Спосіб визначення індивідуальної хіміочутливості пухлин

Спосіб визначення індивідуальної хімючутливості пухлин, що включає у собі використання лункових краплинних культур, культивування пухлинної тканини та стимулятора росту - ембріонального екстракту, який відрізняється тим, що використовують післяопераційний матеріал і матеріали трепанбюпсм, плазму хворого, пухлинний екстракт як стимулятор росту, в культуру вносять мікрокраплину розчину хіміопрепарату в концентрації, що відповідає ваговому дозуванню Винахід відноситься до медицини, а саме до клінічної онкологи, і може використовуватися для підвищення ефективності хіміотерапії Аналогами винаходу є різні модифікації дискового методу визначення антибютикочутливості мікроорганізмів, що широко використовуються в мікробіологи (Новые ускоренные методы индикации патогенных микробов Под ред Э Н Шляхова - Кишинев Штиинца - 1984 - С 7-10) Сутність всіх модифікацій зводиться до того, що на щільне агарове середовище висівається культура патогенних мікроорганізмів, встановлюються диски, які мають однакову концентрацію різних антибіотиків Результати оцінюються за розміром зон пригнічення росту мікроорганізмів Недоліками аналогів є складність та тривалість вирощування пухлинних клітин на щільних середовищах, змінення пухлинних властивостей клітин після трипсінізацп, необхідність значної КІ Недоліком прототипу є лише непряма оцінка хімючутливості пухлинної тканини через и ферментативну активність, яка, як відомо, в умовах культивування значно відрізняється від активності в организмі, при цьому пухлинна тканина безпосередньо не взаємодіє з хіміопрепаратом, крім того для отримання клітинної суспензії пухлинна тканина підлягає трипсінізацп, яка значно змінює властивості тканини В основу винаходу поставлена задача створення способу визначення індивідуальної пухлинної чутливості до хіміопрепаратів, в якому завдяки крапельно-плазмового культивування з використанням плазми та сироватки хворого, споживання пухлинного екстракту в поєднанні з введенням мікрокраплини розчину хіміопрепарату (в узгоді з ваговими дозіровками) встановлюється зростання пухлинної тканини в середовищі, що містить хіміопрепарат, і за рахунок цього під час культивування визначається хімючутливість пухлинної тканини у даного хворого до всього спектру хіміопрепаратів Поставлена задача вирішується тим, що у способі визначення індивідуальної хімючутливості пухлин, який містить у собі використання краплинно-плазмової методики культивування тканин, згідно винаходу використовують плазма хворого, пухлинний екстракт, мікрокраплини хіміопрепарату в концентрації, що відповідає ваговій дозировці Запропонований спосіб опробовано в Донецькому областному протипухлинному центрі, як культуральний матеріал використовували післяопераційні препарати хірургічного відділення № 2 Дослідження проведено на пухлинах наступної гістологічної будови аденокарциноми, внутрішньопротоковий рак, меланома ЛЬКОСТІ поживних речовин Прототипом винаходу є визначення ферментативної активності мікробів за допомогою ферментативного індикатору - КФ в пластмасових лунках (Трансплацентарный бластомогенез и органные культуры Шабад М Л , Колесниченко Т С , Сорокина Ю Д - М Медицина - 1975 - С 108110), для чого використовують пластмасові планшети з лунками для серологічних реакцій 3 цією метою на дні кожної лунки роблять штрих КФ і вносять по одній краплині пухлинної культури (клітинна суспензія) Лунки накривають прозорою полімерною плівкою з клейкою поверхнею Культивують 15-30 годин при Т = 37°С У подальшому різні автори використовували цю методику для виявлення ферментативної активності пухлин з метою виявлення хімючутливості до різних хіміопрепаратів ю 00 (О со 43678 Культуру готують за наступною методикою на попередньо знежирене ефіром стерильне скло з лункою наносять краплину фізіологічного розчину У центр капілярною піпеткою вносять краплину плазми хворого, додають краплину пухлинного екстракту (або іншого стимулятору росту пухлини, наприклад, ембріональний екстракт чи фолієва кислота) і розташовують суміш в області 15 мм так, щоб плазма згорнулася Поверх плазмового згустку вносять шматочок пухлинної тканини не більше 1 мм в діаметрі Додають рідке поживне середовище, що має такий склад 50% - розчин Тіроде, 40% - сироватка хворого і 10% -пухлинний екстракт Після формування культури в групи, що досліджуються, вносять мікрокраплину розчину хіміопрепарату у ваговій дозировці, розрахованій на шматочок пухлинної тканини (Так, наприклад, концентрація вшкрестину в розчинах складає близько 10%) В контрольні групи культур вносять мікрокраплину фізіологічного розчину Скляною паличкою, змоченою в стерильній вазеліновій олії, по краям лунки предметного скла роблять олійне коло Акуратно зверху на культуру розміщують велику краплину стерильної вазелінової олії Культивування проводять при Т = 38°С протягом 36-48 годин Результати оцінюють в порівнянні з контрольними групами, крітеріями оцінки є максимальна ширина зони росту, середня ширина зони росту ( вимірювання робиться не менше чим у 8 місцях), рядність клітин, полярність клітин, ВІДПОВІДНІСТЬ ГІСТОЛОГІЧНІЙ структурі материнської пухлини Запропонованим способом можливо визначення індивідуальної пухлинної чутливості до хіміотерапії за допомогою використання пухлинного матеріалу, який отримано під час трепанбюпсм, проте як стимулятор росту в даному випадку вико ристовується ембріональний екстракт, який готується за класичною методикою Приклад конкретного виконання Хвора С , 1939 року народження, прооперована 11 02 2000р в ДОПЦ на рак молочної залози ТЗ N1 Мо Перед операцією у хворої було взято кров, з якої була виділена плазма, що використовувалася під час визначення хімючутливості Після операції було взято пухлинну тканину розміром 1 см 3 , пухлину було розрізано на маленькі шматочки розміром 1 мм Шматочки, що залишилися, були змішані з кварцевим піском і розтерті в ступці до отримання гомогенної маси До цієї маси було додано 10 мл фізіологічного розчину, вся отримана маса ретельно перемішана та профільтрована через 4 шари марлі Таким чином було отримано пухлинний екстракт Для культивування шматочки пухлинної тканини були відібрані за допомогою трепанбюпсійної голки в 10 різних ділянках пухлини, тому що пухлинні клітини можуть мати різні клони, які відрізняються за своєю хімючутливістю Далі готувалися краплино-плазмові культури, до яких додавали пухлинний екстракт та приготовлені для культивування шматочки пухлини Культури вирощувалися у термостаті З особливостей слід відзначити, що в окрему групу культур вносили мікрокраплину розчину хіміопрепарату у ваговій дозировці, розрахованій на шматочок пухлинної тканини Оцінка результатів проводилася так, як вище згадано, за допомогою темнопольної мікроскопи В наведеному прикладі середня ширина зони росту складала у контрольній групі 8-12 клітин, в досліджених групах - від 5 до 12 Запропонований спосіб визначення індивідуальної хімючутливості пухлин може використовуватися в КЛІНІЧНІЙ онкології з метою підвищення ефективності наявного лікування Тираж 50 екз Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м Ужгород, вул Гагаріна, 101 (03122) 3 - 7 2 - 8 9 (03122) 2 - 5 7 - 0 3