Спосіб визначення антимікробної активності грунту

Спосіб визначення антимікробної активності ґрунту, який включає розлив у чашки Петрі розігрітих агаризованих поживних середовищ для грибів та бактерій, їх о холодження до затвердіння агару, який відрізняється тим, що на поверхню мікробіологічного посіву тест-культур грибів та бактерій накладають кружки фільтрувального паперу з вологим ґрунтом, витримують їх у термостаті впродовж 5 діб, після чого візуально реєструють наявність прозорої зони відсутності росту тест-к ультур мікроорганізмів, а за наявності вимірюють її величину в міліметрах. (19) (21) u200706367 (22) 07.06.2007 (24) 10.10.2007 (72) ШЕРСТОБОЄВА ОЛЕНА ВОЛОДИМИРІВН А, UA, ІУТИНСЬКА ГАЛИН А ОЛЕКСАНДРІВН А, U A, АНТИПЧУК АДЕЛЬ ФЕДОРІВН А, U A, ЧАЙКОВСЬКА ВІКТОРІЯ ВІКТОРІВН А, U A, ЧАБАНЮК ЯРОСЛАВ ВАСИЛЬОВИЧ, UA (73) ІНСТИТУТ АГРОЕКОЛОГІЇ УКРАЇНСЬКОЇ АКАДЕМІЇ АГРАРНИХ Н АУК, U A (56) 3 26942 Завданням корисної моделі, що заявляється, є розробка способу визначення антибактеріальної, антигрибної та загальної антимікробної активності ґрунту як показника однієї зі сторін його біологічної активності для оцінки екологічного стану ґрунтового покриву в екотопі. Технічним результатом корисної моделі, що заявляється, є поповнення спектру показників біологічної активності ґрунту оцінкою антимікробної активності ґрунту для моніторингових досліджень природних екосистем і екологічної оцінки агротехнологій в агроекосистемах. Суть корисної моделі в подальшому. 1. У окремі чашки Петрі наливаються розплавлені стерильні агаризовані середовища: Чапека для грибів та м'ясо-пептоний агар для бактерій [Большой практикум по микробиологии / под ред. Г.Л.Селибера. - М.: Вышая школа, 1962. 492с.]. 2. Після затвердіння поверхня середовища засівається тест-культурами фітопатогенних грибів на чашки з поживним середовищем для грибів і тест-культурами фітопатогенних бактерій на чашки з поживним середовищем для бактерій. 3. Ґрунт, що вивчається, зволожується стерильною водопровідною водою до повної вологоємності на ситечках. 4. На поверхню засіяних тест-культурами середовищ накладаються стерильні кружки фільтрувального паперу діаметром 2см. На папір в усі чашки розміщується ґрунт, зволожений до повної вологоємності, і чашки ставляться в термостат. 5. З появою росту тест-культур реєструється наявність прозорої зони відсутності росту тесткультур фітопатогенних грибів і бактерій, а за наявності і її величини у міліметрах. Приклад. Визначення антимікробної активності ґрунту агроекосистеми пшениці озимої сорту Миронівська 67 за різних систем удобрення у багаторічному досліді на базі стаціонару Миронівського інституту пшениць ім. В.М.Ремесла Української академії аграрних наук. Зразки ґрунту ризосфери (шар ґрунту до 3мм від поверхні коренів) відібрали з кореневої зони пшениці озимої у фаз у кущення, яка вирощувалася з застосуванням трьох систем удобрення: мінеральної (N60P4oK 40, кг/га д.р.), біологічної (біопрепарати на основі антагоністів фітопатогенних мікроорганізмів, азотофіксувальних та фосформобілізувальних бактерій) і органічної (30т/га гною). У 3 чашки Петрі налили по 10мл розплавленого стерильного агарізованого середовища Чапека для грибів, а в інші 3 чашки Петрі налили по 10мл розплавленого стерильного м'ясо-пептонного агару для бактерій [Большой практикум по микробиологии / под ред. Г.Л.Селибера. - М.: Высшая школа, 1962.-492с.]. Поверхню середовищ, після їх охолодження та затвердіння, засіяли суцільними газонами тесткультур, відповідно, фітопатогенних грибів на чашки з середовищем для грибів і фітопатогенних бактерій на чашки з середовищем для бактерій. 4 Використовували тест-культури збудників розповсюджених хвороб сільськогосподарських рослин: Bipolaris sorokiniana Shoem., Trichotecium roseum Schlec., Fusarium avenaceum Sacc. (фітопатогенні мікроміцети) і Erwinia carotovora Holl., Agrobacterium tumefaciens Conn. (фітопатогенні бактерії). На поверхню засіяних тест-культурами середовищ помістили стерильні кружки фільтрувального паперу діаметром 2см. Ґрунт, що вивчається, зволожили стерильною водопровідною водою до повної вологоємності на ситечках. Наважки вологого ґрунту по 0,5г помістили на кружки паперу в кожну чашк у Нетрі і поставили у термостат при 28°С на 5 діб. За цей час з ґрунту у папір і далі в агар дифундують антибіотичні речовини та нарощується біомаса тест-культур на поверхні середовищ. Наявність антимікробної активності ґрунту визначалась візуально: навколо паперу утворювалась прозора зона відсутності росту тесткультур в зоні дифузії з ґрунту антибіотичних речовин. Через 5 діб за допомогою циркуля та лінійки зі шкалою точності до десятих міліметра вимірювалась її величина. Результати визначення антимікробної активності ґрунту. Ґр унт ризосфери пшениці за мінеральної системи удобрення слабо стимулював розвиток тест-культур, адже найбільша біомаса їх утворювалася в зоні дифузії речовин з ґрунту близько 2мм навколо паперу, тобто зона інгібування їх розвитку відсутня і означається нулем (таблиця 1). За біологічної системи удобрення ґрунт ризосфери пшениці набуває антибіотичних властивостей і навколо паперу з ґрунтом утворюється прозора зона відсутності росту тесткультур фі топатогенних грибів 1,25-3,17мм. Розвиток популяцій фітопатогенних бактерій не пригнічується (0мм). За органічної системи удобрення гноєм утворюється зона відсутності росту грибів 1,142,12мм та росту бактерій 0,69-1,04мм. Отже, застосовуючи спосіб визначення антибактеріальної активності ґрунту, встановили, що: за мінеральної системи удобрення антимікробна дія ґрунтового розчину відсутня; за органічної системи удобрення спостерігається загальна антимікробна дія ґрунту: 7,50мм антифунгальна і 1,73 мм антибактеріальна; за біологічної системи удобрення, спостерігається лише антифунгальна дія ґрунту на рівні 7,90мм. Отже, у результаті використання способу, що заявляємо, була надана інтегральна оцінка впливу екологічного антропогенного чинника (у цьому прикладі різних систем удобрення) на антимікробний статус ґр унту у посіві пшениці озимої. Зона відсутності росту колонії фітопатогенних м 5 26942 6 Системи удобрення рослин без добрив мінеральна органічна Анти фунгальна (антигрибна) активність ґрунту, мм Bipolaris sorokiniana Shoem. 0 0 2,12 Fusarium avenaceum Sacc. 0 0 1,89 Trichotecium roseum Schlec. 0 0 1,14 Антибактеріальна активність ґрунту, мм Erwinia carotovora Holl. 0 0 1,04 Agrobacterium tumefaciens Conn. 0 0 0,69 Вид фітопатогена біологічна 3,17 1,25 1,77 0 0