Спосіб виготовлення асоційованої вакцини проти інфекційної бурсальної хвороби (хвороби гамборо) та ньюкаслської хвороби птиці живої ліофілізованої

Спосіб виготовлення вакцини проти інфекційної бурсальної хвороби та ньюкаслської хвороби птиці живої ліофілізованої, що включає накопи 3 16452 4 цина розфасована у флакони по 5000 доз. 50°С. У камері ліофільної установки утворюють Існує спосіб отримання біопрепарату "Nobilis вакуум 30 Па. Температура підтримується на рівні IB+G+ND (Побіліє 1Б+Г+НХ) - асоційована вакцина 55-60°С. Ліофілізацію проводять від 35-50 годин. проти інфекційного бронхіту, ТБХ та НХ, інактивоПерша фаза ліофілізації 25-35 годин проходить вана" ІВП). Ця вакцина включає накопичення вірупри мінусовій температурі з збільшенням її на 2сної сировини штамів НХ та ІБХ, та має інактиво4°С за годину від мінус 55-66°С до 0°С. Друга фаза вану форму на масляному ад'юванті. Це рішення проходить при плюсовій температурі з поступовим може бути прототипом. Недоліком вакцини є те, збільшенням її на 1-2°С за годину від 0 °С до 18що вакцину необхідно вводити внутрішньом'язево 22°С протягом 10-18 годин під вакуумом. індивідуально, що ускладнює проведення заходів 5. Контролювання якості вакцини за показниспецифічної профілактики. ками: зовнішній вигляд, колір; наявність механічВ основу корисної моделі поставлено задачу них домішок, плісняви, пластівців, зміни консистерозробити спосіб виготовлення вакцини проти ІБХ нції і тріщин флаконів(ампул); наявність вакууму у та НХ птиці живої ліофілізованої, що включає нафлаконах (ампулах); стикування; розчинність, хв; копичення вірусної сировини виробничих штамів масова частка вологи, %; контамінація мікоплазвірусу ІБХ та вірусу НХ, визначення активності мами; контамінація сторонніми вірусами; контамівірусів, додавання стабілізатора, змішування комнація бактеріальною та грибковою мікрофлорою; понентів вакцини, ліофілізацію, шляхом накопивизначення титру імунізуючої дози на одне курча чення вірусної сировини штаму "ХГ-05" вірусу ІБХ для вірусу хвороби Гамборо та вірусу Ньюкаслсь(активність не нижче 10-6 ТЦД 50/см3) та штаму кої хвороби; нешкідливочинність; імуногенна акти"Ла-Сота" вірусу НХ(активність не нижче 10-9 ТЦД вність вакцини; антигенна активність вакцини. 50/см3), в первинно-трипсинізованій культурі фібАналіз рівня техніки щодо патентних та наукоробластів SPF-ембріонів курей (ФЕК), титрування во-технічних джерел інформації дозволяє зробити вірусів на ФЕК, додаванням знежиреного молока висновок, що рішення, яке заявляється відповідає та фізіологічного розчину (pH 7,2), що містить пепумовам патентоспроможності та критерію "нотон, щоб забезпечити спосіб виготовлення вакцивизна". ни живої ліофілізованої проти інфекційної бурсаЗавдяки використанню пропонованого способу льної хвороби та Ньюкаслської хвороби птиці. вакцина проти ІБХ та НХ, володіє, в порівнянні з При використанні способу виготовлення асоціпрототипом, більш високою імуногенною активнісйованої вакцини проти ІБХ та НХ птиці живої ліотю і специфічною безпекою. філізованої досягається висока імуногенність та Досягнення технічного результату від викориснешкідливість вакцини при застосуванні. Після тання пропонованого процесу зумовлюється тим, вакцинації у птиці формується 100% захисний імущо використані високоімуногенні та нешкідливонітет одночасно проти ГБХ та НХ. Вакцинні штами чинні вакцинні штами вірусу ІБХ штам "ХГ-05" та "ХГ-05" вірусу інфекційної бурсальної хвороби та вірусу НХ штам "Ла-Сота", входять до складу вак"Ла-Сота" вірусу Ньюкаслської хвороби, які вхоцини в оптимальних відношеннях. Крім того, вакдять до складу асоційованої вакцини, нереактоцина призначена для специфічної профілактики генні для птиці, мають високу імуногенну та антисаме одночасно ІБХ та НХ. генну активність, не володіють імуносупресивними Спосіб виготовлення вакцини виконується тавластивостями, здатні конкурувати з високовіруким чином. лентними польовими ізолятами, які циркулюють на Приклад 1 території Україні. Для накопичення вірусу Ньюкаслської хвороЗазначений технічний результат досягається би, штам "Ла-Сота" та вірусу хвороби Гамборо, створенням корисної моделі, охарактеризованого штам "ХГ-05" використовували первиннонаступною сукупністю ознак: трипсинізовану культуру фібробластів SPE1. Накопичення вірусної сировини штаму "ХГембріонів курей (ФЕК). 05" вірусу ІБХ та штаму "Ла-Сота" вірусу НХ в перПервинно-трипсинізовану культуру фібробласвинно-трипсинізованій культурі фібробластів SPFтів SPF-ембріонів курей готували методом, запроембріонів курей; понованим Dulbeco І Voget у модифікації Ягнера 2. Визначення біологічної активності штаму [Сюрин В.