Спосіб консервації рогової оболонки ока

Изобретение относится к медицине, конкретно к офтальмологии, и может быть использовано для повышения жизнеспособности и увеличения сроков хранения роговой оболочки в процессе ее консервации. Известен способ консервации роговой оболочки по методу акад. В.П.Филатова, заключающийся в хранении донорских глаз во влажной камере при температуре ... +2 ... +4°С, который считается наилучшим. Этот способ консервации роговой оболочки, ставший классическим, является в настоящее время основным "поставщиком" трансплантационного материала для кератопластики, однако, срок хранения роговицы, особенно в целях сквозной кератопластики, ограничен до 2 сут. При этом установлено, что одним из условий, играющих определяющую роль в исходе кератопластики, является сохранность заднего эпителия роговой оболочки, который в наибольшей мере подвержен структурно-морфологическим изменениям в процессе консервации. Таким образом, способ консервации роговой оболочки по методу В.П.Филатова обладает существенным недостатком, состоящим в ограничении срока хранения энуклеированных глаз, превышение которого грозит выраженным изменением донорской роговицы, особенно ее эпителиальных элементов, что делает ее непригодной для использования в клинике при кератопластике. Задачей изобретения является совершенствование способа консервации роговой оболочки глаза путем помещения глазного яблока в холодильную камеру в полом цилиндре из ферромагнитного материала и воздействуют в течение всего времени хранения однородным постоянным магнитным полем индукцией 12-15 мТл при расположении полюсов на его противоположных торцах и направлении вектора магнитного поля параллельно оси цилиндра и перпендикулярно роговой оболочке, в результате чего повышается жизнеспособность и увеличиваются сроки хранения роговой оболочки глаза. Основанием для предложенной технологии послужили экспериментальные исследованиях, проведенные в четырех группах опытов, В первой группе изучалось влияние постоянного магнитного поля на митотические процессы в переднем эпителии роговой оболочки с применением напряженности 12-15 мТл. Исследования произведены на глазах 170 лягушек в прижизненных условиях. После воздействия, глаза энуклеировались. роговая оболочка выделялась и исследовалась под микроскопом фирмы "Карл Цейс" на предмет выявления стадий митотического цикла в переднего эпителия роговицы. Исследования показали, что под влиянием данного воздействия происходит достоверное увеличение числа эпителиальных элементов, которое достигает максимума через 7 ч после воздействия, затем наступает постепенное уменьшение их количества с последующей нормализацией к исходу 3-х суток наблюдений. Анализ стадий митотического цикла показал, что стимуляция происходит как за счет увеличения клеток вступающих в митоз на стадиях интерфазы, так и благодаря увеличению общего числа делящихся клеток на всех этапах митотического цикла. Установлено при этом, что в случае ориентации вектора направленности магнитного поля перпендикулярно роговице, число делящихся клеток было на порядок выше, чем при ориентировании его параллельно роговой оболочке. Во второй группе опытов в аналогичных условиях проводилось изучение влияния постоянного магнитного поля на процесс деления передне-эпителиальных элементов с применением напряженности 36 мТл. Эти исследования показали, что в данных условиях происходит выраженное угнетение процесса митоза клеток переднего эпителия роговицы вплоть до полного подавления, которое наблюдается уже через 3 часа после воздействия. При этом установлено, что восстановление митотической способности клеток переднего эпителия наблюдается лишь спустя 5 суток и является более выраженным в случае ориентирования вектора магнитного поля перпендикулярно к роговой оболочке. В третьей группе опытов электронно-микроскопически изучалось структурно-функциональное состояние клеточных и субклеточных элементов переднего и заднего эпителия под влиянием постоянного магнитного поля напряженностью 12-15 мТл и 36 мТл при той же экспозиции воздействия. Установлено, что напряженность магнитного поля 12-15 мТл вызывает в изучаемых клеточных элементах усиление внутриклеточных процессов и метаболических превращений, особенно со стороны белкового синтеза. При напряженности поля 36 мТл отмечалось его повреждающее действие, особенно на клеточные элементы заднего эпителия, что сопровождалось разрывом клеточных мембран, разрушением и гомогенизацией клеточных структур. В четвертой группе опытов проводили исследования по консервации роговой оболочки в условиях по В.П.Филатову с применением постоянного магнитного поля индукцией 12-15 мТл. Данные исследования проведены на энуклеированных глазах кроликов с учетом набухания роговой оболочки и состояния клеток заднего эпителия. При этом глаза во влажной камере размещались в источнике магнитного поля цилиндрической формы с направленностью вектора магнитной индукции перпендикулярно и параллельно плоскости роговой оболочки. Для изучения сохранности и жизнеспособности переднего и заднего эпителия роговицы применялись методы "прижизненного" контроля за набуханием роговицы и состоянием заднего эпителия при помощи эндотелиального микроскопа HS-CEM-3 Фирмы Heyer-Schulze (США), а также известные гистоморфологические методы приготовления и окрашивания срезов роговицы. Проводился также подсчет клеточных элементов переднего и заднего эпителия в центральном участке роговой оболочки на площади 1 мм2 с последующей статистической обработкой полученных цифровых данных и определением достоверности полученных результатов. В общей сумме эта работа выполнена на 42 глазах кроликов с изучением их на протяжении 7 суток консервации. Результаты исследования показали, что в процессе консервации роговой оболочки отмечается отек роговичной ткани, снижение ее прозрачности, уменьшение ее клеточных элементов, вакуолизация стромы роговицы. При этом, в случае ориентации вектора направленности магнитного поля перпендикулярно роговой оболочке разница в набухании между контролером и опытом была достоверно ниже на 9-2% в пользу постоянного магнитного поля. В случае ориентирования его продольно к роговой оболочке отек был меньше в опыте на 4,7%, но не носил достоверного различия. Установлено, что в контрольной группе наблюдений передний эпителий роговицы в процессе консервации претерпевает выраженные изменения, заключающиеся в уменьшении способности ядер поглощать краситель, в увеличении межклеточных пространств и резком нарушении архитектоники слоев. Особенно резкими эти сдвиги были на протяжении первых 1-2 сут наблюдений. В дальнейшем они прогрессировали, выражаясь в нарушении клеток переднего эпителия и уменьшении их количества, достигая максимума к исходу 7 суток наблюдений, по истечении которых наблюдалась дезинтеграция слоев и нарушение переднего эпителия. Применение постоянного магнитного поля вызывало уменьшение описанных явлений, способствовало хорошей сохранности клеток переднего эпителия и сохранению его жизнеспособности. Об этом свидетельствовали высокие тинкториальные свойства клеток. Они имели хорошую архитектонику, а их количество на протяжении всего срока наблюдений почти на 50% было выше, чем в контроле в случае перпендикулярного ориентирования вектора магнитного поля; продольное его ориентирование обеспечивало сохранность, которая была выше на 36,8% (Р