Спосіб визначення пневмоцист у біологічних субстратах

Спосіб визначення пневмоцист в біологічних субстратах шляхом фарбування пневмоцист та мікроскопи препаратів, який відрізняється тим, що проводять подвійне фарбування препаратів барвником азур-еозином підвищеної концентрації, потім барвниками толуїдиновим синім або метиленовим синім при температурі 37°С Винахід належить до області медицини і стосується лабораторної діагностики пневмоцистозу і пневмоцистної пневмонії у ВІЛ-негативних і ВІЛпозитивних хворих з патологією дихальної системи Існує багато методів для визначення пневмоцист в досліджуваному матеріалі Барвники, які використовують для цього діляться на 2 групи Барвники першої групи (азур-еозин, гематоксилін) виявляють тільки внутрішньоцистні тільця [1] Барвники другої групи (толуїдиновий синій, метиленовий синій, метенамш срібла) визначають лише оболонку пневмоцист [2, 3] Використання цих методів не дає можливості одночасного визначення внутрішньої структури клітини і оболонки, що знижує ефективність досліджень Існує також метод подвійного забарвлення [4], застосування якого дає можливість визначати як оболонку пневмоцист, так і внутрішньоцистні тільця Недолік полягає в застосуванні реактивів, які вміщують дорогоцінні метали метенамш срібла, хлорне золото двійного фарбування пневмоцист в бюпробах азур-еозином підвищеної концентрації за температури 37°С, а потім толуїдіновим синім або метиленовим синім Приклад 1 здійснення винаходу На предметному знежиреному склі готують тонкі мазки з мокротиння, осаду лаважної рідини, відбитки зі зрізу тканини (легеневої або іншої) Мазки висушують на повітрі і фіксують будь-яким методом (метиловим спиртом, 10%-вим формаліном, сумішшю рівних частин етилового спирту і диетилового ефіру) На зафіксований сухий мазок наносять фарбу азур-еозин в концентрації 10 крапель рідкої комерційної фарби на 1мл фосфатного буферу при рН 7,0 Розчин готують ex tempore Через 10 хвилин фарбу змивають водопровідною водою Після висушування на мазок наносять 1%-вий розчин толуїдінового синього або метиленового синього (1г сухої фарби розчиняють у 5 - 10г 96°-ного етанолу, після чого додають до 100г дистильовану воду Розчин на 1 добу вміщують у термостат за температури 37°С для повного розчинення фарби Готовий розчин зберігають протягом 1 року в темному посуді за кімнатної температури) Мазок на 5 - 7 хвилин вміщують у термостат за температури 37°С Після ЧОГО фарбу змивають проточною водою Мазок висушують і досліджують в імерсійній системі світлового мікроскопу Метод [5] полягає в використанні барвників обох груп азур-еозину та толуїдінового синього або метиленового синього Метод достатньо ефективний Він ДОЗВОЛЯЄ ВИЯВИТИ ВСЮ структуру пне вмоцист, прискорює лабораторні дослідження, не вимагає застосування дефіцитних і дорогих реактивів В основу винаходу поставлене завдання спорощення і прискорення лабораторної діагностики і, за рахунок цього, удосконалити та підвищити ефективність способу визначення пневмоцист в біологічних субстратах Поставлене завдання вирішують шляхом по У цистних форм пневмоцист забарвлюються внутрішньоцистні тільця та оболонка Тло - блакитне або фіалкове Приклад 2 Відомим І запропонованим способом проводять визначення пневмоцист в мокротинні C O со ю 53423 Таблиця 1 Результати визначення пневмоцист Виявлено проб з пнеСпосіб ви- Досліджено вмоцистами значення проб мокроАбсолютпневмоцист тиння Процент не число Запропоно125 84 67 ± 4 ваний Відомий 125 81 65 ± 4 Застосування нового способу дозволяє скоротити проведення досліджень на 45 - 50 хвилин, не знижуючи ефективності виявлення пневмоцист в досліджуваному матеріалі ЛІТЕРАТУРА 1 Walker Р М Giemsa staining for cysts and trophozoites of Pneumocystis carinii // J Clm Pathol -1989 - V 42, №4 - P 432 - 434 2 Mussto L et al Ten-minute silver stain for Pneumocystis carinii and fungi in tissue section // Arch Pathol Lab Med -1982 -V 106, №6 - P 292 - 294 3 Witebsky F S Modified toluidine blue 0 stain for Pneumocystis carinii further evaluation on some mechanical factors // J elm, Microb 1988 -V 26, №4 - P 774 - 775 4 Masachika S Double staining method for identification of cysts walls and mtracystic bodies of Pneumocystis carinii in histologic section // Acta med Nagasak -1989 - V 34, №2-4 - P 32-34 5 Локтева I M із співавт Пневмоцистоз і його діагностика//Лаб діагностика -1999 - №4 - С 3 3 35 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24