людей, у которых была отрицательная реакция, определенная заявляемым способом, на возможность заболевания гипертонической болезнью. При длительном наблюдении за этой группой оказалось, что заболели 12,2%. Таким образом, точность заявляемого способа для пациентов с пограничным состоянием составляет 87,6%, а у больных с проявлением ранней стадии заболевания - 93,9%. Достоинство предлагаемого способа является достаточно высокая точность диагностирования, простота осуществления способа и невысокая стоимость анализа. Результатом этих Преимуществ является возможность повсеместного применения указанного способа.