Спосіб одержання твердофазного реагенту

Изобретение относится к способу получения твердофазного реагента, который содержит аллиловые боковые цепи, предназначенного для синтеза пептидов, гликопептидов или протеинов. Целенаправленный синтез пептидов приобретает большое значение вследствие растущих требований фармакопеи, добавок к продуктам питания и других активных веществ в отношении селективности воздействия, переносимости организмами и биологической разложимости. Несмотря на интенсивное развитие технологии генной инженерии, это справедливо также для химического синтеза пептидов, посредством которых, например, открывается единственный путь получения пептидов с частями и структурными элементами неприродного происхождения. Большим прогрессом в деле химического построения пептидов был синтез в твердой фазе по работам Р.И. Меррифилда. Это справедливо, несмотря на известные теперь уже проблемы, вновь и вновь возникающие в отношении частоты синтезированного продукта при синтезе пептидов в твердой фазе. В качестве С-терминальных защитных или анкерных групп в синтезе в твердой фазе служат замещенные сложные эфиры бензила, которые позволяют осуществить отщепление синтезированных пептидов от полимерного носителя в более или менее сильной кислотной среде. Условия отщепления в кислотной среде при классическом синтезе по Меррифилду реализуются применением бромистого водорода в различных растворителях или фтористого водорода, и имеют тот недостаток, что при этом могут идти нежелательные побочные реакции типа транспептидирования или трансалкилирования. Синтез гликопептидов по этой причине почти невозможен, потому что чувстви тельные гликозидные связи этих молекул в условиях кислой среды отщепляются или аномезируются. Целью изобретения является получение твердофазного реагента для синтеза в твердой фазе пептидов и гликопептидов, при котором пептиды и гликопептиды могут быть отщеплены от полимерного носителя селективно при таких мягких условия х, при которых никакого расщепления гликозидных связей или аномеризаций не происходит. Поставленная цель достигается предлагаемым способом получения твердофазного реагента, заключающимся в том, что органический полимер, содержащий аминометильные группы, обрабатывают соединением формулы: В - CR2 = CR 1 –СН2Х, где В -органический радикал с концевой карбоксильной группой; R1 и R2 имеют одинаковые или различные значения и означают водород, алкил, а X - гидроксил или галоген. В результате синтезируют полимер, содержащий боковые аллиловые группы формулы где R3, R1 , R2 и X имеют указанные выше значения. С использованием синтезированного реагента осуществляют синтез незащищенных или частично защищенных пептидов, гликопептидов, нуклеотидов, гидроксикар-боновых кислот, бикарбоновых кислот или трикарбоновых кислот. Твердофазный реагент по изобретению можно использовать также в качестве твердой фазы в других технологиях в твердой фазе, например, для синтеза олигонуклеотидов, которые при необходимости могут быть дополнительно нарощены энзимным путем, например, до определенных последовательной ДНК, для последовательного анализа, а также при реакциях, при которых энзимы, каталитически действующие кислоты Льюиса, редоксинные системы и тому подобное за счет иммобилизации в результате адсорбции, полимеризации,пробкообразования и т.п. приводят к твердому виду, что облегчает дозировку, дальнейшую обработку и отделение продуктов реакции. Синтез полимерных носителей с аллиловыми анкерными группами. Для синтеза полимеров общей формулы 1 с боковыми цепочками, которые несут аллиловые группы, можно использовать, например, хлорметилированный полистирол, который с помощью фталимид-калия через производные фталоиламида переводят в аминометилполистирол. Аминометилированный полистирол превращают в соединение общей формулы 1, при реакции с соединениями ацила и ал-кила, которые имеют терминальную группу аллил-галогенида, сложного эфира или спирта, например, с 4-бромкротоновой кислотой, в присутствии дициклогексилкарбодиимида (DCC) и 4диметиламинопиридина (D MAP). Вместо бромкротоновой кислоты можно использовать более длинноцепочечные замещенные аллилом алкенкарбоновые кислоты, например, с формулой где X - является бромом, а к - например, равен 0 или 7. Для иллюстрации изобретения приведены следующие примеры. Пример1. 2г аминометилированного полистирола (0,3 маквив. NH2/г смолы) в 40мл абсолютного метиленхлориде перемешивают при комнатной температуре в течение около 16 часов с N-Br-9-ундеценовой кислотой (6 ммоль) в присутствии дициклогексил-карбодиимида (DCC) (7,5 ммоль) и 4диметиламинопиридина (DMAP) (1,65 ммоль). При этом согласно приведенному ниже уравнению реакций получают твердую фазу с аллильной боковой цепью. После отфильтровывания продукта реакции последний промывают метиленхлоридом, после чего проводят сушку в высоком вакууме при температуре 30°С. Πример 2. Способ осуществляют в соответствии с примером 1, но только с тем отличием, что вместо NB2-9-ундеценовой кислоты применяют 4-хлоркротоновую кислоту. Пример 3. Способ осуществляется в соответствии с примером 1, но с тем отличием, что вместо N-бром-9ундеценовой кислоты применяют 4-гидроксикротоновую кислоту, 4-гидрокси кротоновую кислоту в форме третичного бутилового эфира, который получают при помощи трет.бутилата калия. Πример 4. Синтез активированного или способного к активации полимерного носителя с аллиловыми анкерными группами N-(4-бромкротоноил)-аминометилполи-стирол 5. 2 г аминометилполистирола (0,8 моля эк-вив. NН3/г смолы) размешивают в 40 мл абсолютного дихлорметана с 1,02 г (6,2 мил-лимоля) 4-бромкротоновой кислоты, 0,2 г (1,65 миллимоль) 4диметиламинпиридина и 1,53 г (7,5 ммоль) -дициклогексилкарбодиимида в течение 12 часов при комнатной температуре, Затем полимер отфильтровывают, промывают дихлорметаном. метанолом, диметилформамидом и снова дихлорметаном и сушат под высоким вакуумом при 30°С.