Спосіб виявлення лужної фосфомоноестерази (лужної фосфатази-лф)

Спосіб виявлення лужної фосфомоноестерази (лужної фосфатази - ЛФ), який включає метод Гоморі-Такамачу, який відрізняється тим, що у складі інкубаційного середовища використовують барбітурат, фармакопейний препарат - "тіопенталнатрій". (19) (21) u201107328 (22) 10.06.2011 (24) 10.02.2012 (46) 10.02.2012, Бюл.№ 3, 2012 р. (72) ЩЕТИНСЬКИЙ ІГОР МИХАЙЛОВИЧ, ЗАХАР'ЄВ АНДРІЙ ВІКТОРОВИЧ, УЛЬЯНИЦЬКА АНАСТАСІЯ ЮРІЇВНА 3 пропису інкубаційного середовища і прописом у запропонованій модифікації не відрізняється від рекомендованого у оригінальному методі за Гоморі-Такамачу і здійснюється наступним чином: 1. Фіксовані у холодному 10 % розчині нейтрального формаліну, або у етанолі, або в ацетоні шматочки тканини товщиною 2-3 мм використовують для виготовлення парафінових блоків з подальшим отриманням парафінових зрізів, або ущільнюють шляхом підморожування з отриманням заморожених зрізів. 2. Отримані у будь-який з наведених способів зрізи доводять до води. 3. Поміщують зрізи в інкубаційне середовище на 1-6 годин при температурі 37 °C. 4. Сполоскують зрізи у розчині хлориду кальцію протягом 1-2 хвилин. 5. Промивають зрізи у 2 % розчині нітрату кобальту протягом 5 хвилин. 6. Промивають у чотирьох порціях дистильованої води. 7. Переносять у 0,5 % розчин сульфіду амонію. 8. Промивають у проточній воді протягом 10 хвилин. 9. Зневоднюють у спиртах, просвітлюють у ксилолі, заключають у полістирол. Результат реакції: місця локалізації ферменту визначаються за темно-коричневими осадами сульфіду кобальту. Комп’ютерна верстка Л. Купенко 67176 4 Для постановки гістохімічного контролю використовують інкубаційне середовище, з якого вилучено гліцерофосфат натрію у складі: 1 г хлориду кальцію, 0,5 г тіопенталу-натрію, 100 мл дистильованої води, 0,5 мл хлориду магнію. Порядок постановки реакції контролю не відрізняється від вищенаведеного. При цьому у результаті реакції темно-коричневі осади сульфіду кобальту в місцях локалізації ферменту не з'являються. Таким чином, запропонований спосіб виявлення лужної фосфомоноестерази (лужної фосфатази - ЛФ) дозволить використовувати для приготування інкубаційної суміші за методом ГоморіТакамачу доступний для ветеринарної медицини фармакопейний препарат «тіопентал-натрій» замість недоступного вероналу (мединалу). Джерела інформації. 1. Агеев А. К. Гистохимия щелочной и кислой фосфатаз человека в норме и патологии / А. К. Агеев. - Ленинград: Медицина, ленинградское отделение, 1969. - 142 с. 2. Кононский А. И. Гистохимия / А. И. Кононский - К.: Вища школа, 1976. - 280 с. 3. Мари Р. Биохимия человека / [Мари Р., Греннер Д., Мейес П. и др.]; пер. с англ. - М.: Мир, 2004. - Т. 1. - 381 с. 4. Машковский М. Д. Лекарственные средства / М. Д. Машковский. - [12-е изд., перераб. и доп.]. М.: Медицина, 1994. - Ч. 1. - С. 20-31. 5. Пирс Э. Гистохимия / Э. Пирс. - М.: издательство иностранной литературы, 1962. - 962 с. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601