Спосіб визначення щільності ймовірності розподілу еритроцитів за індексом сферичності

Спосіб визначення ЩІЛЬНОСТІ ймовірності розподілу еритроцитів людини за індексом сферично сті шляхом дослідження оптичних характеристик клггинної суспензії, який відрізняється тим, що еритроцити вміщують в низку розчинів від ІЗОТОНІЧНОГО з поступовим зменшенням ТОНІЧНОСТІ і визначають відсоток негемолізованих клітин в кожному з розчинів за інтенсивністю розсіяного клітинною суспензією свггла з подальшим розрахунком ЩІЛЬНОСТІ ймовірності розподілу еритроцитів за індексом сферичності на підставі теоретично визначених закономірностей ГІПОТОНІЧНОГО гемолізу еритроцитів в розчинах не проникаючої в клітини речовини Винахід належить до клггинної біологи і може бути використаний для оцінки стану популяції еритроцитів людини Відомим Є спосіб якісної оцінки концентрації дискоідних клггин в суспензії еритроцитів [1] Згідно з цим способом гемоліз еритроцитів та зміну їх форми визначають спектрофотометрично Суспензію еритроцитів вміщують в кювету спектрофотометра та визначають її оптичну густину на довжині хвилі 720нм Сигнал оптичного пропускання є обернено пропорційним КІЛЬКОСТІ інтактних клітин в суспензії та флуктуює відносно середнього значення Оптична густина суспензії в цьому випадку визначається, головним чином, малокутовим розсіюванням свггла Амплггуда флуктуацій, на думку авторів, є максимальною для дискоідних клітин, в той час як сферичні клггини дають нульове значення цього параметру Таким чином, амплггуда шуму є приблизно пропорційною концентрації дискоідних клітин в суспензії Ця задача вирішується тим, що в способі визначення ЩІЛЬНОСТІ ймовірності розподілу еритроцитів за індексом сферичності шляхом дослідження оптичних характеристик клггинної суспензії, еритроцити вміщують в низку розчинів від ІЗОТОНІЧНОГО з поступовим зменшенням ТОНІЧНОСТІ і визначають відсоток негемолізованих клітин в кожному з розчинів за інтенсивністю розсіяного клітинною суспензією свггла з подальшим розрахунком ЩІЛЬНОСТІ ймовірності розподілу еритроцитів за індексом сферичності на підставі теоретично визначених закономірностей ГІПОТОНІЧНОГО гемолізу еритроцитів в розчинах не проникаючої в клггини речовини [2] Основним недоліком цього способу є неможливість КІЛЬКІСНОГО визначення розподілу клггин за індексом сферичності (ДІСКОІДНОСТІ) і дає лише якісну оцінку концентрації дискоідних клітин в суспензії Задачею винаходу є створення такого способу визначення ЩІЛЬНОСТІ ймовірності розподілу клітин за індексом сферичності, котрий би, за рахунок зміни загального підходу до визначення цього параметру, забезпечував би кількісну оцінку стану суспензії за цим параметром Використання методу малокутового розсіювання свггла для вимірювання відсотку негемолізованих клітин в суспензії і розрахунок ЩІЛЬНОСТІ ймовірності розподілу еритроцитів за індексом сферичності на підставі теоретично визначених закономірностей ГІПОТОНІЧНОГО гемолізу в розчинах не проникаючої в клітини речовини забезпечують точний КІЛЬКІСНИЙ аналіз популяції еритроцитів за вказаним параметром, тоді як в прототипі визначення цього параметру здійснюється тільки на якісному рівні, виходячи з того припущення, що амплггуда флуктуацій оптичної густини є приблизно пропорційною концентрації дискоідних клітин в суспензії, що є недостатньо обгрунтованим Крім того, вимірювання безпосередньо інтенсивності розсіяного свггла забезпечує більшу точність, оскільки зміна оптичної густини суспензії обумовлюється саме о 47910 розсіюванням свггла Приклад здійснення способу Змл 0,15М водного розчину хлористого натрію (NaCI) (ІЗОТОНІЧНИЙ розчин) наливають в оптично прозору кювету, яку вміщують в камеру приладу для вимірювання інтенсивності малокутового розсіювання свггла [3] 5мкл донорської крові додають у розчин NaCI і реєструють величину сигналу, що є пропорційним інтенсивності розсіяного клітинною суспензією свггла з довжиною хвилі 1мкм під кутом 9 до напрямку падаючого пучка Процедуру повторюють для розчинів NaCI з концентраціями 0,137, 0,12, 0,1, 0,085, 0,068, 0,05Моль/л За одержаними даними визначаємо залежність відсотку негемолізованих клітин в суспензії від ТОНІЧНОСТІ позаклітинного розчину (так звана осмотична крихкість) (фіг 1) Шукану ЩІЛЬНІСТЬ ймовірності розподілу еритроцитів за індексом сферичності (фіг 2) розраховуємо за рівняннями, що описують закономірно сті ГІПОТОНІЧНОГО гемолізу еритроцитів в розчинах непроникаючої речовини [2] Джерела інформації 1 Дегтярев А В , Руденко С В , Бондаренко Т П Устройство для определения оптической плотности биологических суспензий А С 1573429, 1990, Бюл №23 2 Гордієнко Є О , Гордієнко О І , Коваленко І Ф , Паніна Ю Є , Алексеев О О Фізико-математичний аналіз та експериментальне визначення ЩІЛЬНОСТІ розподілу еритроцитів донорської і пуповинної крові людини за індексом сферичності // Вісник Харк ун-ту - 2000 - №488 - Біофізичний вісник, Вип 6 С 75-78 3 Гордиенко О И , Панина Ю Е , Коваленко И Ф Определение коеффициентов проницаемости мембран эритроцитов для криопротектора // Вісник Харк ун-ту -1998 -№422 -С 59-63 1,' 0,25 0,2 ФІГІ Фіг.2 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71