Фармацевтична композиція з протизапальною, кардіо- та хондропротектною активністю та дією проти нпзп-гастропатій

Реферат: Винахід стосується фармацевтичної композиції з протизапальною, кардіота хондропротекторною активністю, дією проти гастропатій, що викликаються нестероїдними протизапальними засобами, яка містить диклофенак натрію в кількості 5-25 %, кверцетин у формі дигідрату або безводної субстанції в кількості 10-40 %, полівінілпіролідон в кількості 1050 %, лаурилсульфат натрію в кількості 0,25-10 %, мікрокристалічну целюлозу в кількості 20-40 %, кроскармелози натрієву сіль в кількості 1-15 % та стеарат магнію в кількості 0,25-5,0 % у розрахунку на загальну масу композиції. UA 102426 C2 (12) UA 102426 C2 UA 102426 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Винахід належить до фармації та медицини і стосується фармацевтичної композиції з протизапальною, кардіо- та хондропротекторною активністю, дією проти гастропатій, які викликаються нестероїдними протизапальними препаратами (НПЗП), та способів її отримання, яка може бути використана для профілактики й лікування запально-деструктивних захворювань різних систем та органів. Відомо, що НПЗП на фармацевтичному ринку України є найчисельнішою фармакотерапевтичною групою, яка охоплює більше 250 препаратів в різних лікарських формах [1] При визнаній терапевтичній ефективності НПЗП, їх застосування має ряд обмежень, які пов'язані з частими проявами побічної дії. Для прикладу, навіть нетривале лікування цими препаратами може привести до 25 % випадків побічної дії і, в тому числі, до 5 % - серйозної загрози для життя [2]. Незважаючи на значний асортимент НПЗП фармакологічна та фармацевтична наука продовжує інтенсивний пошук зі створення нових більш ефективніших та значно безпечніших лікарських засобів цієї фармако-терапевтичної групи. В цих дослідженнях часто за мету ставляться розробки оригінальних субстанцій з принципово новими механізмами фармакологічної дії, модифікації структури молекул відомих нестероїдних протизапальних субстанцій або розробка їх готових лікарських форм з новими фармацевтичними властивостями. Досить перспективними є пошуки зі створення комбінованих лікарських форм НПЗП з іншими фармакологічно активними сполуками [1]. Відкриття основних факторів фармакологічної дії НПЗП - двох ізоформ циклооксигенази (ЦОГ), а саме ЦОГ-1 та ЦОГ-2, в свій час, ініціювало створення препаратів нового покоління селективних та специфічних інгібіторів ЦОГ-2 [2, 3]. Однак, сучасна медична практика з різних причин все ж таки віддає перевагу відомим препаратам цієї фармакотерапевтичної групи. Тому найбільш визнаними НПЗП залишаються лікарські форми диклофенака, індометацина, ібупрофена та інших, які є добре вивченими за своєю терапевтичною ефективністю та побічною дією. З метою розширення терапевтичних можливостей відомих НПЗП та запобігання побічних ефектів важливим є пошук шляхів модифікації їх лікарських форм. Широкого терапевтичного застосування в медичній практиці при лікування багатьох хвороб знайшли препарати диклофенака натрію (ДН), які при значній лікувальній ефективності, на жаль, супроводжуються побічною дією, насамперед, проявами алергічних реакцій та, так званими, НПЗП-гастропатіями, що сумарно можуть складати до 85 % випадків. Навіть нетривале застосування невеликих доз препаратів НПЗП і, в тому числі ДН, може приводити до серйозних загрозливих порушень стану здоров'я. В таких випадках необхідно припинити застосування НПЗП та проводити корегуючу терапію. Препарати ДН створювались з метою зменшення проявів НПЗП-гастропатій у різних лікарських формах, проте це не вирішило проблему усунення їх гастротоксичності. Протизапальна дія ДН пов'язана з пригніченням синтезу простагландинів (ПГ) шляхом