Спосіб фіксації кріоконсервованих клітин

Спосіб фіксації кріоконсервованих клітин, що включає відмивання клітинної суспензії в розчині Хенкса, інкубацію з фіксатором льодяним етанолом при 4-6 °С і дворазове відмивання від фіксатора, який відрізняється тим, що використовують 50-60° льодяний етанол, а інкубацію проводять протягом 40-50 хв. (19) (21) u200805047 (22) 18.04.2008 (24) 10.09.2008 (46) 10.09.2008, Бюл.№ 17, 2008 р. (72) САФРАНЧУК ОЛЬГА ВОЛОДИМИРІВН А, U A, БОНДАРОВИЧ МИКОЛА ОЛЕКС АНДРОВИЧ, U A, ОСТАНКОВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛІВНА, UA, ГОЛЬЦЕВ АН АТОЛІЙ МИКОЛАЙОВИЧ, U A 3 35321 4 суспендували і повторювали процедуру центрифу200мкл 60° етанола. Потім протягом 40хв фіксувагування за тих самих умов. Подібним чином ли при 4-6°С. Після закінчення часу фіксації клітиклітини відмивали двічі. Відмита суспензія клітин ни відмивали. Фіксовані клітини осаджували шлябула однорідною, без слизуватих включень. хом центрифугування протягом 5хв при 1000об/хв. Приклади 1-3 демонструють, що при умовах Після видалення фіксатора до осаджених клітин фіксації, що заявляються, не відбувається лізис додавали 100мкл розчину Хенкса, ресуспендували клітин, що зазнали впливу факторів кріоконсервуі повторювали процедуру центрифугування за тих вання і це дає можливість проводити наступні етасамих умов. Подібним чином клітини відмивали пи підготовки до дослідження.. двічі. Після відмивання суспензія була однорідПриклад 4. Спосіб здійснювали аналогічно ною, без слизуватих включень. прикладам 1-3, за винятком того, що зразки клітин Приклад 3. Після розморожування суспензію АКЕ, КФП і KM після кріоконсервування фіксували клітин кісткового мозку (KM) відмивали від кріопротектора: по краплях у подвійному обсязі дода70° льодяним етанолом протягом 40, 50 і 60хв. вали середовище для культивування, потім Результати показали, що фіксація 70° етанолом, центрифугували 5хв при 1000об/хв. З отриманої незалежно від часу інкубації, викликає лізис усіх після відмивання суспензії відбирали 100мкл і дозразків Джерела інформації: давали 200мкл 50° етанола. Потім протягом 40хв 1. Krishan A. Rapid flow cytofluorometric analysis інкубували при 4-6°С. Після закінчення часу інкуof cell cycle by propidium iodide staining. // J. Cell бації клітини відмивали. Фіксовані клітини осаджуBiol. - 1975. - 66. - P. 188. вали шляхом центрифугування протягом 5хв при 1000об/хв. Після видалення фіксатора до осаджених клітин додавали 100мкл розчину Хенкса, ре Комп’ютерна в ерстка А. Крижанівський Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601