Набір гібридом-продуцентів моноклональних антитіл до пероксидази хрону, придатних для використання у імуноферментних тест-системах

Набір гібридом-продуцентів моноклональних антитіл до пероксидази хрону, придатних для використання у імуноферментних тест-системах, 3 27841 4 ламінарного боксу. Потім у суспензію клітин (HRP)// J. Immunol. Meth. - 1988. - Vol. Ill, 1. - P. 95вносили 1мл 40% розчину ПЕГ з 5% ДМСО. 99. Суміш клітин витримувати в середовищі з ПЕГ 2. Dmitriev D.A., Massino Yu. S., Segal O.L. et al. 5хв при кімнатній температурі і центрифугували Analysis of the binding of bispecific monoclonal при 1000об/хв 2хв. Потім суспензію повільно antibodies with immobilized antigens (human IgG and розводили середовищем DMEM без сироватки до horseradish peroxidase) using a resonant mirror об’єму 50мл. До суспензії додавали 3мл ETC. biosensor// J. Immunol. Meth. - 2002. - Vol. 261. Клітини після зливання осаджували при 1000об/хв P.103-118. 15хв. Надосад відсмоктували, а осад обережно 3. Ніколаєнко І.В. Отримання та порівняльний ресуспендували у повному ростовому середовищі аналіз гібридом - продуцентів моноклональних DMEM з 15% ETC і 50мкг/мл гентаміцину. антитіл, що диференціюють вакцинні та вірулентні Концентрацію клітин доводили до (1-2)х106/мл і поліовіруси І, II та III типів: Автореф. дис. ... канд. вносили в 96-лункові планшети по 100мкл на мед. наук. - Київ, 1999. - 18с. лунку. 4. Широбоков В.П., Ніколаснко І.В., Копаниця Приклад 2. Зберігання гібридом у рідкому Л.В. та ін. Панель моноклональних антитіл для азоті. Для зберігання гібридом-продуцентів внутрішньотипової диференціації поліовірусів II використовували кріосередовище, що містить 5% типу// Мікробіол. журн. - 1997. - №6. - С.27-35. ДМСО, 50% ETC та 45% DMEM. 5. Goding J. Monoclonal antibodies. Principles В одну ампулу вносили від 105 до 2x106 клітин, and practice. - San Diego: Acedemic press, 1996. які суспендували в Імл кріосередовища, шляхом 492p. змивання моношару з 1-2 лунок 24-лункового планшету. Потім ампули помібідли в контейнер із теплоізоляційного матеріалу і повільно охолоджували до мінус 70°С. На другу добу ампули переносили в резервуар з рідким азотом. Таким чином, кріоконсервацію проводили по двоетапній схемі. Приклад 3. Клонування гібридом Гібрид оми клонували методом лімітувальних розведень [5]. Суть його полягає у поступовому розведенні клітинної суспензії, поки концентрація не досягне однієї або менше клітин на лунку. Клонування проводили на 96-лункових плашках, на які попередньо вносили фідер із перитонеальних макрофагів по 100мкл на лунку. Із суспензії гібридом відбирали об’єм від 1 до 10мкл, у залежності від вихідної концентрації клітин, і розводили до 3мл повним ростовим середовищем. Розносили по 100мкл на 1/4 частину плашки. Потім ще тричі повторювали розведення до заповнення всієї плашки. Таким чином, сумарний об’єм середовища в лунках становив 200мкл. У результаті отримували чотири різні концентрації клітин. У якомусь із розведень обов’язково росли ізольовані клони, які після тестування, пересаджували або знову клонували. Приклад 4. Одержання асцитичної рідини. Для накопичення значної кількості МКАТ гібридоми культивували у черевних порожнинах мишей. Для цього за 10-14 днів до ін’єкції клітин мишам вводили внутрішньочеревно по 0,5мл пристану. Мінералне масло слугувало сильним стимулятором асцитоутворення. Потім вводили від 2x106 до 107 гібридом в 1мл середовища. Через 58 днів у мишей починала накопичуватися рідина в черевній порожнині. її відбирали шляхом проколювання черевної стінки товстою голкою. З однієї миші за кілька разів вдавалося отримати від 5 до 10мл асцитичної рідини. Після центрифугування при 3000об/хв. протягом 5 хвилин асцит зберігали в замороженому стані. Літературні посилання: 1. Karawajew L., Behrsing О., Kaiser G. et al. Production and ELISA application of bispecific monoclonal antibodies against fluorescein isothiocyanate (FITC) and horseradishperoxidase