блокади ключового ферменту метаболізму арахідонової кислоти циклооксигенази (ЦОГ). Відомі ізоформи ЦОГ: ЦОГ-1, ЦОГ-2 та ЦОГ-3 виконують різну регуляторну роль в синтезі ПГ. Так, ЦОГ-1 контролює напрацювання ПГ, який забезпечує нормальне функціонування активних молекул клітини, синтез тромбоцитами тромбоксану А2, ендотеліальними клітинами та клітинами слизової оболонки шлунку простациклінів, ПГ Е2 та ін. ЦОГ-2 приймає участь в напрацюванні ПГ, які відповідають за процеси запалення, клітинної проліферації, деструкції клітин, мітогенезу та ін. У більшості клітин базальний рівень ЦОГ-2 досить незначний, проте експресія гена ЦОГ-2 здатна різко збільшуватися (більше ніж у 50 разів) внаслідок розвитку запалення. Протизапальна активність НПЗП має прямий зв'язок з інгібуванням ЦОГ-2, тоді як пригнічення ЦОГ-1 зумовлює розвиток побічних ефектів. Наведений узагальнений механізм дії всіх НПЗП стосується і зокрема ДН, протизапальні ефекти та побічна дія якого описуються тими ж складовими та принципово схожими механізмами. Відомими "класичними брендовими" препаратами диклофенака є лікарські засоби з торговою назвою Вольтарен® концерну Novartis Pharma в різних дозах та в різних лікарських формах. [4]. Препаратом швидкої дії є Вольтарен® рапід, таблетки вкриті цукровою оболонкою, 25 та 50 мг, №30, з активною речовиною диклофенака калію. Швидке досягнення препаратом аналгезії, зниження запалення та жару настає завдяки достатньо високої розчинності калієвої солі, позаяк забезпечується швидке створення достатньої терапевтичної концентрації активної речовини в крові. При досить високих терапевтичних показниках ефективності засобу Вольтарен® рапід в застереженнях до застосування увага акцентується на можливих випадках гастропатій, тобто виникнення шлунково-кишкових кровотеч або розвитку виразок в органах ШКТ навіть при відсутності в анамнезі пептичних виразок. 1 UA 102426 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Відома також фармацевтична композиція, що містить нестероїдний протизапальний засіб, сполуку для посилення його фармакологічної дії, зниження токсичності і побічних ефектів, та цільові добавки (Патент України № 79072, МПК: А61 К31/35, А61 К 31/616, А61 Р 29/00, 2007). Як агенти, що посилюють фармакологічну дію НПЗП і знижують їх токсичність і побічні ефекти використано, зокрема поліфенольні сполуки рослинного, навіть кверцетин, або тваринного походження вибрані із групи двохосновних карбонових кислот чи їх солей або амінокислот чи їх солей. Ці сполуки входять до складу фармацевтичної композиції разом з НПЗП, . Проте зазначена композиція не забезпечує високої протизапальної, кардіо-, хондропротекторної активності в поєднанні з мінімальним впливом на НПЗП-гастропатії. Відомий спосіб отримання фармацевтичної композиції, що містить диклофенак (патент РФ № 2424793, МПК А61К9/70, А61КЗ1/195, А61Р29/00, 2011), полягає у включенні ДН в композитну полімерну плівку. ДН попередньо рівномірно диспергують в суміші з набором допоміжних речовин, включаючи гідроксипропілметилцелюлозу, яка виконує функції харчової полімерної плівки. Фармацевтична композиція, одержувана таким способом у вигляді жувальної плівки сприяє швидкому вивільненню дисперсії ДН в порожнині рота пацієнта. Фармако-терапевтичні можливості фармацевтичної композиції ДН у вигляді харчової плівки досить обмежені, оскільки вона призначена виключно тільки для зручного перорального застосування і ніяк не вирішує проблеми НПЗП-гастропатій. Відомий також спосіб лікування ерозивно-виразкових ускладнень шлунку та дванадцятипалої кишки, викликаних ДН у хворих на остеатроз, що включає введення препарату ДН та як протекторного засобу препарату Гранул кверцетину (Патент України №3903, МПК:, 2009 p.). Препарат Гранули