Спосіб отримання збагаченої суспензії стовбурових нейральних клітин

Спосіб отримання збагаченої суспензії стовбурових нейральних клітин, що включає виділення 3 71388 4 Спосіб відтворюють наступним чином: в стеклітини гинуть, а залишаються переважно тільки рильних умовах нативну мозкову тканину (ембріожиттєздатні переживаючі малодиференційовані нальну або неонатальну) переносять у фізіологічабо недиференційовані клітини, що належать до ний розчин, звільняють від оболонок, переносять у прогеніторних і стовбурови х нейральних клітин. середовище ДМЕМ і суспендують шприцом з товсДодавання в культиваційне середовище ретинола тою голкою. Дають відстоятись 3хв і надосад пеацетату стимулює проліферацію клітинреносять у скляні пеніцилінові флакони у кількості попередників і стовбурових клітин; відбувається 2х106 клітин в 1мл. Кожних 3 дні половину культузростання кількості клітин у 2-5 разів. Клітини, рального середовища оновлюють. На 4-5 добу від отримані зазначеним способом, зберігають свою початку культивування в культуральне середовиполіпотентність і здатність до диференціювання in ще додають ретинола ацетат (0,2мг/мл, АО “Київvitro у нейробласти і гліальні клітини. ський вітамінний завод”). Література: Застосування культивування клітин у збідне1. Полтавцева Ρ.Α., Марей М.В., Дубровина ному безсироватковому середовищі ДМЕМ і при И.В. и др. Анализ развития стволовых нейральных додаванні ретинола ацетату супроводжувалось клеток человека in vitro // Цитология. C ytology. наступною кінетикою суспензійних культур попе2001. - Т.43, №9. - С.884-885. редників нейроклітин (рис.1). При культивуванні 2. Barami К., Zhao J., Diaz F.G., Lyman W.D. клітин у безсироватковому середовищі ДМЕМ відComparison of neural precursor cell fate in second бувалось зниження кількості клітин: у 1,5-2 рази на trimester human brain and spinal cord // Neurol. Res. 5-7-у добу, в 3-4 рази - на 9-у добу. Кількість клітин - 2000. - 23(2-3). -P.260-6. продовжувала знижуватись до кінця спостережен3. Ben-Hur Т., Rogister В., Murray K. et al. ня (21 доба). Навпаки, при культивуванні клітин у Growth and fate ofPSA-NC AM+ precursors of the середовищі ДМЕМ+ретинола ацетат, котрий ввоpostnatal brain // J. оf Neuroscience. - 1998. дили у поживне середовище на 5-у добу, значного 18(15):5777-5788. зниження кількості клітин в культурі не відбува4. Caldwell M.A., He X., Wilkie N. et al. Growth лось, їх кількість починала зростати з 7 дня кульfactors regulate the survival and fate of cells derived тивування і збільшувалась на 9-12 день культивуfrom human neurospheres // Nat.Biotech. -2001. вання в 2 і більше разів, досягаючи початкової 19(5). - P.475-9. кількості клітин. Таким чином, додавання в культи5. Carpenter M.K., Cui X., Hu Z.Y. et al. In vitro ваційне середовище ретинола ацетату сприяло expansion of a multipotent poppulation of human виживанню і розмноженню клітин. neural progenitor cells // Exp.Neurol. - 1999. - V.158, Динаміка суспензійної культури нейроклітин у N.2, - P.265-278. без сироватковому середовищі ДМЕМ і при дода6. Ciccolini F. Identification of two distinct types of ванні ретинола ацетату наведена на рис.1. multipotent neural precursors that appear sequentially Тривале спостереження за культивуванням in during CNS development // Моl. Cell Neurosci. vitro нейроклітин з різних джерел (ембріональний 2001. - 17(5). - P.895-907. мозок щура, кроля, людини, неонатальний мозок 7. Johe R.R., Hazel T.G., Muller T. et al. Single щура) показало, що на 9-у добу культивування у factors direct the differentiation of stem cells from the безсироватковому середовищі ДМЕМ відбувається fetal and adult central nervous system // genes and зниження кількості клітин в 3-4 рази, що свідчить development - 1996. - 10:3129-3140. про те, що до цього терміну всі диференційовані Комп’ютерна в ерстка В. Мацело Підписне Тираж 37 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601