Спосіб отримання нейральних стовбурових клітин кота

Реферат: Спосіб отримання стовбурових клітин із нервової тканини кота, у який входить отримання нервової тканини головного мозку, внесення у культуральний посуд, культивування у середовищі. Фрагменти нервової тканини вносяться у культуральний посуд, щільно накриваються покривними скельцями, а культивування відбувається без додавання фактору росту фібробластів, після формування колоній клітин, вилучаються покривні скельця з чашок, при конфлюентності моношару 70-80 % знімаються клітини з культурального посуду, фільтруються, промиваються у фосфатно-буферному розчині, субкультивуються 3-4-ри пасажі з метою зниження гетерогенності культури. UA 112379 U (12) UA 112379 U UA 112379 U 5 10 15 20 25 30 35 40 Корисна модель належить до галузей ветеринарної медицини та біотехнології. Відомий аналог (Yan Ho Chan, Are newborn rat-derived neural stem cells more sensitive to lead 1 1,2 neurotoxicity? Yan Ho Chan, Mingyong Gao, and Wutian Wu // Neural Regen Res. 2013 Mar 5; 8(7): 581-592. doi: 10.3969/j.issn.1673-5374.2013.07.001 PMCID: PMC4145982), за яким виділяли клітини з гіпокампа ембріона миші, пропускали через клітинний фільтр, центрифугували суспензію клітин з метою відмивання, нашаровували на перколл, знімали та відмивали клітини, вносили їх у культуральне середовище з фактором росту фібробластів для культивування. Недоліком даного способу є достатньо активний механічний (пропускання через клітинний фільтр, неодноразове промивання первинного матеріалу), та агресивний хімічний (застосування перколлу) вплив на клітини. Як наслідок, відбувається ушкодження нервових клітин. Окрім того, ця методика передбачає застосування реактиву (фактора росту фібробластів), який має високу вартість, що призводить до збільшення вартості процедури їх отримання. Також процес виділення гіпокампа з головного мозку передбачає застосування додаткового устаткування, що в деяких випадках унеможливлює використання вказаного способу. Задача корисної моделі є вдосконалення способу отримання мезенхімальних стовбурових клітин із нервової тканини кота, який може бути використаний для напрацювання біологічного матеріалу з метою подальшого його застосування. Поставлена задача вирішується тим, що спосіб отримання стовбурових клітин із нервової тканини кота, у який входить отримання нервової тканини головного мозку, внесення у культуральний посуд, культивування у середовищі, згідно пропонованого рішення фрагменти нервової тканини вносяться у культуральний посуд, щільно накриваються покривними скельцями, а культивування відбувається культуральному у середовищі без додавання фактору росту фібробластів, після формування колоній клітин, вилучаються покривні скельця з чашок, при конфлюентності моношару 70-80 % клітини знімаються з культурального посуду, фільтруються, промиваються у фосфатно-буферному розчині, субкультивуються 3-4-ри пасажі з метою зниження гетерогенності культури. Спосіб здійснюється наступним чином. Стерильно відбирали нервову тканину головного мозку у новонародженого кота. Отримані фрагменти нервової тканини розміщували у культуральних чашках щільно накривали покривними скельцями і додавали середовище для культивування Ігла, модифіковане Дюльбекко (DMEM), 15-20 % фетальної сироватки бичків (FBS), 1 % антибіотика-антимікотика. Чашки з фрагментами нервової тканини культивували за стандартних умов у СО 2 інкубаторі за температури 37 °C із вмістом СO2 5 %. При формуванні колоній нейтральних клітин покривне скельце вилучали. При досягненні конфлюентності моношару 70-80 % клітин нервової тканини знімали з дна культурального посуду, фільтрували, промивали фосфатнобуферним розчином та проводили субкультивування 3-4-ри пасажі з метою зниження гетерогенності культури. Технічним рішенням способу отримання нейральних стовбурових клітин із нервової тканини кота вдається уникнути ушкоджуючого механічного та хімічного впливу на клітини, зберегти тканинні цитокіни і фактори росту та забезпечити їх надходження з фрагментів нервової тканини у середовище і тим створити їх необхідну концентрацію, що має вирішальне значення для проліферації стовбурових клітин, особливо у первинній культурі, та здешевити процедуру їх отримання. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 45 50 Спосіб отримання стовбурових клітин із нервової тканини кота, у який входить отримання нервової тканини головного мозку, внесення у культуральний посуд, культивування у середовищі, який відрізняється тим, що фрагменти нервової тканини вносяться у культуральний посуд, щільно накриваються покривними скельцями, а культивування відбувається без додавання фактору росту фібробластів, після формування колоній клітин, вилучаються покривні скельця з чашок, при конфлюентності моношару 70-80 % знімаються клітини з культурального посуду, фільтруються, промиваються у фосфатно-буферному розчині, субкультивуються 3-4-ри пасажі з метою зниження гетерогенності культури. Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 1