кверцетину (виробництва НВЦ "Борщагівський хімфармзавод") містить 40 мг активної речовини - кверцетину, в 1г гранул і його призначають додатково після введення ДН у дозі 1-2 г тричі на день до прийому їжі тим же курсом, що й ДН. Відомі фармацевтичні композиції, спосіб їх отримання та спосіб лікування, на жаль, не забезпечують високої протизапальної, кардіо- та хондропротекторної дії, не виявляють суттєвого впливу на НПЗП-гастропатії. В основу винаходу покладено задачу створення такої фармацевтичної композиції з протизапальною, кардіо - та хондропротекторною активністю, дією проти НПЗП-гастропатій та способу її отримання, в якому з введенням нових інгредієнтів та нового їх кількісного складу в фармацевтичній композиції, при застосуванні нових технологічних операцій в способі її отримання, забезпечувалась би висока протизапальна, кардіо-, хондропротекторна дія та максимальний вплив проти НПЗП-гастропатій. Поставлена задача досягається тим, що фармацевтична композиція з протизапальною, кардіо- та хондропротекторною активністю, а також з дією проти НПЗП-гастропатій, містить НПЗП та сполуку для посилення його фармакологічної дії, зниження його токсичності і побічних ефектів - кверцетин, а також цільові добавки. Згідно з винаходом, НПЗП ДН, додатковим протизапальним агентом є кверцетин та як цільові добавки солюбілізатор полівінілпіролідон та поверхнево-активна речовина - лаурилсульфат натрію являються основними компонентами фармацевтичної композиції та при певних технологічних операціях внаслідок механо-хімічної взаємодії утворюють комплекс з встановленими фармацевтичними та фармакологічними властивостями. При цьому у фармацевтичній композиції ДН міститься в кількості від 10,0 до 25,0 %. При цьому кверцетин, як дигідрат чи безводна субстанція, міститься в кількості від 10,0 до 40,0 % Крім того, як цільові добавки як солюбілізатор вибрано полівінілпіролідон в кількості 10,050,0 % та поверхнево-активна речовина - лаурилсульфат натрію 0,25-5,0 % в розрахунку на загальну масу композиції. При цьому фармацевтична композиція додатково містить один або декілька фармацевтично прийнятних наповнювачів. При цьому наповнювач містить щонайменше один зв'язуючий агент, один розпушувач, один змащуючий агент та один поверхнево активний агент. При цьому як зв'язуючий агент вибрано мікрокристалічну целюлозу в загальній кількості 10,0-65,0 %. При цьому як розпушувач вибрано кроскармелози натрієву сіль в загальній кількості 1,015,0 %. При цьому як змащуючий агент вибрано стеарат магнію в загальній кількості 0,25-5,0 %. Крім того фармацевтична композиція виконана у формі таблеток або капсул. Поставлена задача досягається також тим, що в способі отримання фармацевтичної композиції з протизапальною, кардіо- та хондропротекторною дією, а також з дією проти НПЗП 2 UA 102426 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 гастропатій, згідно з винаходом, попередньо ДН, кверцетин та цільові добавки змішують, компактують, розмелюють, отриману суміш змішують з фармацевтично прийнятними наповнювачами, або проводять суху або вологу грануляцію суміші, після того гранулятом наповнюють тверді желатинові капсули чи пресують і таблетки покривають полімерною плівкою. Згідно з винаходом розроблений спосіб дозволяє отримувати фармацевтичною композицією в лікарських формах таблеток вкритих плівковою оболонкою або капсули, що містять її складові компоненти у таких кількісних межах, в %: Диклофенак натрію 10,0-25,0 Кверцетин 10,0-40,0 Наповнювачі до 100. Обидві активні речовини нового лікарського засобу поєднувались у ньому з урахуванням знань про їх фармакологічні та лікувальні властивості, отриманні при застосуванні монопрепаратів на основі їх субстанцій. Підібрані цільові добавки, в силу своїх