Набір гібридом-продуцентів моноклональних антитіл до igg великої рогатої худоби, придатних для використання у імуноферментних тест-системах

Набір гібридом-продуцентів моноклональних антитіл до IgG великої рогатої худоби, придатних для використання у імуноферментних тест 2 3 27843 4 пробірці ємністю 50мл. Середовище майже 1. Saegerman С, De Waele L., Gilson D. et al. повністю видаляли, а клітинний осад старанно Evaluation of three serum i-ELISAs using monoclonal розбивали, постукуючи пробіркою по столу antibodies and protein G as peroxidase conjugate for ламінарного боксу. Потім у суспензію клітин the diagnosis of bovine brucellosis// Veterinary вносили 1мл 40% розчину ПЕГ з 5% ДМСО. Microbiology. - 2004. - Vol. 100, 1-2.-P. 91-105. Суміш клітин витримувати в середовищі з ПЕГ 2. Kittelberger R., Reichel M.P., Meynell R.M. et 5хв при кімнатній температурі і центрифугували al. Detection of antibodies against the core protein при 1000об/хв 2хв. Потім суспензію повільно p24 of the bovine leukaemia virus in cattle for розводили середовищем DMEM без сироватки до confirmatory serological testing// J. Virol. Meth. об’єму 50мл. До суспензії додавали 3мл ETC. 1999. - Vol. 77, 1. - P. 109 - 114. Клітини після зливання осаджували при 1000об/хв 3. Ніколаєнко І.В. Отримання та порівняльний 15хв. Надосад відсмоктували, а осад обережно аналіз гібридом - продуцентів моноклональних ресуспендували у повному ростовому середовищі антитіл, що диференціюють вакцинні та вірулентні DMEM з 15% ETC і 50мкг/мл гентаміцину. поліовіруси І, II та III типів: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Київ, 1999. - 18с. Концентрацію клітин доводили до (1-2)´106/мл і 4. Широбоков В.П., Ніколаєнко І.В., Копаниця вносили в 96-лункові планшети по 100мкл на Л.В. та ін. Панель моноклональних антитіл для лунку. внутрішньотипової диференціації поліовірусів II Приклад 2. Зберігання гібридом у рідкому типу// Мікробіол. журн. - 1997. - №6. - С.27-35. азоті. Для зберігання гібридом-продуцентів 5. Goding J. Monoclonal antibodies. Principles використовували кріосередовище, що містить 5% and practice. - San Diego: Acedemic press, 1996. ДМСО, 50% ETC та 45% DMEM. 492p. В одну ампулу вносили від 105 до 2´106 клітин, які суспендували в 1мл кріосередовища, шляхом зминання моношару з 1-2 лунок 24-лункового планшету. Потім ампули поміщали в контейнер із теплоізоляційного матеріалу і повільно охолоджували до мінус 70°С. На другу добу ампули переносили в резервуар з рідким азотом. Таким чином, кріоконсервацію проводили по двоетапній схемі. Приклад 3. Клонування гібридом Гібрид оми клонували методом ліміту вальних розведень [5]. Суть його полягає у поступовому розведенні клітинної суспензії, поки концентрація не досягне однієї або менше клітин на лунку. Клонування проводили на 96-лункових плашках, на які попередньо вносили фідер із перитонеальних макрофагів по 100мкл на лунку. Із суспензії гібридом відбирали об’єм від 1 до 10мкл, у залежності від вихідної концентрації клітин, і розводили до 3мл повним ростовим середовищем. Розносили по 100мкл на 1/4 частину плашки. Потім ще тричі повторювали розведення до заповнення всієї плашки. Таким чином, сумарний об’єм середовища в лунках становив 200мкл. У результаті отримували чотири різні концентрації клітин. У якомусь із розведень обов’язково росли ізольовані клони, які після тестування, пересаджували або знову клонували. Приклад 4. Одержання асцитичної рідини. Для накопичення значної кількості МКАТ гібридоми культивували у черевних порожнинах мишей. Для цього за 10-14 днів до ін’єкції клітин мишам вводили внутрішньочеревно по 0,5мл пристану. Мінералне масло слугувало сильним стимулятором асцитоутворення. Потім вводили від 2´106 до 107 гібридом в 1мл середовища. Через 58 днів у мишей починала накопичуватися рідина в черевній порожнині. її відбирали шляхом проколювання черевної стінки товстою голкою. З однієї миші за кілька разів вдавалося отримати від 5 до 10мл асцитичної рідини. Після центрифугування при 3000об/хв. протягом 5 хвилин асцит зберігали в замороженому стані. Літературні посилання: