Спосіб оцінки терапевтичного потенціалу кріоконсервованих фетальних нервових клітин

Спосіб оцінки терапевтичного потенціалу кріоконсервованих фетальних нервових клітин, що включає введення кріоконсервованих фетальних 3 60458 ня на клітинному рівні, згідно з корисною моделлю, після введення клітин у тварин виділяють лімфоцити селезінки, суспензію яких додають до попередньо підготовленої культури нервових клітин щурів і інкубують протягом 2 годин в термостаті, після чого знімають лімфоцити, визначають їх концентрацію, порівнюють її з початковою концентрацією і розраховують відсоток агрегованих лімфоцитів, при цьому, чим нижче цей відсоток, тим вище терапевтичний потенціал кріоконсервованих ФНК. Використання кількісного показника відображає дію безпосередньо введених кріоконсервованих ФНК і тому, у порівнянні з прототипом, забезбечує можливість підвищити достовірність отриманої інформації і може ефективно застосовуватися при виготовленні клітинних перпаратів. Спосіб пояснюється прикладом. На тваринах моделювали нейродегенеративну патологію аутоімунної природи. Хворим тваринам вводили кріоконсервовані ФНК, після чого виділяли селезінку, гомогенізували її і отримували суспензію лімфоцитів. Цю суспензію доводили до 6 концентрації 5×10 клітин/мл і додавали до попередньо підготовленої трьохденної культури нервових клітин щурів, вирощених на колагеновому субстраті з використанням середовища DMEM. Культуру нервових клітин з лімфоцитами інкубували протягом 2 годин в термостаті. Лімфоцити знімали шляхом промивання культури живильним середовищем. Кількість знятих лімфоцитів рахували під мікроскопом. Початкову концентрацію приймали за 100% і розраховували відсоток знятих лімфоцитів. По різниці між двома цими концен Комп’ютерна верстка А. Рябко траціями розраховували мфоцитів. Початкова концентрація лімфоцитів Концентрація знятих лімфоцитів 4 відсоток агрегованих лі6 5×10 клітин/мл - 100% 6 3,9×10 клітин/мл - Х 6х 6 Х=3,9×10 100/5×10 = =78% % агрегованих лімфоцитів = 100-78=22% Для контролю були використані здорові тварини, у яких було 10% агрегованих лімфоцитів, і тварини з патологією без введення кріоконсервованих ФНК, у яких визначили 62% агрегованих лімфоцитів. Таким чином, після введення кріоконсервованих ФНК тваринам з патологією цей відсоток значно знизився (в 2,8 рази), наближаючись до показника здорових тварин. Це достовірно свідчить про високий терапевтичний потенціал кріоконсервованих ФНК. Джерела інформації: 1. Останков М.В., Лебединец Д.В., Порожан Е.А., Гольцев А.Н. Влияние факторов криоконсервирования на цитоморфологические и структурные характеристики фетальных нервных клеток // Проблемы криобиологии - 2009. - Т. 19, №4. С.431-437. 2. Taupin P. Cryopreservation of early postmitotic neuronal cells in culture // Expert Opin Ther Pat 2009. - Vol.19, №2. - P.265-268. 3. Грищенко В.И., Гольцев А.Н., Бабенко Н.Н. Экспериментальный аллергический энцефаломиелит как возможная модель изучения механизма действия продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса при лечении аутоиммунных заболеваний // Пробл. криобиологии. - 2002. - №2. - С. 3443. Підписне Тираж 24 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601