Спосіб прогнозування якості сперми бугаїв

Винахід належить до галузі тваринництва, зокрема штучного осіменіння, а саме до способів оцінки якості сперми. Спосіб може бути використаний в лабораторіях державних племпідприємств, кріобіологічних лабораторіях, молочно-товарних фермах і комплексах при вирішенні питання про доцільність заморожування І зберігання сперми певних плідників та направленого ведення селекційно-племінної роботи. Відомі і впроваджені у виробництво способи оцінки якості сперми шляхом визначення рухливості і виживання сперміїв, осмотичної резистентності, резистентності до холодового шоку, дегідрогеназної активності та інші (Сперма быков неразбавленная. Методы испытаний. ГОСТ 20909; 3 - 75 - 6 - 75. - М., 1975. - 49c.). Їх недоліки полягають в тому, що вони лише реєструють зміни, які відбулися або відбуваються в спермі на момент дослідження, не враховуючи причину її різної стійкості до змін умов зовнішнього середовища і тому не можуть бути використані для прогнозування якості свіжоотриманої і розмороженої сперми. Найбільш близьким до способу, що заявляється є спосіб оцінки якості сперми за активністю сукцинатдегідрогенази. Суть способу полягає у реєстрації часу утворення осаду формазану внаслідок відновлення 2,3,5трифенілтетразолію (Семаков В.Г. Влияние дегидрогеназной и цитохромоксидазной активности ферментных систем на жизнедеятельность сперматозоидов // Биохимия. 1961. - Т.26. - Вып.4; Чухрій Б.М., Клевець Л.О. До методики визначення активності окислювальних ферментів у спермі бугаїв // В зб.: Розведення та штучне осіменіння великої рогатої худоби. - К., 1978. - Вип.10). Значним недоліком, цього способу є суб'єктивна окомірна оцінка активності ферменту за спеціально розробленою стандартною шкалою і тривала підготовка проб сперми до аналізу. Спосіб, що заявляється, грунтується на оберненому зв'язку між якістю сперми і вмістом в ній калію. Сперма з низьким вмістом калію високоякісна і добре заморожується, а з високим низької якості і погано заморожується. Спосіб простий у виконанні, не потребує додаткових фінансових витрат, а також скорочує затрати робочого часу, матеріалів і реактивів на заморожування сперми; дозволяє, шляхом визначення вмісту калію у нерозбавленій спермі, прогнозувати її якість після розморожування; отримати об'єктивну оцінку якості сперми і зробити прогноз браку свіжоотриманих еякулятів і розморожених спермодоз. В основу винаходу покладено завдання розробити об'єктивний, надійний у виконанні, придатний для використання в практиці штучного осіменіння тварин спосіб прогнозування якості сперми плідників. Технічний результат досягають шляхом використання в якості біохімічного показника рівня кількісного вмісту калію у свіжоотриманій нерозбавленій спермі, при цьому за умови вмісту калію в спермі бугаїв 0 45мМоль/л - еякуляти відносять до високоякісних, а при рівні 46мМоль/л і більше - до низькоякісних. При проведенні патентного пошуку авторами і заявником виявлене технічне рішення, в якому є ряд суттєвих ознак, спільних із заявленим (Чухрій Б.М., Клевець Л.О. До методики визначення активності окислювальних ферментів у спермі бугаїв // В зб. Розведення та штучне осіменіння великої рогатої худоби. - К., 1978. - Вип.10) визначення біохімічного показника, рівень якого вірогідно корелює з якістю сперми. Однак зазначені суттєві ознаки технічного рішення спільні із прототипом не дозволяють вирішити поставлену задачу провести прогнозування якості сперми ще до її заморожування. Технічних рішень, які б за сукупністю ознак повністю співпадали з ознаками заявленого способу, заявником не виявлено. Це дозволяє зробити висновок про відповідність заявленого технічного рішення критерію "новизна". В джерелах патентної і науково-технічної інформації не знайдено відомостей про способи прогнозування якості розмороженої