Застосування штаму гриба trichophyton mentagrophytes для виготовлення вакцини проти дерматомікозів тварин

Корисна модель що передбачається, відноситься до ветеринарної біотехнології, а саме до ветеринарної мікробіології і біотехнології, зокрема до отримання штаму Trichophyton mentagrophytes, що використовується для виготовлення вакцини проти дерматомікозів тварин. В колекції Національного центру штамів мікроорганізмів патогенних для тварин і депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів (ДНКІБШМ) такі штами відсутні. Метою корисної моделі, що передбачається, є отримання штаму Trichophyton mentagrophytes, який має високий рівень спороутворення, має однорідний склад популяції, що забезпечує промисловий рівень виготовлення вакцин проти дерматомікозів тварин. Штам Trichophyton mentagrophytes ТМЧ отримано від хворої на трихофітію телиці за допомогою методу селекційного відбору за ознаками спороутворення, культурально-морфологічних властивостей та вірулентності для лабораторних і сільськогосподарських тварин. Штам Trichophyton mentagrophytes ТМЧ задепоновано в депозитарії ДНКІБШМ під номером 389. Штам Trichophyton mentagrophytes ТМЧ №389 характеризується слідуючими ознаками. Морфологічні ознаки. Міцелій не окрашений, гіфи рівні, розгалужені, секційно розмежовані; мікроконідії круглі, овальні, інколи грушоподібні розміром 2-4мкм, макроконідії сигароподібні, зустрічаються в невеликій кількості, із закругленими кінцями, з 3-8 перетинками, розміром від 12 до 45мкм в довжину і від 4 до 6мкм в ширину. Інколи зустрічаються артроспори, термінальні і інтеркалярні хламідоспори, спіралеподібні закінчення гіф. Культуральні ознаки. На сусло-агарі колонії плискі, мучнисті, кремового кольору інколи білі з кремовим відтінком, злегка вираженою радіальною мережістю, ростучий край рівний або променистий, зворотна сторона колонії коричнева або світло коричнева, колонія швидкоростуча, на 15 добу інкубації має розмір 36-72мм. Склад популяції (ступінь дисоціації): не перевищує 2%. На сусло-агарі можуть вирости колонії двох морфологічних типів: - плискі, шорохуваті, кремового кольору, з радіальними бороздами, край колонії променистий, зворотна сторона колонії коричневого або світло-коричневого кольору; - плискі, бархатисті, білі, інколи з кремовим відтінком, незначними радіальними бороздами, з рівним або променистим ростучим краєм, зворотна сторона колоній світло-коричневого або світло-жовтого кольору. Споруляція: в усіх типів колоній значне утворення мікроконідій - 150-190млн/см3. Біохімічні властивості. Штам біохімічно не активний. Дає позитивну реакцію на уреазу, аргініндегідрогеназу і фосфатазу. Вірулентні властивості. При нашкірному зараженні гомогенізованою культурою Trichophyton mentagrophytes №389 дослідних кролів у попередньо епільовану і скарифіковану поверхню шкіри викликає типову клінічну картину трихофітії. При заражаючій дозі 5-10млн/см3 мікроконідій на місці аплікації на 10-12 день відмічено виражену ексудативно-запальну реакцію шкіри з появою кірочок. Самовиліковування кролів спостерігають на 2535 день. Антигенні властивості. На введення культури штаму гриба в організмі тварин (кролі, телята тощо) утворюються специфічні аглютиніни в титрах 1:80-1:1280. Імуногенні властивості. При дворазовому щепленні лабораторних тварин і телят вакциною, що виготовлена з цього штаму в дозі не менше 20млн/см3 живих мікроконідій у 90-100% тварин формується стійкий імунітет до зараження патогенним грибом. Приклад 1. Культуру Trichophyton mentagrophytes №389 вирощують на сусло-агарі в матрацних колбах при температурі 26-28°С протягом 15-25 діб. Вирощену культуру асептично знімають з поверхні поживного середовища і стерильно гомогенізують у міксері. Отриманий гомогенат за допомогою стерильного фізіологічного розчину розводять до концентрації мікроконідій не менше 300-400млн/см3. Після перевірки на відсутність контамінації сторонньою мікрофлорою до отриманої суспензії грибної маси додають захисне цукрозо-желатинове середовище у співвідношенні 1:1, фасують у стерильну пеніцилінові флакони і ліофільно висушують. Виготовлена таким чином вакцина має вигляд таблетки сірого або сіро-бежевого кольору. Вакцина зберігає свої біологічні властивості протягом 12 місяців з дня виготовлення. Приклад 2. Вивчають імуногенну активність вакцини на лабораторних тваринах. Дослідження проводять на 10 головах клінічно здорових морських свинок масою 300-350 грам. З них формують 2 експериментальні групи по 5 голів в кожній. Тварин першої щеплюють експериментальною вакциною ДНКІБШМ, другої - не щеплюють і використовують в якості контролю. Щеплення тварин проводили в дозі 1см3 з вмістом 30млн/см3 мікроконідій. Повторне щеплення провели через 15 діб. Через 27 діб після другого щеплення провели контрольне зараження тварин. Свинок заражали нашкірним методом штамом Trichophyton mentagrophytes ТМЧ-К. Отримані результати представлені в таблиці. Дані, наведені в таблиці, свідчать, що після контрольного зараження у свинок 1-ї групи виражених клінічних ознак захворювання трихофітією не спостерігали. У тварин 2-ї групи спостерігали розвиток захворювання. Через 27 діб після контрольного зараження стало очевидним, що захворювання у контрольних морських свинок прогресує. При мікологічному дослідженні з вогнищ враження контрольних морських свинок були виділені висхідні культури Trichophyton mentagrophytes. Від імунізованих свинок 1-ї групи дерматофіта виділити не вдалося. Таблиця 1 Строк після зараження (діб) 7 14 21 Клінічні ознаки захворювання після контрольного зараження 1-а група 2-а група гіперемія, злущення епідермісу, легке шелушіння і гіперемія шкіри утворення кірочок розширення зони враження (до легке шелушіння і гіперемія шкіри 4см), гіперемія, потовщення шкіри, папули утворення кірок зона враження розширилась до легке шелушіння і гіперемія шкіри 6см, некроз шкіри, гнійні виділення, утворення струпа; 27 спостерігаються ознаки одужання, гіперемія зникла, на вражених ділянках почався ріст волосся захворювання прогресувало, з'явились нові вогнища враження, клінічні прояви класичні для «стригучого лишаю» Приклад 3. Виготовлену за прикладом 1 вакцину використовують для щеплення телят віком 3-4 місяці. Телят щеплюють двічі з інтервалом 10-14 діб в дозі 1см3 з вмістом 30млн/см3 мікроконідій. Таблиця 2 Строк після зараження (діб) 7 14 21 27 Клінічні ознаки захворювання після контрольного зараження 1-а група 2-а група гіперемія, злущення епідермісу, легке шелушіння і гіперемія шкіри утворення кірочок розширення зони враження (до легке шелушіння і гіперемія шкіри, 5см), гіперемія, потовщення шкіри, невеликі кірочки папули утворення кірок зона враження розширилась до легке шелушіння і гіперемія шкіри, 10см, папули, масивні кірки, гнійні кірочки відпали виділення, утворення струпа; захворювання прогресувало, спостерігаються ознаки одужання, з'явились нові вогнища враження, гіперемія зникла, на вражених клінічні прояви класичні для ділянках почався ріст волосся «стригучого лишаю» Через 27 діб після другого щеплення провели контрольне зараження тварин штамом Trichophyton mentagrophytes ТМЧ-К. Отримані результати представлені в таблиці 2. Дані таблиці свідчать, що вакцина на основі антигену із штаму гриба Trichophyton mentagrophytes №389 виробляє імунітет проти трихофітії, викликаної Trichophyton mentagrophytes при експериментальному зараженні. Телята, які не були щеплені і раніше не хворіли на трихофітію сприйнятливі до експериментального зараження вірулентною культурою збудника. Проведені дослідження показали, що новий штам гриба Trichophyton mentagrophytes ТМЧ №389 має високу імуногенну активність, що дозволяє рекомендувати його для виготовлення ефективної вакцини проти трихофітії тварин.