Спосіб визначення імуностимулюючої дії протефлазиду

Спосіб визначення імуностимулюючої дії протефлазиду, який включає визначення загальної 3 щільності фікол-верографіну (1,093). Кров нашаровують на градієнт щільності, центрифугують при 1500 обертах на хвилину протягом 30 хвилин. Після цього клітини обережно відсмоктують пастерівською піпеткою в центрифужну пробірку і двічі відмивають у стерильному фізіологічному розчині. Відмиті клітини ресуспендують в 0,5мл фізрозчину. На предметне скло наносять 0,5мл клітинної суспензії, додають 0,05мкл 1% розчину нітросинього тетразолію і ставлять на 15 хвилин в термостат при температурі 37°С. Після термостату зі скла струшують надосадову рідину, сушать, фіксують метанолом і фарбують нейтральним червоним. Підраховують 100 клітин нейтрофілів і визначають відсоток тих, які містять диформазан позитивні гранули (спонтанний НСТ-тест за відомим способом). Згідно нашого способу, до клітинної суспензії нейтрофілів (0,1мл) додають 0,05мкл 1% розчину нітросинього тетразолію та 0,025мкл протефлазиду з вмістом флавоноїдів 0,32мг/мл в перерахунку на рутин в певному розведенні. Отримана суміш стоїть при кімнатній температурі 10 хвилин, а далі в термостаті при температурі 37°С ще 15 хвилин. Після термостату мазок сушать, фіксують метанолом і фарбують нейтральним червоним. Підрахунок нейтрофілів, що містять диформазанпозитивні гранули, проводять з розрахунку на 100 16502 4 клітин. З метою вибору найбільш ефективної концентрації протефлазиду для отримання його стимулюючої дії обстежено 27 хворих з проявами вторинного імунодефіциту. Проведено експеримент із серією розведень протефлазиду фізіологічним розчином - 1:2; 1:4; 1:8; 1:16; 1:32 (табл. 1). Із наведених даних видно, що у стимульованому протефлазидом НСТ-тесті відсоток диформазанпозитивних клітин коливався від 23,0±2,16% до 29,5±1,78% і був найвищим при розведенні протефлазиду фізрозчином у співвідношенні 1:4. Функціональний резерв (приріст диформазанпозитивних клітин в НСТ-тесті під впливом протефлазиду) також був найвищим при використанні розведення протефлазиду фізрозчином 1:4 і склав 6,22±0,48%. Дослідження по відомому та новому способам проведені також у 12 практично здорових осіб. По відомому способу відсоток диформазанпозитивних клітин в НСТ-тесті становив 25,3±0,62%, а по новому способу (стимульованому протефлазидом) - 30,3±0,17% з функціональним резервом 5,0±0,99%. Слід відмітити, що протефлазид не викликає токсичної пошкоджуючої дії на суспензію клітин нейтрофілів. Таблиця 1 Розведення протефлазиду нерозведений 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 Відсоток диформазан-позитивних клітин в НСТ-тесті спонтанному (за відомим спо- стимульованому (за новим способом),% собом), % 22,5±2,10 23,8±2,16 22,5±2,05 24,5±1,75 22,9±1,00 29,5±1,78 22,8±1,49 22,5±1,55 21,8±1,40 22,7±1,56 22,4±1,88 22,8±2,19 Таким чином, встановлена імуностимулююча дія протефлазиду на киснево-залежну бактерицидну систему нейтрофілів in vitro, що відображає його стимулюючу дію на неспецифічну резистентність організму в цілому. Корисна модель можна використовувати для визначення індивідуальної чутливості людського організму до імуностимулюючої дії протефлазиду з метою визначення доцільності призначення даного препарату для корекції виявлених порушень імунітету у пацієнтів з різними нозологічними формами. Джерела інформації: 1. Блиндарь В.Н., Зубрыхина Г.Н. Современные представления о роли нейтрофилов в противоопухолевом иммунитете // Клин. лаб. диагности Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Функціональний резерв, % 0,6±0,10 2,4±0,60 6,2±0,48 2,8±0,65 1,0±0,14 0,4±0,10 ка .- 2005. -№ 8.-С. 51-54. 2. Куртасова Л.М., Шахина НА., Задорова Ю.В. Особенности функциональной активности нейтрофилов у больных атопическим дерматитом // Аллергология. - 2005. - № 1. - С. 35-39. 3. Величковский Б.Т. Моллекулярные и клеточные основы экологической пульмонологии // Пульмонология. - 2000. - № 3. - С. 10-18. 4. Романишин Я.М., Темник І.В., Лаповець Л.Є. та співавт. Методичні рекомендації для оцінки імунного статусу людини: визначення факторів неспецифічної резистентності, гуморального імунітету та мікрометодів дослідження імунної системи // Методичні рекомендації. - Львів. 1999. - 29 с. – найближчий аналог. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601