сперми, що відрізняє заявлений спосіб від прототипу. В якості біохімічного показника використано кількісний вміст калію у свіжоотриманій нерозбавленій спермі сільськогосподарських тварин, зокрема бугаїв. Заявлене технічне рішення не випливає явним чином з уже відомого рівня техніки, що дозволяє зробити висновок про відповідність заявленого рішення критерію "винахідницький рівень". Заявлений спосіб може бути використаний у тваринництві, зокрема для ведення направленої селекційно-племінної роботи на молочно-товарних фермах і комплексах та державними племінними станціями при вирішенні питання про доцільність використання сперми тих чи інши х бугаїв для зберігання її шляхом заморожування і тому відповідає критерію "промислова придатність". Технічне рішення є новим, промисловопридатним, має винахідницький рівень і відповідає всім умовам патентоспроможності винаходу відповідно до статті 6 розділу II закону України "Про охорону прав на винаходи і корисні моделі" №3687 - XII. Реалізація заявленого способу здійснюється слідуючим чином: свіжоотримана сперма сільськогосподарських тварин, наприклад бугаїв, перед її заморожуванням піддається дослідженню шляхом визначення кількісного вмісту калію методом полум'яної фотометрії (Зверева Г.В., Максим'юк В.М., Свідерко БД Методики визначення макроелементів калію, натрію і кальцію, в сперміях і плазмі сперми бугаїв методом полум'яної фотометрії // В зб. Новое в зооте хнических методах исследований. - Харьков, 1992. - Ч.I. С.185 - 188). При цьому сперму з числовими значеннями вмісту калію в межах 10 - 45мМоль/л приймають за високоякісну і використовують для заморожування, а при значеннях 46мМоль/л і більше - вибраковують. Приклад конкретного виконання способу. Дослідження проведено на двох групах бугаїв чорно-рябої породи віком від 2 - ох до 6 - ти років. Визначення вмісту калію проводили один раз у місяць на протязі року. Бугаї першої гр упи продукували сперму з низьким вмістом калію, другої - з високим. В кожній групі аналізували сперму шести бугаїв. За рік проаналізовано відповідно по 72 проби сперми. Аналіз якості отриманих еякулятів і розморожених спермодоз бугаїв обох груп проводили два рази в тиждень на протязі року. В кожній групі проаналізовано по 1152 еякуляти. Сперму заморожували в лактозожовтково-гліцериновому розбавнику. В свіжоотриманій спермі бугаїв з вмістом калію у межах 10 - 45мМоль/л спостерігається висока рухливість сперміїв, яка в середньому становить 7,40 ± 0,14 балів; виявлено високу активність ферменту сукцинатдегідрогенази - 24,5 ± 0,45ум. одиниць і низький процент вибракуваних еякулятів - 2,38 - 0,46. При зростанні вмісту калію від рівня 46 до 90мМоль/л якість еякулятів знижується: рухливість сперміїв становить 7,17 ± 0,21 балів; активність сукцинатдегідрогенази - 19,3 ± 0,7ум. одиниць, а об'єм вибракуваних дуплетних еякулятів зростає до 7,70 ± 0,06 процентів. Характеристика якості сперми бугаїв з низьким і високим вмістом калію показана в таблиці. Після розбавлення сперми лактозо-жовтковогліцериновим розбавником, заморожування її в рідкому азоті до -196°C і відтаювання гранул в 2,8% - ному розчині цитрату натрію при 37°C в спермі з низьким вмістом калію у порівнянні до сперми з високим вмістом калію виявлено: вищу рухливість сперміїв 3,76 ± 0,02 проти 3,48 ± 0,06; вищий ви хід активних спермодоз - 178,71 ± 12,60 проти 118,10 ± 7,32 штук і нижчий процент браку неактивних спермодоз - 11,12 ± 1,50 проти 20,70 ± 0,43. Показник вірогідності різниці (P) отриманий в результаті досліджень сперми бугаїв дво х дослідних груп за вмістом калію; активністю сукцинатдегідрогенази; рухливістю сперміїв після розморожування; процентом браку свіжоотриманих еякулятів; процентом розморожених неактивних спермодоз, а також кількісним виходом активних спермодоз в усі х випадках перевищує 95%.