Спосіб отримання епітеліальних клітин підшлункової залози

Реферат: Спосіб отримання епітеліальних клітин підшлункової залози, у який входить отримання пунктату підшлункової залози та подрібнення отриманої тканини на фрагменти, причому фрагменти піддають 8-12 годинній трипсинізації у 0,25 %-ому розчині трипсину у співвідношенні об'єму тканини до ферменту 1:10 при температурі 5-8 °C, після чого фрагменти культивують без попередньої дезагрегації на клітини. UA 102631 U (12) UA 102631 U UA 102631 U 5 10 15 20 25 30 Корисна модель належить до галузей ветеринарної медицини та біотехнології. Відомий аналог (Protocol 23.7. Pancreatic Epithelium /Culture of animal cells. A manual of basic technique //Edited by R.Ian. Freshney John Wiley 2005-642 p.), згідно якого отриманий в 3 асептичних умовах пунктат підшлункової залози подрібнюють на фрагменти розміром 1-3 мм та дезагрегують за допомогою магнітної мішалки у суміші ферментів: 0,25 % трипсину та колагенази (1800 ОД) у співвідношенні (2:1) протягом 15 хв при температурі 37 °C. Суспензію клітин відбирають, а до фрагментів додають нову порцію ферментів та повторюють процедуру 3-4 рази до повного виснаження тканин. Отриману суспензію клітин центрифугують, надосадову рідину видаляють, а клітини ресуспендують у культуральному середовищі. Недоліком даного аналога є значне пошкодження клітин ферментами (висока активність ферментів при температурі 37 °C) та механічною дією магнітної мішалки, в результаті чого спостерігається масова загибель клітин як під час дезагрегації тканин, так і під час їх культивування внаслідок вивільнення ферментів та інших продуктів. Задачею корисної моделі є вдосконалення способу отримання епітеліальних клітин підшлункової залози, який може бути використаний для напрацювання біологічного матеріалу з метою подальшого його застосування. Поставлена задача досягається тим, що у способі отримання епітеліальних клітин підшлункової залози, в який входить отримання пунктату підшлункової залози та подрібнення отриманої тканини на фрагменти, згідно пропонованого рішення, фрагменти піддають 8-12 годинній трипсинізації у 0,25 %-ому розчині трипсину у співвідношенні об'єму тканини до ферменту 1:10 при температурі 5-8 °C, після чого фрагменти культивують без попередньої дезагрегації на клітини. Спосіб здійснюється наступним чином. 3 Фрагменти підшлункової залози розміром 1-3 мм вносять у стерильну пробірку та заливають 0,25 %-им розчином трипсину (співвідношення об'єму тканини та ферменту - 1:10). Пробірку поміщають на 8-12 годин в умови побутового холодильника при температурі 5-8 °C. Після ферментативної обробки фрагменти підшлункової залози обережно центрифугують при 300 g протягом 10 хв. Надосадову рідину видаляють, а фрагменти тканини переносять до культурального посуду, після чого додають відповідну кількість поживного середовища. Технічним рішенням пропонованої корисної моделі є те, що вдається мінімізувати ферментативне та механічне пошкодження епітеліальних клітин і, як наслідок - підвищити їх проліферативну активність, що здешевлює та значно прискорює процедуру їх отримання. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 35 40 Спосіб отримання епітеліальних клітин підшлункової залози, у який входить отримання пунктату підшлункової залози та подрібнення отриманої тканини на фрагменти, який відрізняється тим, що фрагменти піддають 8-12 годинній трипсинізації у 0,25 %-ому розчині трипсину у співвідношенні об'єму тканини до ферменту 1:10 при температурі 5-8 °C, після чого фрагменти культивують без попередньої дезагрегації на клітини. Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 1