Спосіб визначення гранул клітин панета

Спосіб визначення гранул клітин Панета шляхом фіксації шматочків тонкої кишки, забарвлення парафінових зрізів та поміщення їх в бальзам, який відрізняється тим, що як фіксатор використовують нейтральний формалін, а як забарвник гематоксилін в суміші з алюмокалієвими галунами, біхроматом калія, сірчаною кислотою і розчин флоксину, причому забарвлені зрізи обробляють розчином фосфорно-вольфрамової кислоти і по кількості забарвлених в червоний колір гранул роблять висновок про функціональний стан клітин. (19) (21) 97105001 (22) 13.10.1997 (24) 16.10.2000 (33) UA (46) 16.10.2000, Бюл. № 5, 2000 р. (72) Єщенко Віталій Андрійович, Бовт Валентина Дем'янівна, Прохватилова Анжеліка Валеріївна, Плетень Сергій Володимирович, Драніцин Олег Васильович, Малько Максим Миколайович (73) ЗАПОРІЗЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ УНІВЕРСИТЕТ 28844 розчиненням в 100 мл дистильованої води 6 г сулеми і 1,25 г зневодненого ацетату натрія. Потім шматочки зневоджують і через ксилоли доводять до парафіну. Депарафіновані зрізи обробляють 0,5%-ним розчином йоду і 5%-ним розчином тіосульфіта по 5 хв. Потім зрізи 5 хв промивають дистильованою водою і забарвлюють 1 год у суміші, що містить 4 мл 0,1%-ний розчин азура А, 4 мл 0,1%-ний розчин еозина В, 1,7 мл 0,2 М розчину оцтової кислоти, 0,3 мл 0,2 М розчину ацетату натрія, 5 мл ацетона, 25 мл дистильованої води. На препаратах гранули клітин Панета забарвлені в червоний колір. Однак даний спосіб не дозволяє одержати добре відтворюючі результати, чітко виявляти і підраховувати кількість гранул в клітинах. Ознаками, спільними з прототипом є: - фіксація шматочків тонкої кишки; - забарвлення парафінових зрізів; - поміщення в бальзам. В основу винаходу поставлено задачу розробити спосіб забарвлення гранул клітин Панета, що дозволяє одержати стабільні і добре порівняльні результати, чітко виявляти і підраховувати кількість гранул для кількісної оцінки специфічної (секреторної) функції клітин. Відмінними від прототипу ознаками є: - фіксація в нейтральному формаліні; - окраска зрізів гематоксиліном в суміші з алюмокалієвими галунами, біхроматом калія, сірчаною кислотою і розчином флоксина; - обробка забарвлених зрізів розчином фосфорно-вольфрамової кислоти. Спосіб здійснюють таким чином: шматочки тонкої кишки фіксують у нейтральному формаліні і через спирти та ксилоли доводять до парафіна. Зрізи звільняють від парафіна і забарвлюють сумішшю гематоксиліна, алюмокалієвого галуну, біхромату калія, сірчаної кислоти, а потім розчином флоксина, забарвлені зрізи обробляють розчином фосфорно-вольфрамової кислоти і поміщають в бальзам. Приклад конкретного виконання 1. Шматочки тонкої кишки фіксують на протязі 1 доби в нейтральному формаліні. Для приготування останнього в посудину засипають карбонат кальція в такій кількості, щоб на дні утворився шар товщиною 1,5-2 см. Потім наливають формалін, декілька раз взбовтують і залишають стояти 2448 год. 2. Зневоджують шматочки проведенням через спирти зростаючої концентрації (70°-ний, 80°-ний, 90°-ний, 96°-ний, абсолютний - по 4 год.). 3. Витримують шматочки в дво х частинах ксилола (по 15 хв), суміші 50%-го ксилола і 50%-го парафіна (30 хв при 37°С), двох парафінах (по 1,5 год при 56°С) і заливають їх в парафін. 4. Парафінові зрізи товщиною в 5 мкм звільняють від парафіна витриманням в дво х ксилолах (по 3 хв), доводять до води проведенням їх через спирти понижуючої концентрації (абсолютний, 90°ний, 70°-ний - по 3 хв), промивають у водопровідній воді на протязі 5 хв. 5. Зрізи забарвлюють на протязі 5 хв сумішшю, що складається з 5 мл 1%-ного розчину гематоксиліна, 5 мл 1%-ного розчину алюмокалієвого галун у, 0,4 мл 5%-ного розчину біхромату калія, 0,2 мл 5%-ного розчину сірчаної кислоти. 6. Зрізи обробляють 1 хв 96°-ним спиртом. 7. Промивають їх 3 хв в водопровідній воді. 8. Забарвлюють зрізи 3 хв 0,5%-ним розчином флоксина. 9. Обробляють їх 2 хв 5%-ним розчином фосфорно-вольфрамової кислоти. 10. Промивають зрізи 5 хв водопроводною водою. 11. Зневоджують їх обробкою спиртами зростаючої концентрації (90°-ним, 96°-ним, абсолютним по 2 хв). 12. Витримують зрізи в двох частинах ксилола (по 2 хв). 13. Поміщають зрізи в бальзам. На пофарбованих препаратах в панетовських клітинах чітко виявляються червоні гранули, кількість яких в клітці можна підрахува ти. У контрольних (інтактних) пацюків в клітинах Пакета в середньому нараховується 51±4,6 гранул. Через 1 год після підшкірного введення пацюкам 1 мг/кг пілокарпіни, стимулюючого секреторну активність цих клітин, вміст в них гранул становить 39±2,5. Таким чином, запропонований спосіб може застосовуватись для оцінки специфічної (секреторної) функції панетовських клітин. Застосування як фіксатора нейтрального формаліна, а як забарвника гематоксиліна в суміші з алюмокалієвими галунами, біхроматом калія, сірчаною кислотою і розчином флоксина, дозволяє чітко виявляти гранули клітин Пакета, підраховувати їх кількість і по кількості гранул оцінювати функціональний стан клітин, що дозволяє зробити висновки про відповідність запропонованого рішення всім критеріям винаходу. __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 34 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 2