Спосіб діагностики бактерій роду sтарнylососus

Изобретение относится к медицинской, ветеринарной, санитарной и общей микробиологии, в частности, методам родовой идентификации стафилококков и может быть использовано как для их определения в чистых культурах, так и для индикации этих микроорганизмов в ассоциациях. Стафилококки являются широко распространенными патогенами человека и животных и способны вызывать спорадические заболевания, эпидемические вспышки и внутрибольничные инфекции. Своевременная точная идентификация этих бактерий чрезвычайно важна для проведения соответствующей терапии. Известны точные способы дифференциации стафилококков от фенотипически сходных бактерий, в частности, микрококков, основанные на изучении биополимеров клеток (аминокислотный состав пептидогликана, нуклеотидный состав ДНК, наличие тейхоевых кислот и др.). Однако их применение предполагает использование дорогостоящих реактивов и оборудования и значительных затрат времени, вследствие чего они недоступны для обычных практических лабораторий. Известны способы идентификации стафилококков [1], основанные на изучении комплекса морфологических, физиологических и биохимических свойств (образование кислоты из глюкозы в микроаэрофильных условиях, способность к расщеплению аргимина, наличие оксидазы, бактериолитическая активность, рост на среде с азидом натрия и роданидом калия, чувствительность к лизостафину, эритромицину и фуразолидону). В числе последних наиболее близким к предлагаемому изобретению является определение чувстви тельности к эритромицину и фуразолидону, однако использование этой группы методов не позволяет точно определить принадлежность изолята грамположительных каталазоположительных кокков к роду Staphylococcus и приводит к значительному числу ошибок. В основу изобретения поставлена задача создания нового способа родовой идентификации бактерий рода Staphylococcus, в котором дифференциация этих бактерий от представителей других таксонов обеспечивается путем использования диагностикума, представляющего собой диски из фильтровального картона, пропитанные антибиотиком батумином, характеризующимся узкоспецифическим избирательным антимикробным действием по отношению к стафилококкам и за счет этого позволяющим просто, быстро, высоконадежно и экономически выгодно проводить родовую идентификацию стафилококков. Поставленная задача решается тем, что в способе родовой идентификации стафилококков, предусматривающим нанесение на поверхность твердой питательной среды суспензии клеток исследуемого штамма в физиологическом растворе или исследуемого материала, содержащего бактерии, помещение на ее поверхность дисков, пропитанных антибиотиком, определение присутствия стафилококков по наличию зоны задержки роста вокруг них, согласно изобретению вводится использование дисков, пропитанных специфическим узконаправленным против стафилококков антибиотиком батумином. Исследования проводились как с использованием референтных штаммов с заранее известным систематическим положением, так и со штаммами, выделенными из источников клинического происхождения, Токсономическую принадлежность последних определяли, пользуясь известными в настоящее время схемами и методами. Эффективность диагностикума во всех случаях подтверждается для видов S.aureus, S.capitis, S.cohnii, S.epidermidis, S.haemolyticus, S.nominis, S.hytcus, S.hyicus subsp. chromogenes, S.intermedius, S.saprophyticus, S.sciurt subsp. sciurl, S.sciurj subsp. lentus, S.simuians, S.warneri, S.xylosus, независимо от источника их изолирования, наличия или отсутствия множественной лекарственной устойчивости к антибиотикам. Активность не проявляется по отношению к представителям Micrococcus luteus, M.varians, M.agilis, M.roseus, M.nishinomiyaensis, M.kristinae, M.lylae, M.sedentarius, Acinetobacter sp., Agrobacterium tumefaclens, Bacillus cereus, B.subtilis, Corynebacterium michiganense, Enterobacter sp., Erwinia arofdea, E.carotovora, Escherichia coli, Haemophilus sp., Klebsiella sp., Listeria sp., Marinococcus halophilus, Mycobacterium sp., Nelsseria sp., Peptostreptococcus sp., Planococcus citreus, Proteus rettgeri, P.vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, P.tabaci, Salmonella typhi, S.paratyphi, Serratia sp., Shigelia sonnei, S.flexneri, Streptococcus pyogenes, S.haemolyticus, Xanthomonas phaseoli, X.vezicatoria и Candida albicans. Активность диагностикума по отношению ко всем стафилококкам и ее отсутствие по отношению к представителям других таксономических групп позволяет использовать его как для определения принадлежности чистых культур к роду Staphylococcus, так и для первичной индикации наличия стафилококков в составе смешанных культур, часто изолируемых из гнойных ран, мокроты и других источников клинического и неклинического происхождения. Способ с использованием описанных дисков с батумином позволяет устанавливать наличие чувствительности к ним параллельно с определением спектра чувстви тельности к антибиотикам. Благодаря этому не требуются дополнительные затраты на материалы и реактивы для проведения исследований и обучение персонала; в клинике диагностикум может использоваться одновременно с определением антимикробного препарата, оптимального для терапии больного. Наличие зоны задержки роста свыше 17мм свидетельствует о принадлежности исследуемого штамма к роду Staphylococcus. Диагностика стафилококков при помощи предлагаемого способа обладает преимуществами как перед таксономическими, так и физиолого-биохимических методами, надежна и не требует значительных затрат времени и денег. Способ поясняется следующим образом. Диагностикум может быть использован для определения принадлежности чистой культуры к роду Staphylococcus и для установления присутствия ста филококков а смешанных культурах, Для определения чувствительности к диагностикуму чистых культур на поверхность плотной питательной среды в чашке Петри наносится 1мл взвеси клеток исследуемых бактерий (плотность суспензии соответствует стандарту мутности N10 ГКИ им. Тарасевича). После равномерного распределения жидкости по поверхности ее избыток удаляют пипеткой. В чашку помещают диск с батумином. Чашку инкубируют при 37°C в течение 18ч и определяют наличие зоны задержки роста вокруг диска. Наличие зоны размером более 17мм свидетельствует о принадлежности изолята к роду Staphylococcus; ее отсутствие - о том, что изолят не является стафилококком и относится к каким-либо другим таксонам (табл.). Для определения наличия стафилококков в смешанных культура х материал (тщательно растертые мокрота, кал, гной и другие субстраты плотной консистенции либо их суспензии; осадок, полученный при центрифугировании мочи, эксудата и др.; анализируемые жидкие образцы либо из разведения) растираются по поверхности плотной питательной среды в чашке Петри, затем на нее помещают дик батумином. Чашка инкубируется при 37°C в течение 18ч. Наличие зоны просветления (либо зоны отсутствия роста) вокруг диска свидетельствует о присутствии стафилококков в составе смеси культур. Бактерии, растущие в границах зоны просветления, относятся к другим таксонам.