Консорціум вірусів bovinae pestivirus та bovinae herpesvirus-1 “bvdv+bhv-1/calf/cherkasy/2006″ для виробництва вакцин і діагностикумів

Консорціум вірусів Bovinae Pestivirus та Bovinae herpesvirus-1 "BVDV+BHV1/calf/Cherkasy/2006" для виробництва вакцин і діагностикумів, який зберігається в колекції штамів мікроорганізмів лабораторії вірусології ННЦ "ІЕКВМ" за номером 59: сімейство Flaviviridae, рід Pestivirus, вид Bovinae Pestivirus сімейство Herpesviridae, підсімейство Alphaherpesvirinae, рід Varicellavirus, вид Bovinae herpesvirus-1. (19) (21) u201012966 (22) 01.11.2010 (24) 11.07.2011 (46) 11.07.2011, Бюл.№ 13, 2011 р. (72) КУЧЕРЯВЕНКО РОМАН ОЛЕКСІЙОВИЧ, СТЕЦЕНКО ВОЛОДИМИР ІВАНОВИЧ, ТРИЗНА ЛАРИСА ПЕТРІВНА (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ НАУКОВИЙ ЦЕНТР "ІНСТИТУТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ І КЛІНІЧНОЇ ВЕТЕРИНАРНОЇ МЕДИЦИНИ" 3 61009 імунофлуоресценції зі специфічними кон'югатами до вірусів ВД, ІРТ і коронавірусу, а також в полімеразній ланцюговій реакції (ПЛР). В результаті проведених молекулярногенетичних досліджень в ПЛР було встановлено, що вірусна суспензія містить в собі генетичний матеріал герпесвірусу (інфекційного ринотрахеїту) та пестивірусу (вірусної діареї). Індекс нейтралізації зі специфічною сироваткою до вірусу ІРТ становив 2,5 lg, зі специфічною сироваткою до вірусу ВД - 2,2 lg, що свідчить про наявність в складі консорціуму вірусів ІРТ та ВД. Реакція нейтралізації з сироваткою до коронавірусу неспецифічна, індекс нейтралізації становив 1,2 lg. Консорціум характеризується наступними ознаками та властивостями. Культуральні ознаки культивується в первинних і перещеплюваних культурах клітин нирки теляти, трахеї теляти, нирки вівці, коронарних судин теляти. Цитопатичний ефект виявляється через 12-16 годин, титр консорціуму становить 7,0-7,5 lg ТЦД50/мл. Цитопатогенна дія характеризується появою округлих клітин і утворенням розривів в моношарі, а в подальшому повним його руйнуванням. Зберігається за температури нижче мінус 20 °С протягом 4-х років. Чутливий до формаліну, ацетону, ефіру, хлороформу та етилового спирту. Патогенні властивості. Циркуляцію консорціуму зареєстровано в неблагополучному по респіраторним захворюванням скотарському господарстві Черкаської області в 2006 році. Консорціум патогенний для великої рогатої худоби незалежно від віку, передається аерогенно та контактним шляхом. Антигенні властивості. В організмі тварин викликає утворення віруснейтралізуючих та преципітуючих антитіл. Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 4 Біотехнологічні властивості. Стандартні для первинних і перещеплюваних клітинних культур. Основні умови зберігання. Заморожування за температури нижче мінус 20 С, ліофілізація. Підтримання консорціуму проводять шляхом репродукції на чутливих культурах клітин. Консорціум нешкідливий в інактивованій вакцині. Стабільні властивості консорціуму дозволяють використовувати його для виробництва вакцин та діагностикумів. Приклад. Визначення видової специфічності консорціуму «BVDV+BHV-1/calf/Cherkasy/2006» в реакції імунофлуоресценції. Реакцію імунофлуоресценції проводили на культурі клітин, яка вирощена на скельцях і інфікована консорціумом «BVDV+BHV-1/calf/Cherkasy/2006». Через 14 годин скельця фіксували в ацетоні, а потім фарбували ФІТЦ-кон'югатами до вірусу діареї, інфекційного ринотрахеїту та коронавірусу, після чого обробляли розчином синьки Еванса. Облік реакції проводили за інтенсивністю світіння інфікованих клітин. Специфічне світіння до вірусу діареї виявляли у вигляді флуоресценції зеленого кольору в ядрі та цитоплазмі клітин, до вірусу інфекційного ринотрахеїту також спостерігали світіння зеленого кольору в ядрі та цитоплазмі клітин, але кількість флуоресціюючих клітин до ІРТ була майже вдвічі меншою. При обробці ФІТЦкон'югатом коронавірусу специфічна флуоресценція не спостерігалась, цитоплазма клітин мала темно-коричневе забарвлення, а місцями ледь помітне світіння жовтуватого кольору. При цьому було видно архітектоніку тканини. Таким чином, стабільність властивостей консорціуму дозволяє використовувати його при виробництві вакцин і діагностикумів. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601