фізико-хімічних властивостей, сприяють солюбілізації активних субстанцій та їх досить високому розчиненню у водному фізіологічному середовищі шлунково-кишкового тракту. Протизапальна дія кверцетину має дещо нетрадиційний механізм, в основі якого лежить виражена антилейкотрієнова активність. Разом з тим слід зазначити, що фармакологічна дія кверцетину має багато інших позитивних властивостей, що дозволяє прогнозувати його незамінність в корекції запального процесу та доречність в складі композиційного препарату з ДН. Доцільність застосування кверцетину, з врахуванням його фармакодинаміки, в такому новому лікарському засобі - очевидна. Механізм протизапальної дії кверцетину схематично зводиться до інгібування 5ліпоксигенази (ЛОГ-5) - ключового ферменту біотрансформації арахідонової кислоти за ліпоксигеназним шляхом метаболізму. Біохімічна трансформація арахідонової кислоти закінчується утворенням кінцевих продуктів - лейкотрієнів, які і обумовлюють виникнення запальних процесів. Таким чином, блокування кверцетином подальшої стадії синтезу лейкотрієнів забезпечує гальмування цих негативних процесів. Разом з тим, для лейкотрієнів характерними є зниження інтенсивності кровопостачання органів, активація процесів перекисного окислення ліпідів (ПОЛ) та ін. [5,6]. Кверцетину властива ангіопротекторна, судинорозширююча, протизапальна, гепатопротекторна, жовчогінна дія. Він здатний знижувати інтенсивність процесів вільнорадикального окислення ліпідів, протеїнурії, гіперглікемії і також проявляти гіпоазотемічну та діуретичну дію [7-9]. Кверцетин завдяки антилейкотрієновій активності упереджує ушкодження ендотелію судин ішемізованої ділянки та зменшує постішемічні порушення мікроциркуляції - патологічні стани, які мають місце з участю лейкотрієнів [10-12]. Кверцетин, на відміну від традиційних НПЗП, не тільки не проявляє ульцерогенної дію, але й навпаки, створює гастропротектний ефект завдяки здатності пригнічувати функціонування Н+К+-АТФ-ази (зниження синтезу соляної кислоти). Він також здатний стимулювати напрацювання клітинами слизової оболонки шлунку цитопротекторного простагландину Е2 та зменшувати кількість активних форм кисню в тканині шлункової стінки [6]. Комбінований препарат ДН з кверцетином - невідомий. Поєднання в лікарській формі цих двох активних речовин з різними фізико-хімічними властивостями є досить складним завданням для фармації. Вирішення поставленої задачі в технічному плані здійснювалось послідовними операціями розробки технології виготовлення фармацевтичної композиції та у відповідності з фармакопейними методами її дослідження. Насамперед, фармацевтична розробка фармацевтичної композиції розпочиналась з оцінки фізико-хімічних властивостей ДН та кверцетину і, насамперед, орієнтуючись на їх здатність розчинятись у водних середовищах з тим, щоб ці активні речовини мали максимальну біодоступність при пероральному застосуванні лікарського засобу у фізіологічних умовах шлунку. Досягти високої розчинності обох субстанцій можливо тільки при застосуванні допоміжних речовин з властивостями солюбілізаторів. Такими модуляторами розчинності є полівінілпіролідони (повідони, ПВП) та лаурилсульфат натрію (ЛСН), кількісні величини їх введення в фармацевтичну композицію було визначено при фармацевтичній розробці складу, орієнтуючись на профілі розчинності зразків, виконуючи тест "Розчинність". Досліджуючи кінетику розчинення зразків фармацевтичної композиції, як грануляту в капсулі так і таблеток, при змінних масових величинах ПВП та ЛСН було встановлено оптимальне їх співвідношення з кверцетином. Відомо, що в силу особливості кристалічної структури кверцетину розчинність 3 UA 102426 C2 5 10 15 20 25 30 35 його субстанції дуже низька (1 мг в 100 мл води). Комплексування