Спосіб оптимізації діагностики виникнення та тяжкості перебігу протезних стоматитів за показниками метафазного аналізу

Спосіб оптимізації діагностики виникнення та тяжкості перебігу протезних стоматитів за показниками метафазного аналізу, що включає цитогенетичне дослідження лімфоцитів периферійної крові з виявленням ступеня стабільності геному, який відрізняється тим, що додатково проводять метафазний аналіз кількісних показників (асоціацій акроцентричних хромосом і хромосомних аберацій) імуногенетичного статусу пацієнта. (19) (21) u200704781 (22) 28.04.2007 (24) 25.10.2007 (72) ПАЛІЙЧУК ІВАН ВАСИЛЬОВИЧ, UA, КОВАЛЬЧУК ЛАРИСА ЄВГЕНІВНА, UA, ЧЕРНЮК НАТАЛІЯ ВОЛОДИМИРІВНА, UA (73) ПАЛІЙЧУК ІВАН ВАСИЛЬОВИЧ, UA, КОВАЛЬЧУК ЛАРИСА ЄВГЕНІВНА, UA, ЧЕРНЮК НАТАЛІЯ ВОЛОДИМИРІВНА, UA (56) 3 Дослідження проводять наступним чином. У пацієнтів забираємо 2,0мл крові периферійної крові, проводимо культивування лімфоцитів у поживному середовищі “РВmах" впродовж 72 годин за температури +37°С. Додавання мітогену (колхіцину), виготовлення препаратів, аналіз метафазних хромосом проводимо згідно методики, рекомендованої МОЗ України [Зерова-Любимова Т.Е., Горовенко Н.Г. Цитогенетичні методи дослідження хромосом людини (методичні рекомендації). - Київ: Укр. центр наукової інформації та патентно-ліцензійної роботи, 2003. - 23а]. Наявність асоціацій акроцентричних хромосом оцінюється за загальноприйнятими критеріями [Фролов А.К., Архипович Н.Г., Сохин А.А. Иммуноцитогенетика. М.: Мед., 1993. 240с.]. Враховується специфічність розміщення акроцентричних хромосом у метафазі: 1) відсутність накладання хромосом; 2) короткі плечі акроцентричних хромосом орієнтовані одне до одного і відстань між ними без урахування супутників (сателітів) не перевищує розміру довгого плеча хромосоми з групи G; 3) більша відстань приймалася за асоціацію, якщо акроцентрики були зв'язані видимими нитками або лежали на одній хромосомній осі. В дослідженні враховуємо наступні показники: загальна кількість асоціацій, відсоток клітин з асоціаціями, кількість хромосом в одній асоціації, середнє число асоціацій та асоційованих хромосом в одній клітині, асоціативний індекс (відношення асоційованих акроцентричних хромосом до загальної кількості хромосом даної групи), розподіл асоціацій за груповою належністю асоційованих хромосом. Отримані препарати досліджували методом світлової мікроскопії за допомогою оптикоелектронного комплексу Метаскан-2. Статистичну обробку результатів здійснюємо за допомогою комп'ютерної програми "Excel", що входить до складу пакету Microsoft office 2000. Практичне застосування способу ранньої діагностики протезних стоматитів було здійснено на кафедрі стоматології післядипломної освіти Івано-Франківського державного медичного університету у 57 хворих і 78 здорових людей віком від 30 до 69 років. Вивченням 4612 асоціацій в 5632 клітинах встановлено, що асоціативний індекс, кількість асоціацій та асоційованих хромосом в одній клітині переважали у здорових жінок, а у випадку протезного стоматиту достовірні статеві відмінності відсутні. Між вищеназваними показниками і в нормі, і при протезному стоматиті виявлено позитивні сильні (r=0,7; r>0,7) або середні кореляції (r=0,3; r>0,3). Всі асоціації за числом хромосом були розділені на сім груп. Найчастіше зустрічалися асоціації з двома і трьома хромосомами, найрідше - із семи хромосом. Частота лімфоцитів з різним числом асоціацій коливалася у обстежених пацієнтів хвилеподібно з двома піками: лімфоцити з двома (29,14+2,34%) і з чотирма (19,98+1,56%) асоційованими акроцентриками. Встановлено, що найбільшу здатність до утворення асоціацій мають хромосоми 21(22,11%), 13(21,62%) і 14(20,96%), 27177 4 найменшу - 15(18,04%) і 22(17,27%). У випадку протезного стоматиту, на відміну від контролю, хромосоми 4 і 22 за асоціативною здатністю займають проміжне положення. Середня частота асоціацій на клітину становила 0,98 проти 0,83 у контролі. При алергійному ураженні цей показник досягав у двох випадках 1,5. При цьому відмічено варіабельність кількості асоційованих груп акроцентриків в клітині, а також кількості акроцентричних хромосом в асоціації у випадку протезного стоматиту. Отримані характеристики частоти асоціацій узгоджувалися з результатами частоти хромосомних аберацій. Середньогрупова частота останніх була істотно вищою при протезному стоматиті (4,98+0,32) порівняно з нормою (2,84+0,21). Виявлено зміни спектра аберацій у випадку протезного стоматиту: збільшення кількості розривів у 1,27 рази, парних фрагментів у 1,35 рази. Маркером алергійного стоматиту можна вважати наявність пробілів у 5-й хромосомі, зростання індексу D/G (співвідношення асоційованих хромосом груп D і G) та середньої частоти асоціацій на клітину. Збільшення кількості асоціацій акроцентричних хромосом та хромосомних аберацій засвідчує наявність імунодефіциту, оскільки саме він перешкоджає елімінації клітин з порушеним спадковим апаратом. Корисна модель дозволяє з високим ступенем точності здійснювати доклінічну діагностику протезного стоматиту ще до виникнення симптомів захворювання.