Спосіб моніторингу місцевого гуморального імунітету кон’юнктиви у тварин

Спосіб моніторингу місцевого гуморального імунітету кон'юнктиви у тварин шляхом визначення вмісту специфічних антитіл в кон'юнктивальному змиві, який відрізняється тим, що кон'юнктива обробляється низькоінтенсивним лазерним промінням. (19) (21) 2000074189 (22) 14.07.2000 (24) 15.11.2001 (33) UA (46) 15.11.2001, Бюл. № 10, 2001 р. (72) Сілін Дмитро Самійлович (73) СІЛІН ДМИТРО САМІЙЛОВИЧ, UA 42957 чень, відповідних референтним зразкам з відомою концентрацією (Mouse immunoglobulin reference serum, Bethyl laboratories, inc., USA). Після інкубації та вимивання було внесено вторинну, кон'юговану з лужною фосфотазою, специфічну IgA миши, сироватку (Goat anti-mouse IgA-alpha chain specific, alkaline phosphatase conjugated, Bethyl laboratories, inc., USA). Після інкубації і вимивання, до ячеєк було додано субстрат лужної фосфатази (ImmunoPure PNPP Tablets, Pierce, USA), та результати отримувалися за допомогою автоматичного пристрою (MRX microplate reader, DYNEX technologies) для кількісного визначення вихідного продукту реакції, каталізованої лужною фосфотазою. Цей спосіб є найбільш близьким за сукупністю ознак до винаходу, який пропонується і, таким чином, може бути прототипом. Але, при визначенні рівня специфічних антитіл в секреті кон'юнктиви стандартними серологічними методами, до загального вмісту відповідних антитіл потрапляє й велика кількість сирова точних антитіл шляхом ексудативного транзиту, причому їх кількість може бути набагато більшою за власну секреторну та залежить, головним чином, від стану слизової оболонки і судинної стінки. Таким чином, виникає технічна проблема, як розрізнити власні секреторні антитіла кон'юнктиви та транзиторні антитіла з сироватки крові. Ця проблема може бути вирішена за рахунок різкого обмеження транзиту сироваточних антитіл після обробки кон'юнктиви низькоінтенсивним лазерним промінням. До того ж, використання лімітації транзиту антитіл запобігає додатковим вимірюванням останнього, що вигідно відрізняє цей спосіб від прототипу. В основу винаходу поставлено задачу розробки способу моніторингу власної специфічної гумо ральної активності кон'юнктиви під час специфічного імуногенезу. Спосіб базується на використанні протиексудативної дії лазерного проміння для обмеження транзиту антитіл з сироватки крові. Для досягнення мети, за добу перед проведенням визначення вмісту специфічних секреторних антитіл кон'юнктиви, остання обробляється низькоінтенсивним лазерним промінням, наприклад, за допомогою діодного лазерного випромінювача типу «FOCUX 90». Потужність проміння в межах 0,20,5 мВт та тривалість сеансу в межах 2-10 хвилин залежать від величини ока та вираженосгі ознак кон'юнктивальної ексудації. Власно вимірювання проводиться за стандартною методикою з використанням серологічних реакцій наприклад, ELISAтесту. Дослідження проводилися на орально імунізованих вбитою кутьтурою Мycoplasma hyopneumoniae мишах лінії BALB/C Порівняння вмісту імуноглобулінів класів IgA та IgG в кон'юнктиві та сироватці крові двох груп мишей, одна з яких була оброблена лазером а друга була інтактною, доводить значний транзит сироваточних антитіл в контролі та суттєве обмеження його при попередній обробці лазерним промінням. Причому, математичний аналіз співвідношень різних класів імуноглобулінів в обох групах доводить, що зменшення вмісту антитіл після обробки кон'юнктиви лазером виникає саме за рахунок обмеження ексудативного транзиту, а не за рахунок деструкції антитіл. Таким чином, доводиться можливість визначення специфічного імунного статусу власне кон'юнктиви, а відповідно, й ефективного моніторингу секреторної активності кон'юнктиви за допомогою пропонованого способу. __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 2