Спосіб консервування еритроцитів

Спосіб консервування еритроцитів, який включає додавання до клітин розчину кріопротектора поліетиленоксиду молекулярної маси 1500 з наступним заморожуванням до -196°С, який відрізняється тим, що кріопротектор додають при температурі 0-4°С дозовано по краплях з інтервалом 4-6 хв протягом 40-60 хв, а виготовляють його на фізіологічному розчині хлористого натрію. (19) (21) 98063123 (22) 16.06.1998 (24) 15.12.2000 (33) UA (46) 15.12.2000, Бюл. № 7, 2000 р. (72) Бабійчук Любов Олександрівна, Грищенко Валентин Іванович, Суміда Саджіо, JP, Бондаренко Валерій Антонович, Землянських Ніна Григорівна, Бондаренко Тетяна Петрівна 30888 При такому додаванні кріопротектора до еритроцитів забезпечується поступова адаптація клітин до зростаючих концентрацій кріопротектора, а підтримка температури 0-4°С сприяє підвищенню в'язкості мембрани і значно зменшує ступінь хімічної взаємодії кріопротектора і компонентів мембрани. Часовий інтервал 4-6 хв між додаваннями кріопротектора достатній для структурно-осмотичної адаптації клітин до невеликих доз кріопротектора. Виготовлення кріопротектора на фізіологічному розчині NaCl забезпечує іонний баланс між внутрішнім і зовнішнім середовищем клітин. Спосіб дозволяє підвищити схоронність клітин на 10% після розморожування і на 40% після перенесення в ізотонічні умови. Спосіб здійснюють таким чином. До еритроцитів донорської крові по краплях при 0-4°С з інтервалом 4-6 хв додають однаковими порціями 30% розчин кріопротектора ПЕО1500, приготований на фізіологічному розчині NaCl, до досягнення його концентрації у суспензії 15%. Одержану завись переносять у контейнер і заморожують до -196°С, занурюючи у рідкий азот. Відігрівання здійснюють на водяній бані при 4244°С. Приклад 1. До 125 мл еритроцитів при 4°С по краплях при перемішуванні додавали через кожні 6 хв 30% розчин ПЕО-1500 (125 мл). Одержану завись переносили до контейнера та заморожували до -196°С зануренням у рідкий азот. Відігрівання проводили на водяній бані при 42°С. Результати наведені в табл. 1. З табл. 1 видно, що після розморожування схоронність клітин складала 98,5%, а після перенесення у фіз. розчин і плазму 90,6% і 92,8%, відповідно. Приклад 2. 30% ПЕО-1500, приготований на фізіологічному розчині NaCl, додавали до еритроцитів при 4°С по краплях до кінцевої концентрації 15%. Інтервали між додаваннями 3, 4, 6 і 8 хв. Одержані зависі переносили до контейнерів і заморожували до -196°С, занурюючи у рідкий азот. Відігрівання проводили на водяній бані при 42°С. Результати наведені в табл. 2. З табл. 2 видно, що при додаванні ПЕО-1500 до еритроцитів з інтервалом 4-6 хв, досягається найвища схоронність клітин. Приклад 3. До еритроцитів при різних температурах (22°С, 6°С, 4°С, 0°С) по краплях додавали 30% розчин ПЕО-1500, приготований на фіз. розчині NaCl, до кінцевої концентрації 15% через кожні 6 хв. Отримані зависі переносили до контейнерів і заморожували до -196°С, занурюючи у рідкий азот. Відігрівали на водяній бані при 42°С. Результати наведені в табл. 3. З табл. 3 видно, що найвищий ступінь збереження еритроцитів досягається у випадку додавання кріопротектора при 0-4°С. Приклад 4. До 125 мм еритроцитів при 4°С одночасно додавали 125 мм 30%-ного ПЕО-1500. Отриману завись переносили до контейнера і заморожували до -196°С зануренням у рідкий азот. Відігрівали на водяній бані при 42°С. Результати наведені в табл. 4. З табл. 4 видно, що одночасне додавання розчину кріопротектора не забезпечує високого збереження еритроцитів. Джерела інформації 1. Справочник по переливанию крови и кровезаменителей / Под ред. О.К. Гаврилова. - М.: Медицина, 1982. - С. 50-51. 2. Авт. свід. СРСР № 560613, А61K35/18, A01N1/02, 1977. Таблиця 1 Гемоліз еритроцитів після розморожування і перенесення в ізотонічні умови (n=7) після розморожування 1,5±0,17 Гемоліз, % після перенесення у фіз. розчин 9,4±0,8 після перенесення у плазму 7,2±0,75 Таблиця 2 Гемоліз еритроцитів у залежності від інтервалу, з яким розчин ПЕО-1500 додавали до суспензії (n=7) Інтервал, хв 3 4 6 8 після розморожування 3,3±0,28 1,8±0,16 1,5±0,17 4,2±0,5 Гемоліз, % після перенесення у фіз. розчин 19,8±2,04 10,3±1,15 9,4±0,8 20,2±2,5 2 після перенесення у плазму 17,6±1,85 8,5±1,1 7,2±0,75 18,4±1,9 30888 Таблиця 3 Гемоліз еритроцитів у залежності від температури, при якій до них додавався розчин ПЕО-1500 (n=7) Температура, °С 22 (кімнатна) 6 4 0 після розмороження Гемоліз, % після перенесення у фіз. розчин після перенесення у плазму 15±1,4 49±5,2 45±4,6 4,7±0,53 1,8±0,16 1,6±0,17 16,2±1,8 10,3±1,15 9,2±1,1 14,3±1,6 8,5±1,1 8,8±0,95 Таблиця 4 Гемоліз еритроцитів при одночасному додаванні розчину ПЕО-1500 (n=7) після розморожування 5,6±0,62 Гемоліз, % після перенесення у фіз. розчин 30,0±2,8 після перенесення у плазму 25,6±2,1 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 35 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3