його з ПВП шляхом механохімічної взаємодії, тобто пресуванням початкового грануляту (компактування) дозволило підвищити розчинність біофлаваноїда до 200 мг в 100 мл води. Таким чином, отриманий комплекс кверцетину з ПВП практично однаково розчиняється у водних розчинах з різними показниками рН, які за фармацевтичними вимогами імітують фізіологічне середовище організму. Результати співрозчинності кверцетину з різними марка ПВП представлено графіком 1 (фіг.1). Для забезпечення фізико-хімічної стабільності комплексу вагове співвідношення між кверцетином та ПВП має знаходитись в межах 1:1-1:3. Слід зазначити, що ці масові величини ПВП також є достатніми для підвищення розчинності субстанції ДН внаслідок утворення відповідної комплексної сполуки. Ці повідони за молекулярними масами відрізняються таким чином: К90-1 000 000; К25-30 000; С17-10 000. Враховуючи характеристики кінетики розчинення комплексу кверцетину з ПВП була підібрана достатня кількість ЛСН - поверхнево-активної речовини, яка сприяє швидкому та рівномірному змочуванню поверхні комплексного грануляту. Це сприяє прискоренню розчинення комплексу в початковий час і, таким чином, дозволяє створити оптимальні умови для всмоктування стінками шлунку розчинної форми кверцетину. При значній гідрофобності поверхні кристалів ДН ці вибрані допоміжні речовини - ПВП та ЛСН, також сприяють розчинності цієї субстанції, а тим самим підвищенню біодоступності цього НПЗП. Розчинність кверцетину та його композитів з ПВП та ЛСН з часом наведено на графіку 2 (фіг.2). Всі зразки фармацевтичної композиції, починаючи з комплексу активних речовин кверцетину і ДН з ПВП і ЛСН, отримували в умовах послідовних технологічних операцій шляхом сухою або вологою грануляції інгредієнтів комплексу та допоміжних речовин. Приготовані гранули застосовувалися для наповнення капсул або їх таблетували і досліджували розчинність цих лікарських форм відповідно до фармакопейним тестом "Розчинення". Характеристики розчинності ДН та кверцетину у фармацевтичній композиції свідчили про значно більш високу розчинність цих активних інгредієнтів порівняно з розчинністю індивідуальних субстанцій. Таким чином, в ході фармацевтичної розробки був виготовлений зразок фармацевтичної композиції, визначеного складу (див. Табл. 1), названий авторами "Диклокор", який знайшов застосування в дослідженнях фармакологічних властивостей. Характеристики розчинності ДН та кверцетину у фармацевтичній композиції свідчили про значно більш високу розчинність комплексу активних інгредієнтів порівняно з розчинністю індивідуальних субстанцій. Таким чином, в ході фармацевтичної розробки був виготовлений зразок фармацевтичної композиції, названий авторами винаходу "Диклокор", який знайшов, як препарат певного складу, застосування в дослідженнях токсико-фармакологічних властивостей. Таблиця 1 Склад і співвідношення інгредієнтів на одну капсулу фармацевтичної композиції Диклокор чи таблетку № п/п Найменування інгредієнтів 1 2 1. Кверцетин 2. Полівінілпіролідон К-25 3. Диклофенак натрію 4. Целюлоза мікрокристалічна 5. Кроскармелоза натрію 6. Лаурилсульфат натрію 7. Магнію стеарат Вміст капсули чи ядра таблетки: 40 мг 3 40,00 40,00 25,00 80,00 10,00 3,00 2,00 200,00 % 4 20,00 20,00 12,50 40,00 5,00 1,50 1,00 100,00 Фармацевтична композиція наведеного складу отримується за технологією сухої грануляції, яка включає змішування активних речовин з наповнювачами, гранулюванням суміші на компактері або брикетуванням, змішування грануляту з наповнювачами та пресування суміші у таблетки або наповнення нею твердих желатинових капсул; або технологією вологої грануляції, яка відрізняється стадією гранулювання суміші, де замість компактера або преса використовується обладнання для