Спосіб оцінки функціональної активності вазопресинергічної системи гіпоталамусу щурів

Спосіб оцінки функціональної активності вазопресинергічної системи гіпоталамусу щурів, який включає проведення імуногістохімічного дослідження зрізів мозку, визначення вмісту вазопресину в супраоптичному та паравентрикулярному ядрі гіпоталамусу та визначення кількісних характерис 3 13283 4 - застосування імуногістохімічного методу висамців щурів, що дозволить оцінювати функціонавчення зрізів мозку; льну спроможність вазопресинсинтезуючої систе- вивчення кількісних характеристик синтезу ми гіпоталамусу експериментальних тварин. вазопресину. Спосіб здійснюють таким чином: для провеЦей спосіб є недостатньо ефективним, тому дення експерименту використовують 20 статевозщо по-перше, імуноферментний аналіз передбарілих самців щурів лінії Вістар масою 220-240г. чає велику кількість проміжних етапів обробки біоЕкспериментальних тварин розподіляють на 5 логічного матеріалу, що, окрім використання додагруп: ткового устаткування та реагентів, може 1) інтактні, призводити до змін досліджуваних речовин; 2) ті, що будуть забиті через 5 хвилин після по друге, порушення цілісності тканини гіпотапочатку іммобілізації, ламусу не дозволяє вивчати показники розподілу 3) через 15 хвилин, вазопресину в окремих нейронах, волокнах та те4) через 60 хвилин, рміналях. 5) через 240 хвилин. В основу корисної моделі поставлено задачу Одразу після забою мозок швидко виймають удосконалення способу оцінки функціональної та занурюють в фіксатор Буена, проводять станактивності вазопресинергічної системи гіпоталадартну гістологічну обробку та готують зрізи товмусу шляхом встановлення найбільш інформативщиною 14мкм. Після депарафінізації наносять роних показників флюоресценції імуногістохімічно зчин, який містить антитіла до аргінін-вазопресину. оброблених зрізів мозку щурів, цю забезпечить Після 24-годинної інкубації при t=4°C зрізи промипідвищення ефективності вивчення морфології та вають фосфатним буфером (рН=7,4) та наносять функціонування цієї системи, буде сприяти отривторинні антитіла, що кон'юговані з флюоресцеїн манню більш достовірних даних та розширить інізотіоцианатом. Готовий мікропрепарат досліджуформативність імуногістохімічного метода. ють в флюоресцентному мікроскопі ( ex 485 нм, Поставлена задача вирішується тим, що у 515 нм) із застосуванням безімерсійного em способі, який включає проведення імуногістохімічоб'єктиву зі збільшенням 40-64 крат. Мікрофотогного дослідження зрізів мозку, визначення вмісту рафії, які отримують за допомогою монохромної вазопресину в супраоптичному та паравентрикувідеокамери з 8-бітною CCD-матрицєю (не менше лярному ядрі гіпоталамусу, та визначення кількіс768 512 пікселей, чутливість 0,02 люкса), зберіних характеристик синтезу вазопресину новим є гаются у пам'яті комп'ютера. те, що додатково проводять кількісну оцінку флюДля відокремлення щільнорозташованих нейоресценції імуногістохімічно оброблених зрізів моронів здійснюється маркірування клітин у кожному зку самців щурів, що зазнали 30-хвилинного іммокадрі. В подальшому, програмою аналізу зобрабілізаційного стресу, яку проводять з жень в автоматичному режимі визначаються зони використанням флюоресцентного мікроскопу з статистичне значимої флюоресценції та в межах хвилею збудження ex 485 нм та хвилею емісії цих зон здійснюється ідентифікація окремих ней515 нм, проводять розрахунок показників em ронів (за даними маркірування) та нервових воло„Концентрація" та „Вміст", які визначають у щурів кон чи терміналей. Кожен нейрон, окремі нервові через 05 хвилин після початку жорсткої іммобіліволокна, терміналі та їх скупчення в подальшому зації і, якщо їх значення становлять менше ніж інтерпретуються як окремі об'єкти. Для кожного 0.051±0.009 Оіф та 7.020±3.08 Оіф мкм2 відповідно, об'єкту вимірюється концентрація (як середня веконстатують гіперсекрецію, а при більш високих личина яскравості флюоресценції кожного пікслезначеннях вищезазначених показників роблять лю, що визначається в умовних одиницях іммуновисновок про затримку секреції вазопресину. флюоресценції - Оіф) та вміст нейропептиду (як Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю сумарна величина яркості флюоресценції всіх пікознак, що заявляються, та технічним результатом слелей, що визначається в умовних одиницях імполягає у такому: мунофлюоресценції на мкм2 - Оіф мкм2). В пода- використання алгоритму автоматичної комльшому, у межах кожної з структур, що п'ютерної кількісної оцінки флюоресценції дозвовивчаються, підраховують щільність розташування ляє максимізувати об'єктивність отриманих даних; нейропептид-позитивних нервових волокон та те- запропонований метод оцінки флюоресценції рміналей (як відсоткове відношення площі з іммуможе бути використаний для дослідження функцінофлюоресцентнім матеріалом терміналей та воонування будь-яких гормон-продукуючих структур локон до загальної площі зрізів ядра мозку; гіпоталамуса). Значення показників „Концентрація" - виявлено найбільш інформативні параметри та „Вміст" в нейронах інтактних тварин в СОЯ ста(концентрація, вміст), що відображають функціоновить 0.054±0.011 Оіф та 9.219±4.66 Оіф мкм2 нальний стан нейронів гіпоталамусу; відповідно та в нейронах ПВЯ 0.066±0.013 Оіф та - встановлено певні терміни секреторної акти14.671±6.87 Оіф мкм2 відповідно. Стрес, що спривності, протягом яких доцільно вивчення секреточинений іммобілізацією, призводить до секреції рних процесів вазопресин-синтезуючих нейронів вазопресину нейронами гіпоталамусу, що проявСОЯ та ПВЯ; ляється вірогідним зниженням (р