Спосіб визначення інозитолфосфатів

Спосіб визначення інозитолфосфатів, що включає паперову хроматографію і кількісний аналіз, який відрізняється тим, що інозитолфосфати визначають у сечі. (19) (21) u200602312 (22) 02.03.2006 (24) 17.07.2006 (46) 17.07.2006, Бюл. № 7, 2006 р. (72) Горбач Тетяна Вікторівна, Денисенко Світлана Андріївна, Пушкар Юрій Якович 3 16145 4 Позитивний ефект корисної моделі полягає в проти холостого досліду. тому, що можливість визначення інозитолфосфаПри вмісті білка в сечі більш 1% у 4мл сечі дотів у сечі не тільки розширює арсенал біологічних бової додають 1,5мл 10% трихлороцтової кислоти середовищ для їхнього визначення, але і робить для осадження білка. Денатуровані білки осаджуметод більш доступним і простим для клінічних ють центрифугуванням (5хв. при 3000д). Надосалабораторій (у тканинах багато мононуклеотидфодову рідину випарюють на водяній бані при темпесфатів, тому потрібний додатковий етап - розподіл ратурі 80 С до обсягу 0,5мл. на колонках з дауексом). Ефективність методу ілюструє наступний приМетод здійснюють наступним чином: клад: Хроматографія інозитолфосфатів на папері. Визначаємо вміст інозитолфосфатів у цитоРозподіл проводять за допомогою нисхідної хроплазмі нирок за методом – найближчим аналогом і матографії на папері ватман №1, використовуючи у сечі методом, що заявляється. систему розчинників ізопропанол: насичений аміак У цитоплазмі нирок вміст: інозитолмонофос/ вода (7:5:2 V/V). Обсяг нанесених проб - 10мкл. фату - 0,87 0,05нмоль/г білка; інозитолдіфосфату Хроматограму проявляють наступним реаген- 1,93 0,12нмоль/г білка; інозитолтрифосфату том: 5мл 60% хлорної кислоти з 10мл 1M HCl і 0,53 0,03нмоль/г білка; сума інозитолів 25мл 4% молібдату амонію, вода до 100мл. Під3,32 0,21нмоль/г білка. сушують папір при кімнатній температурі й опроміУ сечі вміст: інозитолмонофосфату нюють УФ-світлом. Виявляються блакитні плями 1,45 0,11ммоль/л; інозитолдіфосфату інозитолфосфатів. Ідентифікацію плям роблять 3,18 0,19ммоль/л; інозитолтрифосфату або по стандартних зразках, або за коефіцієнтом 2,38 0,16ммоль/л; сума інозитолів розподілу (Rf). Для інозитолмонофосфату в даній 7,11 0,31ммоль/л. системі розчинників Rf=0,6; для інозитолбіфосфаКоефіцієнт кореляції суми інозитолфосфатів у ту - 0,36; для інозитолтрифосфату - 0,16. Кількіснирках і сечі - =+0,94; для інозитолмонофосфату ний аналіз проводять у такий спосіб: плями зскрі=+0,87; для інозитолдіфосфату - =+0,94; для бають, зіскрібки поміщають у пробірки, що містять інозитолтрифосфату - =+0,85. Високі коефіцієнти 1мл 5% молібденового амонію, перемішують, кореляції свідчать про адекватність визначення центрифугують. До надосадової рідини додають інозитолфосфатів у цитоплазмі нирок та сечі. 0,2мл ейконогена (0,1г у 25мл 24% бісульфату натрію) і 1,8мл води, перемішують. Через 20хв. фотометрують при А=630-690нм у кюветах 1см Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601