вологої грануляції та сушарка, таке як гранулятор - змішувач з мішалками або гранулятор-сушарка псевдокиплячого шару. 4 UA 102426 C2 5 10 Наводимо конкретні приклади здійснення винаходу, які ілюструють аспекти даного винаходу, але не повинні розглядатися як такі, що мають обмежувальне значення. Приклад 1. Наважки субстанцій кверцетину, диклофенаку натрія, полівінілпіролідону (поліпласдон К-25) та лаурилсульфату натрію змішують в грануляторі і пресують за допомогою компактеру, отриману брикетовану суміш розмелюють в млині, просіюють і до отриманого грануляту в грануляторозмішувачі додають раніш приготовану суміш з целюлози мікрокристалічної та кроскармельози натрієвої солі, після 2-3-х годин змішування гранулят опудрюють магнію стеаратом протягом 30 хвилин. Отриманий гранулят передають на наповнення желатинових капсул чи на таблетування. Таким чином отримують зразок фармацевтичної композиції наведений в таблиці 2. Ядра таблеток вкривають готовою сумішшю Colorcon Opadry ІІ. Таблиця 2 Склад і співвідношення інгредієнтів фармацевтичної композиції на одну капсулу чи таблетку № п/п Найменування інгредієнтів 1 2 1. Кверцетин 2. Полівінілпіролідон К-25 3. Диклофенак натрію 4. Целюлоза мікрокристалічна 5. Кроскарсмелози натрієва сіль 6. Лаурилсульфат натрію 7. Магнію стеарат Вага капсули чи ядра таблетки: 15 20 мг 3 40,00 80,00 25,00 71,85 13,00 3,0 2,15 235,00 % 4 17,02 34,04 10,63 30,57 5,53 1,27 0,91 100,00 Тести "Розпадання", "Розчинення" та "Рівномірність дозування" виконуються у відповідності до ДФУ. Приклад 2. Субстанції кверцетину, диклофенаку натрію, полівінілпіролідону (поліпласдон К25) та лаурилсульфат натрію переносять в гранулятор-змішувач типу Rota P, додають целюлозу мікрокристалічну та кроскармелози натрієву сіль, суміш перемішують протягом 30 хвилин, до неї поступово при перемішуванні додають достатню кількість води очищеної, вологий гранулят перемішують протягом 2-х годин при кімнатній температурі. Сушка грануляту здійснюється в вакуумі, включивши обігрів протягом 3-4 години. Сухий гранулят опудрюють магнію стеаратом протягом 40 хвилин. Готовий гранулят далі застосовують для виготовлення готових лікарських форм. Таким чином, отримують зразок фармацевтичної композиції, склад якої наведено в таблиці 3. 25 Таблиця 3 Склад і співвідношення інгредієнтів фармацевтичної композиції на одну капсулу чи таблетку № п/п Найменування інгредієнтів 1 2 1. Кверцетин 2. Полівінілпіролідон К-25 3. Диклофенак натрію 4. Целюлоза мікрокристалічна* 5. Кроскармелоза натрію 6. Лаурилсульфат натрію 7. Магнію стеарат Вага капсули чи ядра таблетки мг 3 40,00 140,00 25,00 65,50 21,00 5,00 3,50 300,00 % 4 13,33 46,67 8,33 21,83 7,00 1,67 1,17 100,00 Приклад 3. Суміш субстанцій кверцетину, диклофенаку натрію, полівінілпіролідону (поліпласдон К-25) та лаурилсульфату натрію переносять в гранулятор-сушарку псевдокиплячого шару типу Huttling. Суміш за допомогою стисненого очищеного повітря 5 UA 102426 C2 5 перемішують протягом 30 хвилин, потім додають целюлозу мікрокристалічну та кроскармелози натрієву сіль і перемішують протягом 30 хвилин. Сухий гранулят зволожують при інтенсивному перемішуванні з поступовим розбризкуванням достатньої кількості води очищеної. Подаючи підігріте повітря гранулят перемішують протягом 2-х годин і потім опудрюють магнію стеаратом при перемішуванні протягом 30 хвилин. Отриманий гранулят далі застосовують за призначенням. Таким чином, отримують зразок фармацевтичної композиції наведений в таблиці 4. Таблиця 4 Склад зразку фармацевтичної композиції отриманий за прикладом 3 №п/п Найменування інгредієнтів 1. Кверцетин 2. Полівінілпіролідон К-25 3. Диклофенак натрію 4. Целюлоза мікрокристалічна 5. Кроскармелози натрієва сіль 6. Магнія стеарат 7. Лаурилсульфат