М. та ін. Методи лабораторної діагности"ХГ-05" вірусу ІБХ та штаму "Ла-Сота" вірусу НХ ки вірусних хвороб тварин. // М., 1986. C.82-140]. титруванням на ФЕК; Використовували первинно-трипсинізовану куль3. Введення до складу вакцин оптимального туру на рівні 3-5 субпасажу. співвідношення вірусу ІБХ, вірусу НХ та стабілізаПриклад 2 торів, а саме: 0,5 літра вірусної сировини ІБХ (з Для визначення активності у стерильних умоактивністю не нижче 10-6 ТЦД 50/см3), 0,5 літра вах готували серійні розведення вірусів від 10-1 до вірусної сировини НХ (активністю не нижче 10-9 10-10. Для цього у флакони вносили по 9см3 підт3 ТЦД 50/см ), 2,5 літра знежиреного молока та 6,5 римуючого живильного середовища. У перший літра фізіологічного розчину (pH 7,2), що містить флакон вносили 1см вірусутримуючого матеріалу, 100,0 грам пептону; що містить вірус хвороби Гамборо або Ньюкаслсь4. Оптимізація режиму ліофілізації вакцини. кої хвороби. Після троєкратного піпетування 1см Перед ліофілізацією флакони (ампули) заморожупереносили у другий флакон і так подальше. Кожють при мінус 40-50°С протягом 4-5 годин, потім ним розведенням вірусу заражали по 5 пробірок з кювети з замороженою вакциною переносять у моношаром клітин культури ФЕК в об'ємі 0,2см3. камеру ліофільної установки типа ТГ-50, КС-30, Контроль досліду - 20 пробірок з культурою ФЕК, в ОЕ-950, яку попередньо охолоджують до мінус які вводили по 0,2см підтримуючого середовища. 5 16452 6 Пробірки інкубували при температурі 37°С. При ліду). мікроскопії враховували наявність або відсутність Через 21 день після імунізації, курчат першої характерних для вірусу ІБХ та вірусу НХ ознак цивакцинованої групи та третьої не вакцинованої топатичної дії на клітини культури. Гамборо не заражали вірулентним штамом вірусу хвороби нижче 10-6 ТЦД 50/см3. Гамборо у дозі 1000ЛД 50/см3 інтраназально по 3 Приклад 3 0,2см , курчат другої вакцинованої групи та четвеВакцину контролювали за показниками: зовніртої не вакцинованої заражали вірулентним шташній вигляд, колір; наявність механічних домішок, мом вірусу Ньюкаслської хвороби у дозі 1000ЛД плісняви, пластівців, зміни консистенції і тріщин 50/см3 інтраназально по 0,2см3. флаконів(ампул); наявність вакууму у флаконах Протягом 14 днів після зараження вірулентним (ампулах); стикування; розчинність; масова частка вірусом серед вакцинованих курчат 90% повинні вологи; контамінація мікоплазмами; контамінація залишатись клінічно здоровими, а у не вакциновасторонніми вірусами; контамінація бактеріальною них курчат повинні спостерігатися ознаки захвота грибковою мікрофлорою; визначення титру імурювання та загибель. нізуючої дози на одне курча для вірусу хвороби Вакцина призначена для специфічної профіГамборо та вірусу Ньюкаслської хвороби; нешкідлактики курчат проти інфекційної бурсальної хволивість; імуногенна активність; антигенна активроби та Ньюкаслської хвороби. ність. Щепленню підлягає лише клінічно здорова Приклад 4 птиця 10-17-денного віку, незалежно від її породи. Для контролю відсутності контамінації сторонДія підсилення імунітету рекомендується повторне німи вірусами розведену вакцину вводили по щеплення провести через 2 тижня після першої 0,2см у 10 пробірок з клітинами культури, в 10 імунізації. пробірок з клітинами культури ФЕК, 15 ембріонам Вакцину застосовують методом випоювання із 4-6-и-денного віку у жовток, 15 ембріонам 8-9-ирозрахунку одна доза в 10см3 кип'яченої води кімденного віку в алантоїсну порожнину, 15 ембріонатної температури на одну голову. Птицю перед нам 11-12-денного віку на ХАО. вакцинації витримують без води і корму на протязі Контроль досліду - контрольні ембріони та 3-5 годин. Годівля птиці дозволяється через 2 гопробірки з культурами (по 10 ембріонів на кожну дини після вакцинації. Імунітет настає через 10-14 вікову групу та 10 пробірок кожної культури) - їм днів після щеплення. вводили стерильний фізіологічний розчин (підтриВакцинація може бути не ефективною, коли у муюче живильне середовище). Загибель ембріонів пташнику вирощують птицю з різницею у віці більпротягом 24 годин вважалась неспецифічною. ше 5 днів, при прояві кокцидіозу, дефіциті вітамінів Проводили 3 пасажі дослідного матеріалу. Е, К, А, та групи В, при рівні протеїну нижче норПри зараженні курячих зародків на різних мативного та іншими порушеннями технології годістроках інкубації не повинні спостерігатися патовлі та утримання. морфологічні зміни або їх загибель. При інфікуСпосіб полягає в підвищенні імуногенної активанні культур клітин не повинні бути ознаки ЦПД.. вності та нешкідливості вакцини підбором саме тих Приклад 5. штамів, які нереактогенні для птиці, мають високу Визначення імуногенності вакцини імуногенну та антигенну активність, на володіють Формували 4 групи курчат, по 10 голів у кожімуносупресивними властивостями, здатні конкуній. В 10-14-денному віці курчат першої та другої рувати з високовірулентними польовими ізолятагрупи вакцинували, а курчат третій та четвертої ми, що циркулюють на території України. групи залишали не вакцинованими (контроль дос Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601