Штам бактерій campilobacter jejnni, використовуванний як стабільний еталонний тест для визначення ростових якостей селективних поживних середовищ для кампілобактерій

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к изучению биологических свойств кампилобэктерий. Прототипом данного изобретения является штамм бактерий FRANCISELLA TULARENSIS, используемый для проверки ростовых качеств селективных сред для ту-ляремийных бактерий , однако использование известного штамма для контроля ростовых качеств селективных питательных сред для кампилобэктерий низкоэффективно. Задачей изобретения является изыскание нового штамма CAMPYLOBACTER JEJUNI (С. jejunl) в качестве стабильного эталонного теста для контроля ростовых качеств селективных питательных сред для компилобактерий, Указанная задача достигается путем использования штамма С. jejunl, депонированного в коллекции Киевского научно-исследовательского института эпидемиологии и инфекционных болезней по № 11 ЖБ. Штамм выделен из содержимого кишечника курицы и характеризуется следующими признаками. Культурально-морфологические признаки. Грамотрицательные, спирально-изогнутые, неспорообразующие палочки, толщиной 0,2-0,5 мкм и длиной 0,5-5 мкм. Палочки могут иметь один или более витков. Могут быть также S-образными или напоминать крылья "чайки" при соединении двух клеток в короткую цепочку. Подвижные с характерным винтообразным движением, имеющие по одному полярному жгутику на одном или обоих концах клетки. Стареющие культуры способны переходить в кокковую форму, теряют жгутики. Расчет на твердых и полужидких селективных питательных средах: железо эритрит-кровяном агаре (ЖЕКА), среде для культивирования кампилобзктерий (г. Махачкала), среде с активированным углем (г. Москва), мясо-пептонно-печеночном агаре (МППА), среде Кмтта-Тароцци. На твердых средах может образовывать два типа колоний. Колонии первого типа негемолитические, сероватые, плоские, влажные, блестящие, как бы растекающиеся, прозрачные. Они очень напоминают капли конденсата водяных паров. При большой посевной дозе кампилобактерий (V 108 м. кл.) может быть сплошной рост, в виде влажной прозрачной пленки на поверхности питательной среды. Колонии второго типа также негемолитические, более плотные и оформленные, чем колонии первого типа, выпуклые, блестящие. На полужидких средах штамм С. Jejunl 11 ЖБ растет под поверхностью среды в виде сероватоголубоватого диска толщиной от 1 до 4 мм. Физиолого-биохимические признаки. Микроаэрофилы с дыхательным типом метаболизма. Необходимая концентрация кисло- ! рода 5-7% и углекислого газа 8-10%, Хемоорганотрофы. Углеводы не сбраживают. Кислых и нейтральных конечных продуктов не образуют. Не требуют сыворотки для роста. Энергию получают от аминокислот или промежуточных продуктов цикла три-карбоновых кислот. Желатину и мочевину не гидролизуют. Реакции с метиловым красным и ФогесаПроскауэра отрицательные. Каталазоположительные. Оксидазоположительные. Гидролизуют гиппурат натрия. Пигменты не Образуют. Нитратредуцирующие, Содержащие Г+Ц в ДНК 30-38 мол.%. Жирно-кислотный состав липидов, %: С10:0-0,9; С11;0-1,7; С12:0-2,2; С13:09.0; С14:1-0,5; -С14:0-30.1; С15:1 - следы; С15.0-11.0; С16:1- 16,1; С16:0-14,8; С17:0-7,5; С18:0-5,0. Сумма насыщенных жирных кислот - 82,2%. Маловирулентный. ЛДюдля белых мышей-1,9 Ю9 м.кл. Имеют следующий спектр антибиотико-резистентности: пенициллин, карбенициллин, тетрациклин. Чувствителен к эритромицину, левомицину, неомицину, ка-намицину, стрептомицину. Сохраняемость штамма. На среде для ! консервации следующего состава: вода дистиллированная - 75 мл; глицерин - 25,0 мл; пептон бактериологический сухой - 1,0 г; натрий хлористый - 0,5 г; (рН 7,2-7,4): при низких температурах (~60°С) штамм С. jejunl 11 ЖБ сохранял свои биологические свойства в течение всего срока наблюдения - 2 года; на полужидких средах - до 1 месяца; на чашках с твердой питательной средой -до 14 дней. Предлагаемый штамм в отличие от других штаммов кампилобактерий полностью сохраняет культурально-морфологические и физиолого-биохимические признаки при многочисленных пересевах на твердых питательных средах, что подтверждает его стабильность. Пассирование в течение двух лет не изменило его биологические свойства. Пример. Штамм С. jejunl 11 ЖБ выращивают на селективной плотной питательной среде следующего состава, г/л: ферментативный гидролизат казеина неглубокой степени расщепления - 14,5; натрий хлористый - 6,0; глюкоза медицинская - 4,8; натрий углекислый 0.5; тиогликолят натрия - 0,2; цистеина гидрохлорид 0,72; аэротолерантные добавки: железо сернокислое за* кисное, метабисульфат натрия, пирувэт натрия по 0,3; витаминный препарат экстракта кормовых дрожжей (сухой)- 4,7; агар-агар - 26,0; антибиотики: амфотерицин В -0,005; полимиксин М -0,001; рифампицин -0,01; ристомицин - 0,1. В среду дополнительно вносится дефибринированная и ге-молизированная баранья кровь - 21,2 рН 7,2. Готовая среда пригодна к использованию в течение 7 суток при хранении от +4 до 8°С. Можно использовать также железо-эритрит кровяной агар (ЖЭКА). среду для культивирования кампилобактеров (г, Махачкала), среду с активированным углем (г. Москва). Посевы инкубируют в течение 48 часов при 42°С в микроаэрофильных условиях, которые создают при помощи газогенерирую-щих. пакетов "Кампилогаз". Выросшую культуру смывают физиологическим раствором (рН 7,2), готовят бактериальную суспензию в концентрации 1 * 103 м. кл. и высеивают в дозе по 0,1 мл на три чашки испытуемой партии среды, культивируют в микроаэрофильных условиях 24-72 часа при 42°С с ежедневным просмотром определяют рост кампилобактерий, рассчитывают среднее число высохших колоний, и по числу выросших характерных колоний кампилобактерий (от 19 и больше) или сплошной рост, определяют ростовые Качества селективных питательных сред. В таблице приведены данные об эффективности контроля ростовых качеств селективной питательной среды при помощи штамма С, jejunl 11 ЖБ при бактериологических исследованиях. Использование нового штамма позволит повысить высеваемость возбудителя кампилобактериоза из различных объектов за счет отбора качественной селективной питательной среды в 1,9 раза.