Спосіб доопераційної діагностики папілярних карцином щитовидної залози

Спосіб доопераційної діагностики папілярних карцином щитовидної залози, що включає отримання пункційного матеріалу, виготовлення цитологічних препаратів, дослідження клітин фолікулярного епітелію та визначення їх карюлопчних характеристик, який відрізняється тим, що в клітинах фолікулярного епітелію визначають мікроядра та проводять підрахунок відсотка цих клітин, і при наявності клітин з мікроядрами більше 0,2% від Винахід стосується медицини, а саме ендокринологи, і може застосовуватись для поопераційної діагностики папілярних карцином щитовидної залози Існує ряд способів доопераційної діагностики папілярних карцином щитовидної залози 1) Метод "AgNOR", що полягає у комп'ютерному підрахунку КІЛЬКОСТІ так званих "областей організаторів ядерець" (NOR), які виявляються у ядрах клітин фолікулярного епітелію за допомогою імпрегнації сріблом (Ад) За даними авторів методу, підрахунок КІЛЬКОСТІ NOR в ядрах клітин фолікулярного епітелію дає статистичне достовірну різницю між фолікулярними карциномами та фолікулярними аденомами (Kannakar T, Dey P Role of AgNOR in diagnosis of thyroid folhcular neoplasms on fineneedle aspiration smears Diagn Cytopathol 1995, 12(2) 148-9, discussion 149-51 ) Недоліком методу є те, що підрахунки гранул срібла в ядрах клітин після реакції AgNOR потребують спеціального комп'ютерного обладнання і ускладнені тим, що частина гранул зібрана в кластери, де їх не можна полічити Крім того, ряд ДОСЛІДНИКІВ ставлять під сумнів діагностичне значення NOR для новоутворень щитовидної залози [Nairn ER, Crocker J, McGovem J Limited value of AgNOR enumeration in assessment of thyroid neoplasms J Clm Pathol 1988, 44, 509-514 Khan EM, Pandey R Differential diagnosis of fine needle aspiration smears of thyroid nodules Acta Cytol 1996, 40, 959-962] 67) визначення відсотку клітин, що знаходяться в стані проліферації Антитіла Кі-67 впізнають ДНКзв'язаний ядерний протеїн, який присутній в ядрах клітин, що знаходяться в стані проліферації В злоякісних пухлинах щитовидної залози антитілами Кі-67 мітяться значно більше 20% клітин, а у доброякісних - менше 20% [Ноги A, Yoshida J, Sakai M, Okamoto S, Honjo Y, Mitani K, Hatton К Ki67 positive fractions in benign and malignant thyroid tumours application of flow cytometry Acta Otolaryngol 999, 119(5) 617-20] Недоліком методу є недостатня точність діагностики (84%) та необхідність використання реактивів з високою собівартістю 3) Відомий також імуноцитохімічний спосіб доопераційної діагностики злоякісних новоутвореннь щитовидної залози, в якому на висушених нефіксованих мазках пункційного матеріалу за допомогою моноклональних антитіл непрямим імунопероксидазним методом проводять виявлення йодпероксидази Цей фермент міститься в нормальних клітинах фолікулярного епітелію, але зникає в значному відсотку епітеліальних клітин раку щитовидної залози [Jean-Francois Henry, M D Thyroperoxidase immunodetection for the diagnosis of malignancy on fine-needle aspiration of thyroid nodules World J Surg 18,529-534,1994] 2) Імуноцитохімічне (за допомогою антитіл Кі загальної КІЛЬКОСТІ КЛІТИН фолікулярного епітелію, встановлюють діагноз папілярної карциноми Однак цей метод також має недоліки а) в якості критерію малігнізацм використовується зникнення антигена (йодпероксидази), а не поява нового антигену В той же час всі неепітеліальні клітини, та нефолікулярний епітелій не міс ю ю о> ю 59554 тять иодпероксидази, хоча вони не ЗЛОЯКІСНІ б) реакцію з антитілами проти иодпероксидази проводять на нефіксованих і непофарбованих препаратах, що виключає можливість встановлення співвідношення епітеліальних