Спосіб кількісного визначення кверцетину

Винахід стосується галузі аналітичної хімії, а саме способів кількісного визначення кверцетину і може бути використаний в лабораторіях Державної інспекції за контролем якості ліків, а також ВТК хіміко-фармацевтичних заводів. Підвищення селективності методів кількісного аналізу с актуальним в аналітичній практиці. Пряма спектрофотометрія не завжди спроможна вирішити це, а тому впровадження кольорореагентів для потреб спектрофотометрії у видимій ділянці спектру є важливим. Відомий спосіб кількісного визначення кверцетину, який полягає у розчиненні проби, що аналізується, у метиловому спирті при нагріванні, додаванні 4мл реактиву осадження, витримуванні 30 хвилин, центрифугуванні, розчиненні отриманого осаду у розведеній оцтовій кислоті, нейтралізації розчину 25мл розчину гідрокарбонату натрію, додаванні ацетатного буферу, 0,5мл ксиленолового оранжевого і титруванні розчином трилону Б до переходу забарвлення з червоно-фіолетового у лимонно-жовте. Розчин осадження готують наступним чином: у мірній колбі ємністю 100мл розчиняють 1,5г ацетату свинцю у 50мл метилового спирту додають 10г триетаноламіну і доводять метанолом до позначки. (ФС 42У-4-253-97. Кверцетин). Спільними суттєвими ознаками аналогу та способу, що заявляється, є розчинення проби та додавання реактивів. Недоліком цього способу є недостатня точність, складність методики, велика затрата часу, неспецифічність реагенту. Найбільш близьким за технічною сутністю і результатами, що досягаються, є спосіб, який полягає в розчиненні аналізуємо! проби кверцетину у пропанолі, додаванні 0,5мл 0,05М розчину сірчаної кислоти і обробці кольорореагентом - 10% розчином молібдату амонію та вимірюванні оптичної густини при 420нм. (Estimation of quercetin in the leaves of Maesa indicawall by a new colorimetric method / Gaitonde R.V., Naik P.L.// Curr. Sci. (India). 1989. - 58, №17. -P.982-983.). Спільними суттєвими ознаками прототипу та способу, що заявляється, є розчинення проби у спирті, обробка кольорореагентом та вимірювання оптичної густини. Недоліком прототипу є неспецифічність реагенту, який взаємодіє з відновниками, багатьма алкалоїдами та деякими катіонами і недостатня чутливість. В основу винаходу поставлено задачу удосконалення способу кількісного визначення кверцетину шляхом використання діазоля яскраво-червоного 2Ж, як кольорореагенту, що забезпечить підвищення селективності та чутливості аналізу. Поставлена задача вирішується тим, що у способі, який включає розчинення проби у спирті, обробку кольорорегаентом та вимірювання оптичної густини забарвленого розчину новим є те, що як кольорореагент застосовують діазоль яскраво-червоний 2Ж. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються та досягнутим технічним результатом є підвищення селективності кількісного визначення аналізу кверцетину в субстанції. Крім того, як кольорореагент застосовується легкодоступний діазоль яскраво-червоний 2Ж, який випускається вітчизняною хімічною промисловістю і використовується як барвник бавовняних тканин. Спосіб здійснюють таким чином: розчинену у 50% етанолі пробу кверцетину обробляють діазолем яскравочервоним 2Ж у водно-етанольному середовищі в присутності карбонату натрію (рН розчину близько 10) з послідуючим вимірюванням оптичної густини забарвленого розчину. Приклад. Кількісне визначення кверцетину в субстанції. Точну наважку зразка, що аналізується в межах 0,0100 0,0200г розчиняють в 50% етанолі в мірній колбі місткістю 100мл, доводять до позначки цим же розчинником і перемішують. 1 мл одержаного розчину вміщують в мірну колбу на 25мл, додають 1мл 1% розчину карбонату натрію, 5мл 0,2% свіжовиготовленого водного розчину діазолю яскраво-червоного 2Ж та 5мл 96% етанолу. Забарвлений розчин доводять водою до мітки, ретельно перемішують. Паралельно проводять дослід зі стандартним розчином кверцетину та розчином-фоном (контроль), який не вміщує объект дослідження. Вимірюють оптичну густину аналізуємих розчинів на фоні контролю за допомогою спектрофотометру при 420нм в кюветах з товщиною шару 1см. Розрахунок кількісного вмісту кверцетину проводять за формулою: A × C0 × 2500 C% = A 0 × p × l , де A - оптична густина аналізуємого розчину; A0 - оптична густина стандартного спектрофотометруємого розчину; C0 - концентрація стандартного спектрофотометруємого розчину (0,0006г/100 мл); p - наважка, т; 2500 - коефіцієнт, враховуючий розбавлення; l - товщина шару, см. Результати кількісного визначення кверцетину в субстанції наведені в табл.1. Таблиця 1 Наважка, г Знайдено, % 0,0130 100,1 Метрологічні характеристики x = 99,65 0,0151 99,72 S = 0,1921 2 0,01730,01941 99,21 99,18 0,02161 0,0259 100,2 99,46 S = 0,4383 Sx = 0,4383 Dx = 0,4598 Порівняльні характеристики пропонуємого способу з відомим наведені в табл.2. Таблиця 2 Порівнюваємий параметр Спосіб відомий пропонуємий діазоль Застосований молібдат яскравореагент амонію червоний 2Ж Об'єкти, що Відновники, похідні визначаються алкалоїди, даними реагентами деякі катіони фенолів Відкривальний 1,9мкг/мл 0,58мкг/мл мінімум Як видно з табл.2, спосіб, що пропонується, підвищує чутливість в 4 рази, селективність визначення та може бути застосований в практиці лабораторій по контролю якості ліків та ВТК хіміко-фармацевтичних заводів.