Вакцинний штам еscнericнia coli “м-1/148″

Винахід відноситься до ветеринарної мікробіології і імунології.зокрема до виготовлення вакцин та антигенів. Штам Escherichia coli "М-1/148", який використовується для виробництва полівалентних вакцин "Колісан", та асоційованих вакцин "Вельшікол", "Вельшісальм", "Сердосан" проти ешеріхіозу, сальмонельозу, анаеробної ентеротоксемії та пастерельозу тварин, "Пневмомастисан" проти пневмоентеритів і маститів тварин, "Некросан-2", "Поліавісан", а також для виготовлення антигену для імунологічних реакцій. Метою винаходу є штам Escherichia coli " М-1/148". Він володіє добре вираженими імуногенними властивостями, які проявляються в синтезі специфічних антитіл в організмі щеплених тварин. Штам виділений від поросяти з клінічними ознаками набрякової хвороби. Особливістю штаму є висока патогенність, продукування b -гемолізину, серогрупова специфічність, висока потенція росту, яка сприяє отриманню великої кількості біомаси для виготовлення вакцини, що визначає рентабельне її виробництво. Вакцинний штам Escherichia coli " М-1/148" селекційований в IBM УААН і депонований в колекції мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біоте хнології і штамів макроорганізмів під № 148 . Вакцинний штам Escherichia coli " М-1/148" характеризується наступними ознаками: Морфологічні ознаки: бактерії Escherichia coli " М-1/148" в мікроскопічних препаратах із добової бульйонної культури , пофарбованих за Грамом - грамнегативні товсті палички із заокругленими кінцями. Спор не утворює [1, 2, 3]. Культуральні ознаки: На МПБ при 37°С рН 6,8-7,2 спостерігається рівномірне помутніння середовища, на МП А утворює округлі гладенькі блискучі сіро-білі колонії (S-форми). На диференційному середовищі Ендо утворює колонії червоного кольору з металевим відтінком. Колір середовища КОДА змінює з синього на жовто-зелений[1, 2, 4]. Ферментативні властивості: бактерії Escherichia coli " M-1/148" активно розщеплють глюкозу, маніт - з утворенням кислоти й газу. Утворює індол та слабкіше сірководень. Патогенні властивості: патогенний для білих мишей при внутрішньочеревному введенні суспензії добової агарової культури у фізрозчині, в дозі 0,5см 3 та концентрації 500 млн. мікробних клітин, що становить LD100. Загибель тварин відбувається протягом 5-ти діб. Імуногенні властивості: дворазове парентеральне щеплення білих мишей анакультурою даного штаму в дозі 0,5см 3 захищає від контрольного зараження вірулентною культурою Escherichia coli в 80 % випадків[5]. Винахід ілюструється наступними прикладами. Приклад 1. Білих мишей масою 16-18 г імунізували анакультурою штаму Escherichia coli "M-1/148" в кількості 10 голів підшкірно та 10 голів внутрішньом'язово в об'ємі 0,5см 3. Щеплення проводили двічі з інтервалом 12 діб. На 12-ту добу після другого щеплення проводили зараження вірулентною культурою штаму Escherichia coli " M-1/148" в дозі 500 млн. мікробних клітин. В якості контролю були неімунізовані білі миші, в кількості 10 голів. Встановлено, що коефіцієнт імунологічної ефективності імунізованих тварин склав 80 % при 100% загибелі контрольних (таблиця 1). Приклад 2. 15 голів поросят у віці 3 місяці імунізували анакультурою штаму Escherichia coli "M-1/148" в об'ємі 3,0см 3 двічі з інтервалом 14 діб. В якості контролю були неімунізовані поросята в кількості 10 голів. До щеплення, на 7-му та 14-ту добу після вакцинації відбирали проби крові від поросят обох груп і досліджували сиворотки крові на наявність антитіл в реакції аглютинації. Титри антитіл до штаму Escherichia coli " M-1/148" представлені в таблиці 2. Таблиця 1 Результати контролю інфікування білих мишей щеплених анакультурою штаму Escherichia coli " M-1/148" № п/п 1. 2. 3. І трупа ІІ гр упа ІІІ група Метод введення анакультури підшкірно Вн./м'язово Об'єм 0,5см 3 0,5см 3 0,5см 3 Кількість голів 10 10 10 Загинуло голів % 2 20 2 20 10 100 Залишилось живих голів % 8 80 8 80 0 0 Таблиця 2 Титри антитіл в сироватці крові поросят, щеплених анакультурою штаму Escherichia coli" M-1/148". № п/п 1. Групи тварин Поросята віком 3 міс.: імунізовані контроль Кількість голів Доза Титри антитіл 15 10 3,0 см 3 3,0 см 3 1:320-1:640 Як видно з таблиці 2, при імунізації добовою анакультурою штаму Escherichia coli " M-l/148", титри антитіл в сироватці крові поросят групи 3 міс становили 1:320-1:640. Отже, отримані результати, що наведені в таблицях 1 і 2 свідчать про те, що імунізація анакультурою штаму Escherichia coli " М-1/148" захищає білих мишей від інфікування вірулентною культурою даного штаму та сприяє синтезу специфічних антитіл і формуванню імунітету у поросят. Особливістю штаму Escherichia coli "M-1/148" є продукування гемолізину, наявність металевого блиску колоній, він володіє добре вираженими морфологічними, культуральними, біохімічними, патогенними властивостями, характерними для роду Escherichia. Проведені дослідження показали, що штам Escherichia coli "M-1/148" володіє добре вираженою імуногенною активністю, що дозволяє рекомендувати його для виготовлення вакцинних препаратів проти ешеріхіозів тварин. Джерела інформації. 1. Определитель бактерий Берджи (под ред. Дж. Хоута, Н. Крита, П.Снита и др.). Перевод с английского акад. РАН Г.А. Заварзина. 9-е изд в 2-х томах-1997-800С. 2. Ветеринарная микробиология под редакцией Я.Е.Колякова, засл. деятеля науки РСФСР проф. Московской ветеринарной академии. 3-е издание. Москва 1965 г. 3. Головко А.Н., Гнатенко Г.В. Фимбриальные адгезины Escherichia coli и их роль в патогенезе колибактериоза сельскохозяйственных животных и птиц // Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка с.-х. ж.-х: Тез.докл. / Респ.рауч.-практ.конф.- Минск, 1990 - С.38. 4. Настанова з лабораторної діагностики ешерихіозу( колібактеріозу ) тварин / А.М.Головко, В.О.Ушкалов, П.П.Фукс та інші // Київ, 1995-20с. 5. Риженко В.П., Риженко Г.Ф., Акименко Л.І., Риженко І.В., Дементьева С.А., Бєлік С.М., Риженко В.В., Галка І.В., Безименний М.В., Марченко О.М., Черніков О.О. На укове обгрунтування розробки та ефективності застосування асоційованих вакцин // Науковий вісник НАУ, 2001.-№36.-С.43-49.