Спосіб отримання препарату з медичних п’явок, володіючого тромболітичною, антитромболітичною, гіпотезивною та анальгізуючою дією

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения биологически активных веществ. Известен способ получения препарата из медицинской пиявки, обладающего антитромболитическим, тромболитическим и антиатеросклеротическим действием, при котором медицинских пиявок многократно промывают дистиллированной водой или физиологическим раствором, замораживают при температуре не выше -15°С, лиофильно сушат, растирают в порошок и просеивают через сито с размером пор 2 мм [1]. Данный способ взят нами в качестве прототипа. Но он имеет следующие недостатки: - плохая растворимость препарата в водных растворителях; - высокое содержание балластных веществ (фрагменты мембран форменных элементов крови, использованной пиявкой в пищу, осколки оболочки бактерии - симбионта медицинской пиявки и др.); - аллергенность препарата; - низкая активность биологически активных соединений, продуцируемых медицинскими пиявками. В основу изобретения поставлена задача создания способа получения препарата из медицинской пиявки, обладающего тромболитическим, антитромботическим, гипотензивным и анальгизирующим действием. Поставленная задача решается тем, что в способе получения препарата из медицинских пиявок, обладающего тромболитическим, антитромболитическим, гипотензивным и анальгизирующим действием, содержащем замораживание и лиофилизацию сырья, медицинских пиявок гомогенизируют, полученный гомогенат инкубируют в течение 24-48 ч, замораживают, оттаивают, центрифугируют и лиофильно суша т. Приводим конкретные примеры осуществления способа (с граничными параметрами), Пример 1. Взяли 20 пиявок (общий вес 26 г), измельчали с помощью гомогенизатора, оставляли при комнатной температуре (20°С) на 46 ч, дважды подвергали замораживанию и оттаиванию, центрифугировали, собирали надосадочную жидкость и лиофильно сушили. Анализировали активность полученного препарата. Пример 2. Проводили все процедуры, как указано в примере 1, но инкубировали в течение 26 ч. Препарат активен. Пример 3. Инкубировали в течение 52 ч. Препарат активен. Пример 4. Инкубировали в течение 18 ч. Препарат активен. В таблице представлены параметры препарата и его действие в сравнении с прототипом. Их определяли следующим образом. 1. Антитромбиновую активность анализировали по времени изменения времени свертывания 0,3% раствора фибриногена тромбином (тромбиновая единица в 0,1 мл раствора) в присутствии исследуемого препарата. 2. Время рекальцификации анализировали по удлинению времени свертывания 0,2 мп цитратной плазмы 0,025 М СаСе2 в присутствии исследуемого препарата. 3. Активность дестабилазы определяли спектрофотометрически с использованием хромогенного субстрата [2]. 4. Содержание 6 - кето-простогландин определяли по прописи фирмы с использованием радиоиммунологического набора реактивов для анализа содержания простоциклина. 5. Антихимотриптическую, антитрипти-ческую активности определяли по ингибированию казеинолитической активности ферментов в присутствии исследуемых препаратов [3]. 6. Степень тромбообразования определяли по методу Весслера[4]. Тромбообразо-вание стимулировали внутривенным введением активированной стеклом сыворотки крови человека, с последующим стазированием участка яремной вены. Анализировали степень тромбообразования (или тромболизина) визуально по принятой шкале или весовым методом. 7. Снижение артериального давления определяли у крыс в условиях ограниченной подвижности (пластиковый "домик"),* давление определяли в хвостовой вене. 8. Анальгизирующее действие определяли по времени отдергивания хвоста из воды, нагретой до 56°С. Предварительно крысы получали интранозально исследуемый препарат. Полученный по предлагаемому способу препарат имеет активность в 3-4 раза выше, чем препарат, полученный по способу-прототипу, полностью растворяется в дистиллированной воде и не содержит балластных ве ществ.