Спосіб одержання гіперімунних сироваток до вірусу хвороби марека (вхм)

Спосіб одержання гіперімунних сироваток, який відрізняється тим, що до антигенів виробничих штамів вірусу хвороби Марека (ВХМ) при гіперімунізації додають 5-7об % димексиду (диметилсульфоксид, ДМСО) та вводять донорам суміш 2-4-разово внутрішньовенно при незмінній дозі антигену. Корисна модель відноситься до ветеринарної біотехнолош" та вірусології, а саме - отримання специфічних гіперімунних сироваток для індикації антигену ВХМ в досліджуваному матеріалі. Хвороба Марека - досить поширена серед сільськогосподарської та дикої птиці, що характеризується непластичними ураженнями внутрішніх органів, м'язів і шкіри та нервовими розладами. Для діагностики хвороби Марека використовують реакції дифузійної преципітації (РДП) чи імунодифузії (РІД). Ці способи базуються на виявленні вірусного антигену в епітелії пір'яних фолікулів та в суспензіях внутрішніх органів Згідно рекомендаціям (Manual Standarts of Marek's disease diagnostics (Ch.2.7.) - O.I.E., 2002) донором специфічних антитіл є клінічно хвора на хворобу Марека птиця. Для біопромисловості важливим є відшукання економічно вигідних способів отримання антитіл від донорів. Існує спосіб пперімунізації з використанням різних ад'ювантів, в т.ч. повного ад'юванта Фрейнда (Корнієнко Л.Є.// автореф. докт. дис, - X., - 2003). Ці способи забезпечують індукцію високих титрів преципітувальних антитіл при низьких витратах антигену, але потребують багато часу Для гіперімунізаци запропоновано використовувати гетерологічні біологічні системи. Так при хворобі Гамборо, збудник якої, до речі, також є сильним імуносупресивним агентом, використовують введення антигену без ад'юванту, причому, зразу внутрішньовенне (Інструкція по діагностиці хвороби Гамборо /Герман В.В., Герман І.В. та м.Н К., 1998) Цей спосіб характеризується частим введенням антигену з підвищенням дози. За результатами кінцевої перевірки сироватки донорів мають титр преципітувальних антитіл на рівні 5-6 Іод2. Це рішення може бути прототипом Недоліком прототипу є те, що схема імунізації супроводжується високими витратами антигенної сировини та робочого часу на проведення маніпуляцій з донорами В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб одержання гіперімунних сироваток, що містить введення антигенної субстанції шляхом додавання 5-7об.% димексиду (диметилсульфоксид, ДМСО) до антигену вірусу хвороби Марека та 2-4 - разового внутрішньовенного ведення донорам при незмінній дозі антигену Спосіб виконується таким чином. Кролям зрілих кондицій (жива маса не менша 2-2,5кг) внутрішньовенне вводять антиген виробничого штаму в дозі 1см3/кг живої маси. Концентрація білка в матеріалі, що інокулюють, 1мг/см3 До антигенного матеріалу додають 5-7% за об'ємом розчину димексиду Введення антигену проводять з інтервалом кожні 5-7 діб до появи специфічних антитіл у сироватках крові донорів необхідних титрах (не менше 6 Іодг). Титри враховують через 3-4 доби після кожної послідуючої інокуляції антигену. Кролів знекровлюють на 10-14 добу після останньої перевірки рівня титрів антитіл, при умові, що вони влаштовують мінімальні виробничі потреби (не менше 6 Іодг), і одержують з їх крові препарат гіперімунної сироватки за загальноприйнятою мето CM 00 ю 5812 дикою Спосіб розкривається в прикладах. Приклад 1. Першу групу з 5 кролів гіперімунізували за способом-прототип ом, а другу за способом, що пропонується. Після першого введення антигену в першій групі титр специфічних антитіл складав 1-2 Іодг, а в другій -4 Іодг- Після двотижневого курсу ін'єкцій антигену титри в першій групі склали 3-4 Іодг, а в Другій - 5-6 Іодг. По закінченні гіперімунізації титр преципітинів в сироватці крові кролів першої групи був на рівні 4-5 Іодг, а в другій - 6 ICXJ2 Приклад 2. Першу групу з 5 кролів масою 2,2кг пперімунізували антигеном ізоляту ВХМ-І Вогку Комп'ютерна верстка В Мацєло 31/12, другу - антигеном виробничого штаму ВХМII SBG, а третю - штаму ВХМ-ІІІ FC-126. Вже через тиждень після першого введення антигенної субстанції титри специфічних антитіл складали 3-4 Іодг- Після другого введення - 4, 5 та 4 Іодг, ВІДПОВІДНО по групах На кінцевому етапі гіперімунізації сироватки з антитілами до ВХМ-І були активними в розведеннях до 1:32-64, ВХМ-П - 1:128-256, ВХМ-ІІІ -1:32. Спосіб одержання гіперімунних сироваток до вірусу хвороби Марека є економічно вигідним та може бути використаний для отримання препаратів сироваток зі специфічними антитілами до ВХМ у високих титрах за короткі строки. Підписне Тираж 28 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул Урицькогс, 45, м Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Глазунова, 1, м Київ - 42, 01601