Спосіб визначення сполученої активності пари антибіотиків

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ определения сочетанной активности нескольких пар антибиотиков, согласно которому одинаковые по размеру субстраты с антибиотиками размещаются на некотором расстоянии (равном или несколько большем суммы радиусов зон задержки антибиотиков каждой пары) друг от друга на поверхности засеянной культурой микроорганизмов плотной питательной среды. При этом субстрат с одним из антибиотиков пары размещается в центре питательной среды, субстраты с другими антибиотиками, каждый из которых образует пару с центральным, - вокруг последнего. После инкубирования можно выявить характер взаимодействия зон задержки роста культуры между парами субстратов с антибиотиками. Так, если вокруг субстратов пары образуются две независимые зоны задержки роста - эффект аддитивный (нейтральный). Если наблюдается "урезывание" зон в частях, которыми они обращены друг к другу - можно говорить об антагонизме. Если зоны сливаются, образуя "мост", наблюдается синергизм, то есть сочетанная активность, Тем не менее данный способ из-за порядка размещения субстратов на поверхности среды не позволяет использовать принцип радиальности и автономности микробиологических реакций на отдельных секторах диффузии антибиотиков в области их сочетанного действия, благодаря которому можно выявить наличие или отсутствие эффекта сенсибилизации. Сенсибилизация микроорганизмов -это новое понятие в учении об антибиотиках, химиотерапевтических веществ на бактериальную клетку, устойчивую или слабочувствительную культуры микроорганизмов к данным химиотерапевтическим веществам, а также, когда культура устойчива к одному химиотерапевтическому веществу и чувствительна к другому. При этом феномене одно химиотерапевтическое вещество сенсибилизирует культуру к действию на нее другого химиотерапевтического вещества. Явление сугубо индивидуальное, которое должно решаться в каждом отдельном случае. Этот феномен создает губительный эффект на микробную флору, действие препаратов ..возрастает в десятки раз, что уменьшает затраты на медикаменты. Используя предлагаемый метод, имея выделенную чистую культуру микроорганизмов, можно за сутки получить результат исследования и предложить рациональное лечение. В основу изобретения поставлена задача разработать способ определения сочетанной активности, который благодаря особому порядку размещения субстратов с антибиотиками на поверхности питательной среды, позволил бы наряду с сочетанной активностью определять наличие или отсутствие эффекта сенсибилизации. Поставленная задача решается тем, что в способе определения сочетанной активности пары антибиотиков, предусматривающем размещение одинаковых по размеру субстратов с антибиотиками на поверхности засеянной культурой микроорганизмов плотной питательной среды, инкубирование и выявление характера взаимодействия зон задержки роста культуры между парами субстратов с антибиотиками, по которому судят о наличии или отсутствии сочетанной активности, согласно изобретению субстраты с одним из антибиотиков пары размещают по дуге на расстоянии один от другого, равном 1,0-1,5 диаметра субстрата, субстрат с другим антибиотиком пары размещают внутри фигуры, ограниченной дугой и прямой, проходящей через концы дуги так, что расстояние между субстратами пары антибиотиков равномерно увеличивается, причем расстояние между наименее удаленными субстратами пары составляет 1,0-1,5 диаметра субстрата, а между наиболее удаленными -не менее 4-х диаметров субстрата вне упомянутых дуги и фигуры размещают по меньшей мере по одному субстрату с каждым из антибиотиков пары, причем расстояние между каждым из этих субстратов и любым другим составляет не менее 4-х диаметров субстрата. Пример конкретного выполнения способа. Осуществление изобретения возможно в любой баклаборатории. В чашку Петри наливается расплавленный и остуженный до 50°С питательный агар с добавлениями (глюкоза, кровь и т.д.), необходимыми для оптимального роста исследуемых микроорганизмов. После застывания и выдерживания ее 20-30 мин в термостате при температуре 37°С пастеровской пипеткой наносится на поверхность среды 3-4 капли взвеси одномиллиардной суточной агаровой культуры исследуемого микроорганизма и растирается стерильным шпателем по всей поверхности питательной среды. На поверхность засеянной питательной среды кладут пинцетом диски заводского приготовления с химиотерапевтическими веществами. Если нет дисков заводского приготовления, то можно их приготовить самим (Навашин СМ., Фомин Н.П. "Справочник по антибиотикам. Москва, "Медицина", 1974 г., с. 41). На чашку Петри с питательным агаром посеяна сплошным газоном культура стафилококка, выделенная из конъюнктивного мешка больного глазной клиники 2-й ГКБ г. Одессы. В правой стороне чашки кладут диск, содержащий мономицин, (Фиг.1). На расстоянии 7-9 мм кладут диск с другим химиотерапевтическим веществом, к примеру, тетрациклин, веерообразно не удаляющихся расстояниях от дисках мономицином. Каждый диск с тетрациклином кладут на расстоянии 7-9 мм друг от друга, удаляя от мономицина на 2-4 мм. Это опытная сторона чашки. В верхней части чашки находится диск с тетрациклином - контроль тетрациклина. В левой части чашки диск с мономицином - контроль мономицином (диски заводского приготовления) (фиг. 1). Можно диски размещать по заготовленному ранее трафарету. Как явствует из фигуры 1, радиус зоны задержки роста культуры мономицином, находящимся не в области сочетанного действия антибиотиков мономицин-тетрациклин (I), равен радиусу зоны задержки роста микрофлоры контроля мономицина. Радиус зоны задержки роста микрофлоры тетрациклином, находящейся не в области сочетанного действия этих двух антибиотиков (2), равен радиусу зоны задержки роста микрофлоры контроля тетрациклина, что говорит о достоверности наблюдений без необходимости применения контролей. В то же время на фигуре (1) видны увеличения зон задержки роста, постепенно увеличивающихся к диску тетрациклина (3), что свидетельствует о повышении активности сочетания на данный микроорганизм. Это может быть подтверждено титрованием в жидкой среде методом двукратных серийных разведений на фоновой дозе одного химиотерапевтического вещества, того, к которому сенсибилизируется культура. Интересно отметить, что сенсибилизирующее действие химиотерапевтических веществ выявляется только на секторах диффузии между ними, не смещается на противоположную сторону диска. Так что зона задержки роста не в области сочетанного действия химиотерапевтических веществ может служить контролем действия данного химиотерапевтического вещества на данную флору. Таким образом, очевидно, что сумма радиусов зон задержки роста мономицина-1 и тет-рациклина-2 в опытной стороне так и в контролях меньше, чем максимальная зона задержки роста микроорганизмов между наиболее удаленными химиотерапевтическими веществами мономицин-тетрациклин (3). 1+2