та не епітеліальних клітин в пунктатах, а відтак - неможливо точно встановити діагноз раку щитовидної залози За прототип взятий цитоморфологічнии спосіб, що включає отримання пункційного матеріалу, виготовлення цитологічних препаратів, дослідження клітин фолікулярного епітелію та визначення їх карюлопчних характеристик - специфічних для папілярних карцином псевдовключень цитоплазми у ядро [S R Kim Guides to Clinical Aspiration Biopsy Thyroid , IGAKU-SHOI, NY - To-kyo 1987 ] Недоліком цього методу є те, що він базується на визначенні псевдовключень, які в певному відсотку папілярних карцином не проявляються, що не дає можливості встановити точний діагноз В основу винаходу поставлена задача розробити спосіб доопераційної діагностики папілярних карцином щитовидної залози, який би дозволив виявляти їх в тих випадках, коли встановити діагноз за допомогою псевдовключень неможливо через відсутність останніх Поставлена задача досягається тим, що в способі доопераційної діагностики папілярних карцином щитовидної залози, що включає отримання пункційного матеріалу, виготовлення цитологічних препаратів, дослідження клітин фолікулярного епітелію та визначення їх карюлопчних характеристик, ВІДПОВІДНО винаходу, в клітинахфолікулярного епітелію визначають мікроядра та проводять підрахунок відсотку цих клітин, і при наявності клітин з мікроядрами більше 0,2% від загальної КІЛЬКОСТІ КЛІТИН фолікулярного епітелію, встановлюють діагноз папілярної карциноми Основною ВІДМІННІСТЮ вказаного способу доопераційної діагностики папілярних карцином щитовидної залози від прототипу є те, на відміну від визначення псевдовключень цитоплазми у ядро, які не завжди дозволяють встановити діагноз через їх відсутність в певній частині пухлин, автори Комп'ютерна верстка Л Ціхановська пропонують з метою діагностики використовувати виявлення клітин, що містять мікроядра Авторами встановлено, що відсоток клітин фолікулярного епітелію з мікроядрами в доброякісних пухлинах, на відміну від папілярних карцином, не перевищує 0,2% Тому при наявності в пухлині більше 0,2% клітин з мікроядрами, новоутворення вважають злоякісним, що дозволяє встановити точний діагноз Спосіб здійснюється таким чином матеріал, отриманий за допомогою тонкогольчатої аспіраційної пункційної біопсії, фіксують та фарбують за стандартним методом Май-Грюнвальда-Гімза (MGG), після чого досліджують клітини фолікулярного епітелію на наявність мікроядер Мікроядра являють собою утворення круглої форми розміром 1-Змкм, розташовані в цитоплазмі поблизу основного ядра клітини Вони , як і основні ядра, мають ядерну оболонку та заповнені хроматином Підраховують КІЛЬКІСТЬ клітин з мікроядрами на 1000 клітин фолікулярного епітелію Вираховують відсоток клітин з мікроядрами Якщо КІЛЬКІСТЬ останніх перевищує 0,2% - встановлюють діагноз папілярної карциноми Приклад 1 У хворої Вдовиченко Ю О , 1982р н , за допомогою ультразвукового дослідження в щитовидній залозі знайдено вузол розміром 25мм Проведена тонкогольчата пункційна біопсія утворення і на отриманих цитологічних препаратах знайдено атипові клітини фолікулярного епітелію, які не мали псевдовключень цитоплазми у ядро, що не дозволяло встановити правильний діагноз Підрахунок клітин з мікроядрами показав, що КІЛЬКІСТЬ останніх більше 0,2% (0,3%) На цій підставі поставлено цитологічний діагноз папілярної карциноми Після проведення операції патопстолопчне дослідження підтвердило діагноз папілярної карциноми Таким чином, даний спосіб дозволяє встановити точний діагноз папілярної карциноми Спосіб може широко використовуватись в ендокринологічній практиці Підписано до друку 06 10 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна