Застосування штаму гриба trichophyton mentagrophytes для контролювання імуногенності вакцин проти дерматомікозів тварин

Корисна модель що передбачається, відноситься до ветеринарної біотехнології, а саме до ветеринарної мікробіології і біотехнології, зокрема до отримання штаму Trichophyton mentagrophytes, що використовується для контролювання імуногенності вакцин проти дерматомікозів тварин, до складу яких в якості антигену входить гриб Trichophyton mentagrophytes. В колекції Національного центру штамів мікроорганізмів патогенних для тварин і депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів (ДНКІБШМ) такі штами відсутні. Метою корисної моделі, що передбачається, є отримання штаму Trichophyton mentagrophytes, який має високий рівень спороутворення, має однорідний склад популяції, високі вірулентні властивості, що забезпечує об'єктивний контроль імуногенної активності вакцин проти дерматомікозів тварин. Штам Trichophyton mentagrophytes ТМЧ-К отримано від хворої на трихофітію телиці за допомогою методу селекційного відбору за ознаками спороутворення, культурально-морфологічних властивостей та вір улентності для лабораторних і сільськогосподарських тварин. Штам Trichophyton mentagrophytes ТМЧ-К задепоновано в депозитарії ДНКІБШМ під номером 391. Штам Trichophyton mentagrophytes ТМЧ-К №391 характеризується наступними ознаками. Морфологічні ознаки. Міцелій не окрашений, гіфи рівні, розгалужені, секційно розмежовані; мікроконідії круглі, овальні, інколи грушоподібні розміром 2-4мкм., макроконідії сигароподібні, зустрічаються в невеликій кількості, із закругленими кінцями, з 3-8 перетинками, розміром від 12 до 45мкм в довжину і від 4 до 6мкм в ширину. Інколи зустрічаються артроспори, термінальні і інтеркалярні хламідоспори, спіралеподібні закінчення гіф. Культуральні ознаки. На сусло-агарі колонії пласкі, мучнисті, кремового кольору інколи білі з кремовим відтінком, злегка вираженою радіальною мережістю, ростучій край рівний або променистий, зворотна сторона колонії коричнева або світло коричнева, колонія швидкоростуча, на 15 добу інкубації має розмір 36-72мм. Склад популяції (ступінь дисоціації): не перевищує 2%. На сусло-агарі можуть вирости колонії двох морфологічних типів: - плискі, шорохуваті, кремового кольору, з радіальними бороздами, край колонії променистий, зворотна сторона колонії коричневого або світло - коричневого кольору; - плискі, бархатисті, білі, інколи з кремовим відтінком, незначними радіальними бороздами, з рівним або променистим ростучім краєм, зворотна сторона колоній світло-коричневого або світло-жовтого кольору. Споруляція: в усі х типів колоній значне утворення мікроконідій - 120-150млн/см 3. Біохімічні властивості. Штам біохімічно не активний. Дає позитивну реакцію на уреазу, аргініндегідрогеназу і фосфа тазу. Вірулентні властивості. При нашкірному зараженні гомогенізованою культурою Trichophyton mentagrophytes №391 дослідних кролів у попередньо епільовану і скарифіковану поверхню шкіри викликає типову клінічну картину трихофі тії. При заражаючій дозі 1-3млн/см 3 мікроконідій на місці аплікації на 8-10 день відмічено виражену ексудативно-запальну реакцію шкіри з появою ерозій, накопиченням товстих кірочок. Самовиліковування кролів спостерігають на 35-50 день. Приклад 1. Культур у Trichophyton mentagrophytes №391 вирощують на сусло-агарі в пробірках або чашках при температурі 26-28°С протягом 15-25 діб. В пробірки з вирощеною культурою добавляють по 5см 3 стерильного фізіологічного розчину і за допомогою мікологічного гачка суспендують культур у гриба. Далі готують послідовні десятикратні розведення суспензії і підраховують кількість мікроконідій за допомогою камери Горяєва. Для проведення досліду готують суспензії гомогенату культури і сусло-агару у співвідношенні 1:1 до кінцевої концентрації мікроконідій 1, 2, 4млн/см 3. Дослд проводять на кролях живою масою 2-3кг, не хворівши х на трихофі тію і не щеплених проти неї. Зараження проводять нашкірно за загальноприйнятою методикою на ділянці спини за лопатками. Оцінку вірулентності проводять по терміну перехворювання, характеру і тяжкості інфекційного процесу. Результати досліджень представлені в Таблиці. Таблиця № групи Кількість тварин в групі Заражаюча доза (млн/см3) Кількість захворівших тварин 1 4 1 3 2 4 2 4 3 4 4 4 Характер перебігу захворювання виражена ексудативно-запальна реакцію шкіри з шелушінням епідермісу і утворенням кірочок виражена ексудативно-запальна реакцію шкіри з накопиченням товсти х кірочок, появою ерозій. виражена ексудативно-запальна реакція шкіри з накопиченням товсти х кірочок, появою ерозій, виразок, гнійного ексудату Термін одужання (дні) 25-30 28-40 35-50 Дані, представлені в Таблиці, свідчать, що культура Trichophyton mentagrophytes №391 є високовірулентною і в дозі 1млн/см 3 і вищій викликає захворювання тварин різного ступеню важкості Приклад 2. Дослід проводять на 20 кролях живою масою 2-3кг, не хворівших на три хофітію і не щеплених проти неї. 10 кролів щеплюють вакциною «Триходерм» в дозі 1см 3, яка містить 30-60млн/см 3 мікроконідій двічі, з інтервалом 10-14 діб, 10 інших не щеплюють. Через 25-30 діб проводять зараження 10 імунізованих і 10 контрольних (не щеплених ) кролів культурою Trichophyton mentagrophytes №391. Культур у го тують як вказано в прикладі 1 і вибирають концентрацію 2,5млн/см 3 мікроконідій. Зараження проводять нашкірно за загальноприйнятою методикою на ділянці спини за лопатками. Спостереження за кролями ведуть впродовж 20-25 діб. Через 25 діб у щеплених 8 із 10 тварин клінічні ознаки трихофітії були відсутні, або на місці зараження розвивалася специфічна алергічна реакція, що характеризується гіперемією, появою островків із кірочок засохлого ексудату, що самі відпадали на 15-25 добу. У контрольних, 8 із 10 тварин через 8-10 діб після зараження з’явилась виражена запальна ексудативна реакція, що супроводжувалась появою щільних масивних кірочок та ерозій. Клінічні прояви хвороби спостерігали більше 35 діб. Штам Trichophyton mentagrophytes №391 має високу ефективність при дослідженні імуногенності вакцин проти дерматомікозів тварин, до складу яких входить Trichophyton mentagrophytes. Використання штаму Trichophyton mentagrophytes №391 на підприємствах - виробниках вакцин проти дерматомікозів тварин та в науково - дослідних установах дасть змогу більш достовірно і об'єктивно оцінювати якість біопрепаратів цього типу, а також використовувати його в якості еталону при вивченні властивостей епізоотичних штамів, виділених від хворих тварин і навколишнього середовища.