натрію Вага капсули чи ядра таблетки 10 мг 40,00 40,00 50,00 92,00 15,00 2,00 6,00 245,0 % 16,67 16,67 20,83 38,33 6,25 0,83 2,50 100,0 Приклад 4. До отриманого за прикладом 1 компактованого грануляту субстанцій кверцетину, диклофенаку натрію, полівінілпіролідону та лаурилсульфату натрію в гранулятор-сушарці псевдокиплячого шару типу Huttling додають з інтервалом 30-40 хвилин послідовно з інтенсивним перемішуванням кроскармелози натрієву сіль та целюлозу мікрокристалічну, а в кінці магнію стеарат. Отриманий гранулят передають на виготовлення капсул чи таблеток. 15 Таблиця 5 Склад зразку фармацевтичної композиції отриманий за прикладом 4 № п/п Найменування інгредієнтів 1 2 1 Кверцетин 2 Полівінілпіролідон К-25 3 Диклофенак натрію 4 Целюлоза мікрокристалічна 5 Кроскармелози натрієва сіль 6 Магнія стеарат 7 Лаурилсульфат натрію Вага капсули чи ядра таблетки 20 25 мг 3 60,00 50,00 25,00 92,00 16,00 2,00 5,00 250,0 % 4 24,00 20,00 10,00 36,80 6,40 0,80 2,00 100,0 Доклінічне вивчення фармацевтичної композиції здійснювалось при застосуванні зразка Диклокора в тестах дослідження з метою встановлення в повному об'ємі токсикофармакологічних властивостей як майбутнього препарату, який може стати перспективним лікарським засобом. Приклад 5. Дослідження гострої токсичності Диклокору при пероральному введенні. Експериментальні дослідження проводились за методом В. Б. Прозоровського [13] в діапазоні доз 500-1500 мг/кг за сумою діючих речовин при внутрішньошлунковому введенні Диклокору мишам та щурам. Спостереження за тваринами проводились протягом двох тижнів після введення препарату. Результати дослідження наведені у таблиці 6. 6 UA 102426 C2 Таблиця 6 Показники летальності при вивченні гострої токсичності Диклокору (n=72) Доза мг/кг 500 700 900 1100 1300 1500 5 10 15 Летальний ефект, загибель тварин/кількість тварин миші щурі 0/6 0/6 1/6 1/6 2/6 3/6 3/6 4/6 4/6 5/6 6/6 6/6 Середня летальність, % миші 0 16,7 33,3 50,0 66,7 100 щурі 0 16,7 50,0 66,6 83,3 100 Середньолетальну дозу Диклокору розраховували на підставі залежності рівня летальності від використаної дози методом пробіт-аналізу [13]. У результаті розрахунків було визначено, що ЛД50 Диклокору для мишей складає 1051,3±52,5 мг/кг (404,2 мг/кг за ДН), та для щурів 952,5±45,2 мг/кг (366,5 мг/кг за ДН). З урахуванням того, що згідно даних літератури показник гострої токсичності ДН для мишей при пероральному введенні складає 172-370 мг/кг [14-16], а для щурів 53-95 мг/кг [17-19], отримані дані свідчать про виражене зниження токсичності ДН досліджуваного препарату завдяки його поєднанню з кверцетином в одній лікарській формі. Таким чином, результати вивчення токсикологічних характеристик Диклокору у мишей та щурів дозволяють віднести даний засіб згідно загальноприйнятої класифікації токсичності К. К. Сидорова до класу малотоксичних речовин (501 мг/кг5000 мг/кг). Приклад 6. Дослідження середньоефективних доз Диклокору в умовах розвитку експериментального запалення. Вивчення середньоефективних доз Диклокору проводили на моделі карагенінового набряку кінцівок у щурів [14], з використанням препарату у дозах 5, 10 та 20 мг/кг за сумою діючих речовин, що відповідає приблизно 1/200, 1/100 та 1/50 показнику ЛД 50- Показник ЕД50 визначали методом пробіт-аналізу залежності "активність-доза" станом на 3 годину після введення флогогену [13]. Результати дослідження наведено в таблиці 7. 20 Таблиця 7 Вплив Диклокору на перебіг карагені нового набряку стопи у щурів через 3 години після введення флогогену (n=40) Дослідна група Доза, мг/кг Приріст об'єму стопи, у.о. Контрольна патологія Диклокор Диклокор Диклокор 5,0 10,0 20,0 36,8±2,1 33,4±1,6 23,5+0,9* 17,6±0,7* Антиексудативна активність, % 9,2±0,4 36,1±1,3 52,2±2,2 Примітка. * - р