Спосіб визначення антилізоцимної активності бактерій е.coli

Спосіб визначення антилізоцимної активності Е.соlі, що включає готування поживного агару з додаванням до нього стерильного фізіологічного розчину з ферментом, який пригнічує ріст мікроорганізмів, нанесенням на нього дослідних добових агарових культур, вирощування мікроорганізмів 3 38452 фізіологічного розчину. До 0,5см 3 отриманого розведення додаємо 9,5см 3 стерильного фізіологічного розчину. Потім робимо такі розведення: до 0,1см 3 отриманого розведення додаємо 0,9см 3 стерильного фізіологічного розчину (1мкг/см 3), до 0,2см 3 отриманого розведення - 0,8см 3 стерильного фізіологічного розчину (2мкг/см 3), до 0,3см 3 отриманого розведення - 0,7см 3 стерильного фізіологічного розчину (3мкг/см 3), до 0,4см 3 отриманого розведення - 0,6см 3 стерильного фізіологічного розчину (4мкг/см 3), до 0,5см 3 отриманого розведення - 0,5см 3 стерильного фізіологічного розчину (5мкг/см 3), і так до (10мкг/см 3). Потім дане розведення заливаємо в чашки Петрі і добавляємо до нього 4см 3 1,5% поживний агар. Також готуємо контроль, в якому замість розведення „Лісобакт” додаємо 1см 3 стерильного фізіологічного розчину. Чашки підсушують у термостаті при 37°С протягом 10-15хв. Готуємо 1млрд. завис дослідних добових агарових культур в стерильному фізіологічного розчину і наносимо на поверхню приготованого середовища бактеріологічною петлею у вигляді бляшок. Всі чашки поміщаємо в термостат при температурі 37°С на 18-24год. Макроколонії, що виросли, обробляють парами хлороформу, для цього чашки перевертають, поклавши в кришку 4 шматочки паперу ватману розміром в 10см 3, який пропитаний 0,2-0,5см 3 хлороформу. Чашки тримають на протязі 30хв. Готують 1млрд. завис добової агарової культури Micrococcus luteus у фізіологічному розчині, вносять у чашки Петрі другим шаром, додаючи до індикаторної культури мікрококу 3мл 0,7%-ного поживного агару. Чашки розміщують в термостат на 24 години при 37°С. За рівень антилізоцимної активності досліджувальних культур приймають максимальне значення концентрації „Лісобакт" (лізоциму хлориду) в поживному середовищі, при якому ще спостерігається ріст Micrococcus luteus. Порівняльні результати використання із 1,5% поживним агаром „Лісобакт” (реєстраційний номер:UA/2790/01/01 від 14.03.2005), яєчного лізоциму та контролю (1,5% поживний агар із додаванням фізіологічного розчину) наведено у таблиці. В якості тест-культури використовували Micrococcus luteus. Дослід із визначення антилізоцимної активності кожного штаму Е. соlі проводили в 5-ти повтореннях. Результати всіх дослідів співпадали. При обробці статистичних даних одержали достовірний результат (р