Спосіб виявлення дендритних клітин тимусу та селезінки у лабораторних тварин

Спосіб виявлення дендритних клітин тимусу та селезінки у лабораторних тварин шляхом підготовки препарату, проведення гістохімічної реакції, заключения препарату j СВІТЛОВОЇ мікроскопії, який відрізняється тим, що досліджують гістологічний препарат, а гістохімічну реакцію проводять з лектином сочевиці. Корисна модель стосується медицини, а саме, гістології і анатомії, ї може бути використаною у вивченні морфології тимусу та селезінки лабораторних тварин. Існує багато способів виявлення дендритних клітин тимусу та селезінки, але вони недостатньо специфічні, що викликало необхідність у розробці нових способів. Відомий спосіб виявлення дендритних клітин тимусу і селезінки, який полягає в виділенні та очищенні культури дендритних клітин in vitro та їх аналізі [Smith A.L., Fazekas de St. Groth В. Antigenpulsed CD8 + dendritic cells generate an immune response after subcutaneous injection without homing to draining lymph node // J. Experimental Medicine.1999.- Vol 189, №3.- P.593-598]. Спільною суттєвою ознакою аналога і корисної моделі, що заявляється, є така: - підготовка препаратів для дослідження; - заключения препарату; - мікроскопія. Цей спосіб є недостатньо ефективним, тому що не дозволяє специфічно виявляти дендритні клітини в зрізах тимусу та селезінки. Найбільш близьким за технічною сутністю та результатом, що досягається, є спосіб, який полягає у виявленні дендритних клітин за допомогою набору моноклональних антитіл [Maeda Kumhiko, Matsuda Mikio, Suzuki Hitoshi, and Hito-aki Saitoh Immunohistochemical Recognition of Human Follicular Dendritic Cells (FDCs) in Routinely Processed Paraffin Sections// Journal of Histochemistry and Cytochemistry.- 2002.-Vol.50.-P. 1475-1486]. Спільними суттєвими ознаками прототипу І винаходу, що заявляється, є такі: - підготовка гістологічних препаратів; - проведення гістохімічної реакції; - заключения препарату; - світлова мікроскопія. Цей спосіб є недостатньо ефективним, тому що використання моноклональних антитіл є дуже дорогим і потребує багато моноклональних антитіл. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалення способу виявлення дендритних клітин тимусу та селезінки у лабораторних тварин шляхом використання гістологічних препаратів для постановки гістохімічної реакції з лектином сочевиці (LCA), що дозволяє підвищити ефективність специфічного виявлення цих клітин. Поставлена задача вирішується завдяки тому, що у способі, який включає підготовку гістологічних препаратів тимусу та селезінки, постановку гістохімічної реакції з пектином, заключения препарату і світлову мікроскопію, новим є те, що досліджують гістологічний препарат, а гістохімічну реакцію проводять з лектином сочевиці (LCA). Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, та технічним результатом полягає у такому. Постановка гістохімічної реакції з лектином сочевиці (LCA) для виявлення дендритних клитин тимусу і селезінки у лабораторних тварин дозволить зменшити помилки при підрахунку цих клітин в гістологічних препаратах тимусу і селезінки, тому що лектин сочевиці (LCA) є специфічним маркером дендритних клітин тимусу та селезінки, в ци со О) 6191 топлазмі яких розміщуються рецептори для даного лектину (вуглеводні залишки a-D-манози). Запропонований спосіб дозволяє вибірково диференціювати дендритні клітині тимусу та селезінки щурів. Ця специфічна гістохімічна реакція дозволить аналізувати функціональний стан дендритних клітин тимусу та селезінки завдяки періодичній зміні експресії І_СА+ - рецепторів в цитоплазмі цих клітин. Таким чином, сукупність вищезазначених позитивних моментів дозволить підвищити якість оцінки цитоархітектоніки тимусу та селезінки. Спосіб здійснюють таким чином. Для гістохімічного дослідження тимус та селезінку щурів фіксують в рідині Буена. Шматочки обезвожують в висхідній батареї спиртів, починаючи з 50%. Отримують парафінові зрізи товщиною 5-бмкм. Гістохімічне визначення рецепторів до пектину сочевиці (LCA) проводять з використанням прямої реакції з кон'югатами І пероксідазою хріну. Рецептори до пектину виявляють по відкладенню бензидинової мітки. Морфометричний підрахунок клітин, які мають на своїй поверхні пігментну бензидинові мітку, кон'юговану з пектином Комп'ютерна верстка Н. Лисенко сочевиці (LCA), проводять за допомогою окулярної сітки при імерсійному збільшенні мікроскопу. Приклад. Після фіксації шматочків тимусу та селезінки щурів в рідині Буєна, обезвожування в висхідної батареї спиртів, отримують парафінові зрізи товщиною 5-6 мкм та виготовляють гістологічні препарати. Гістохімічне визначення рецепторів до лектину сочевиці (LCA) проводять з використанням прямої* реакції* з кон'югатами і пероксідазою хріну. Рецептори до лектину виявляють по відкладенню бензидинової мітки. Вуглеводні залишкі a D-манози, які є рецепторами до лектину сочевиці (LCA), розташовані в цитоплазмі дендритних клітин тимуса та селезінки щурів. Дендритні клітини полігональної форми з численними відростками локалізуються переважно на кортико-медулярній межі тимусу та по периферії періартеріальних муфт і маргінальної зони селезінки. В дендритних клітинах тимуса та селезінки інтенсивність розподілу внутрішньоцитоплазматичних рецепторів до лектина сочевиці постійно змінюється, залежно від морфофункцюнального стану органів. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство оовгти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український Інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601